分子生物学试验技术考试题库

1、1 一、名词解释.分配常数：又称分配系数，是指一种分析物在两种不相混合溶剂中的平衡常数。2 .多肽链的末端分析：确定多肽链的两末端可作为整条多肽链一级结构测定的标志，分为氨基端分析和竣基端分析。3 .连接酶：指能将双链DNA中一条单链上相邻两核甘酸连接成一条完整的分子的酶。4 .预杂交：在分子杂交实验之前对杂交膜上非样品区域进行封闭，用以降低探针在膜上的非特异性结合。.反转录PCR是将反转录RNA与PCR吉合起来建立的一种PC叱术。首先进行反转录产生cDNA,然后进行常规的PC阪应。5 .稳定表达：外源基因转染真核细胞并整合入基因组后的表达。.基因敲除：是指对一个结构已知但功能未知或未完全知道

2、的基因，从分子水平上设计实验，将该基因从动物的原基因组中去除，或用其它无功能的DNA片断取代，然后从整体观察实验动物表型，推测相应基因的功能。.物理图谱：人类基因组的物理图是指以已知核甘酸序列的DNA片段为“路标”，以碱基对（bp,kb,Mb）作为基本测量单位（图距）的基因组图。6 .质谱图：不同质荷比的离子经质量分析器分开后，到检测器被检测并记录下来，经计算机处理后所表示出的图形。.侧向散射光：激光束照射细胞时，光以90度角散射的讯号，用于检测细胞内部结构属性。7 .离子交换层析：是以离子交换剂为固定相，液体为流动相的系统中进行的层析。8 .Edman降解：从多肽链游离的N末端测定氨基酸残基

3、的序列的过程。9 .又称为限制性核酸内切酶（restrictionendonuclease）:是能够特异识别双链DNA手列并进行切割的一类酶。.电转移：用电泳技术将凝胶中的蛋白质，DNA或RNA条带按原位转移到固体支持物，形成印迹。.多重PCR是在一次反应中加入多对引物，同时扩增一份模板样品中不同序列的PCR过程。10 .融合表达：在表达载体的多克隆位点上连有一段融合表达标签（Tag）,表达产物为融合蛋白（有分N端或者C端融合表达），方便后继的纯化步骤或者检测。.同源重组：发生在DNM源序列之间，有相同或近似碱基序列的DN册子之间的遗传交换。.遗传图谱又称连锁图谱（linkagemap）,它是

4、以具有遗传多态性的遗传标记为“路标”，以遗传学距离为图距的基因组图。11 .碎片离子：广义的碎片离子为由分子离子裂解产生的所有离子。.前向散射光：激光束照射细胞时，光以相对轴较小角度向前方散射的讯号用于检测细胞等离子的表面属性，信号强弱与细胞体积大小成正比。.亲和层析：利用共价连接有特异配体的层析介质分离蛋白质混合物中能特异结合配体的目的蛋白或其他分子的一种层析法。（利用分子与其配体间特殊的、可逆性的亲和结合作用而进行分离的一种层析技术。）12 .蛋白质的部分水解：不完全水解得到的水解产物使各种大小不等的肽段和单个氨基酸。.TaqDNA聚合酶：存在于水生嗜热菌（Thermusaquaticus

5、）的嗜热DN臊合酶，可在74C复制DNA在95c仍具有酶活力。该酶可在离体条件下，以DNA为模板，延伸引物，合成双链DNA这个酶只有5'一3'DNA聚合酶活性和5'一3'的外切酶活性，缺少3'一5'的外切酶活性。13 .探针：在分子杂交中用来检测互补序列的带有标记的单链DNA或RNA片段。14 .引物：在多聚酶链式反应中，用于引导脱氧核糖核酸合成的一段核甘酸序列。15 .包含体：包埋病毒粒子具一定形状和大小的蛋白结晶体，在相差显微镜下呈现强的折光性，由单一多肽构成。16 .转基因动物：通过基因转移技术获得的整合有外源基因的动物个体。.序列标签：基

6、因组中任何单拷贝的长度在100500bp之间的DNA歹U,与核酸内切酶识别序列相关联。17 .基峰：质谱图中表现为最高丰度离子的峰。18 .短通滤片：是一种能让短波方向的光透过，长波方向的截止的滤光片.19 .凝胶过滤：利用凝胶的网状结构根据被分离物质分子大小进行分离的一种方法。20 .蛋白质的完全水解：彻底水解得到的水解产物为各种氨基酸的混合物.末端脱氧核甘酸转移酶：不需要模板，以dNTP为底物催化脱氧核糖核甘酸依次加到DNA链（片段）3'-OH端的酶。.切口平移：制备标记DNA勺一种方法。先用DNA®使DNAZ链上形成不对称的切口，再利用DN咪合酶I的5'-3&#

7、39;外切酶活性将切口处的5'-P-核甘酸逐个切除，同时其DNA聚合酶活性又不断将新的含标记的核甘酸按碱基配对原则加入形成新链，这样就使缺口不断向3'端移动，同时标记了DNA.退火：两条单链多核甘酸通过互补碱基之间的氢键形成双链分子的过程。可发生在同一来源或不同来源核酸链之间，可以形成双链DNA分子、双链RNA或DNA-RN赊交分子。21 .瞬间表达：转染的DNA不与宿主染色体整合，不能随宿主基因组的复制而扩增，只是临时在一个相对短的时间内大量扩增，只能在细胞内维持两三天。22 .嵌合体：一种含有两种以上基因型组织的机体，可能是基因突变、染色体异常分离或移植的结果。23 .序列

8、图谱：以某一染色体DNA±所含的全部碱基序列绘制图谱，包括：转录序列和非转录序列.分子离子：有机质谱分析中，化合物分子失去一个电子形成的离子.长通滤片：是一种能让长波方向的光透过，短波方向的截止的滤光片.24 .基因敲入：利用基因同源重组，将外源有功能基因（基因组原先不存在、或已失活的基因），转入细胞与基因组中的同源序列进行同源重组，插入到基因组中，在细胞内获得表达的技术。.缺口平移：缺口翻译法或切口平移法是实验室最常用的一种脱氧核糖核酸探针标记法。利用E.coliDNA多聚酶I的多种酶促活性将标记的dNTP掺入到新合成的DNA链中第页程10页从而形成高比活性的均匀标记的DNAa针。

9、线状、超螺旋及带缺口的环状双链DNA均可作为缺口平移法的模版。.随机合成终止法.化学断裂法：化学断裂法化学断裂法是采用特殊的化学试剂，将DNM段分别从特定碱基部分裂解，得到从同一标记端开始，以特定碱基结尾的一系列长短不一的DNA片段(MaxanGilbert,1977)。利用聚丙烯酰胺凝胶电泳使它们按大小分离，根据放射自显影条带的相对位置和裂解专一性读出DNA列。25 .有效成分：指一种混合物中，对生物体代谢或者化学反应起作用的成分。26 .杂质：物质分离过程中除所要的目的产物外的物质总称为杂质。27 .盐析：在高盐浓度下，蛋白质溶解度随盐浓度的升高而降低的过程这种现象称为盐析。28 .盐溶：

10、酶蛋白可溶于水，而且在低浓度的盐存在的条件下，酶在水中的溶解度随盐浓度的升高而增加.塔板理论：塔板理论是色谱学的基础理论，塔板理论将色谱柱看作一个分储塔，待分离组分在分储塔的塔板间移动，在每一个塔板内组分分子在固定相和流动相之间形成平衡，随着流动相的流动，组分分子不断从一个塔板移动到下一个塔板，并不断形成新的平衡。一个色谱柱的塔板数越多，则其分离效果就越好。时，不同物质在两相中的分布会不同。29 .启动子：在DNA子中，RNA聚合酶能够结合并导致转录起始的序列。.加尾信号：加尾信号-多聚A尾巴真核生物mRNA勺3'端都有一段多聚A尾巴(polyAtail),这种尾巴不由基因编码，而是在

11、转录后加到mRNAh的。加尾过程受位于终止密码3'端的加尾信号序列所控制。30 .绝缘子一种顺式作用元件。长约数百个核甘酸对，通常位于启动子正调控元件或负调控元件之间的一种调控序列。.核糖体识别位点：核糖体识别并结合信使核糖核酸的位点。原核生物信使核糖核酸起始密码子的上游含有核糖体识别和结合序列；真核生物信使核糖核酸的5'帽子结构对核糖体的识别起一定作用。.体外表达：是基因的体外转录和翻译是20世纪70年代发展起来的一项分子生物学和细胞生物学实验技术，是研究离体条件下(非细胞体系)基因表达情况的理想体系。.报告基因(reportergene):是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基

12、因，也就是说，是一个其表达产物非常容易被鉴定的基因。把它的编码序列和基因表达调节序列相融合形成嵌合基因，或与其它目的基因相融合，在调控序列控制下进行表达，从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控，筛选得到转化体。.蓝白筛选由“-互补而产生的LacZ+细菌在诱导剂IPTG的作用下，在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落，因而易于识别。然而，当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后，几乎不可避免地导致无a-互补能力的氨基端片段，使得带有重组质粒的细菌形成白色菌落。这种重组子的筛选，又称为蓝白斑筛选。.基因文库是指包含了一个生物细胞中全部DN际列的片段与载体连接构成重组DNA子经转化宿主细胞后所形成

13、的克隆群体。31 .基因文库的完整性是指能从文库中筛选到至少99%的基因组DNA.基因文库的代表性是指做多少重组子才能代表一个生物所有基因组DNA的全音R.蛋白质组成指纹图：蛋白质序列指纹图谱基于多序列比对的结果，它由比对结果得到一系列相当保守的序列模体构建而成，用来表示蛋白质家族特征。32 .转基因动物：是指基因组中整合有外源基因、外源基因能够表达并按孟德尔定律遗传的一类动物。33 .转基因(transgene):将外源基因整合入动物基因组中的操作。63转染：指真核细胞由于外源DNA掺入而获得新的遗传标志的过程。常规转染技术可分为瞬时转染和稳定转染(永久转染)两大类。64 .基因诊断：针对D

14、NA和或mRNA勺分子诊断，通过分析这些遗传信息分子的序列，从而在分子水平上确定疾病的病因，具高度特异性。65 .基因治疗：利用现代分子生物学技术，将正常的基因导入患者靶细胞使其发挥作用以纠正或补偿基因缺陷或将患者靶细胞异常表达的基因敲除或封闭以达到对疾病进行治疗的方法。.自杀基因：某些基因表达的特异性酶可以催化对真核细胞无毒或低毒的药物前体，转变为具有抑制核酸合成效应的抗代谢药物，进而选择性地将转染了该基因的肿瘤细胞“自杀”。这些基因也相应地被称为“自杀基因”。66 .旁观者效应：“自杀基因”治疗不仅使转导了“自杀基因”的肿瘤细胞在用药后被杀死，而且与其相邻的未转导“自杀基因”的肿瘤细胞也被

15、杀死。.CASPASE:是近年来发现的一组存在于胞质溶胶中的结构上相关的半胱氨酸蛋白酶，它们的一个重要共同点是特异地断开天冬氨酸残基C端的肽键。Caspase在凋亡过程中是起着必不可少的作用，细胞凋亡的过程实际上是Caspase不可逆有限水解底物的级联放大反应过程。67 .蛋白质组：一个基因组、一个细胞或组织或一种生物体所表达的全部蛋白质。蛋白质组学：是蛋白质组概念的延伸，是在整体水平上研究细胞内蛋白质组及其活动规律的科学。68 .差异表达：基因表达调控的一种方式。指在对信号或诱导物做出应答时，选择表达不同的基因，或使基因的表达水平有所不同。69 .显微注射：直接用显微注射器将重组DNA1射到

16、哺乳动物细胞的细胞质或细胞核中的方法。是转基因动物技术中将基因导入哺乳动物细胞的主要方法之一。70 .干细胞：具有无限制自我更新能力、同时也可分化成特定组织的细胞，在细胞发育过程中处于较原始阶段。.酶的比活性：酶纯度的度量标志，是指在特定特定条件下，单位质量蛋白质或RNA具有的酶活力单位数。71 .提纯倍数：反应纯化方法的效率，纯化倍数=纯化后的比活/纯化前的比活。72 .分子杂交：一条DNAII链或RNAII链与另一条单链通过碱基互补形成双链分子的过程。.基因组：一个生物体的基因组是指包含在该生物的DNA（部分病毒是RNA中的全部遗传信息，又称基因体（genome）。基因组包括基因和非编码D

17、NA76.DNA序列标签：STS是基因组中任何单拷贝的长度在100500bp之间的DNA歹U,与核酸内切酶识别序列相关联。.SNP:单核甘酸多态性，是指在基因组上单个核甘酸的变异，形成的遗传标记，其数很多，多态性丰富。指在基因组上单个核甘酸的变异，包括置换、颠换、缺失和插入。.等电聚焦电泳：用特殊的一种缓冲液（两性电解质）在凝胶（常用聚丙烯酰胺凝胶）pI）的pH处（此时（如使用十二烷基硫酸DNAM,就可在切口内制造一个pH梯度，电泳时每种蛋白质就将迁移到等于其等电点（此蛋白质不再带有净的正或负电荷），形成一个很窄的区带。.变性凝胶电泳：在DNARNA或蛋白质等生物大分子发生变性钠、尿素、乙二醛

18、等变性剂）的条件下进行的凝胶电泳。.粘性末端：当一种限制性内切酶在一个特异性的碱基序列处切断处留下几个未配对的核甘酸片断，即5'突出。这些片断可以通过重叠的5'末端形成的氢键相连，或者通过分子内反应环化。因此称这些片断具有粘性，叫做粘性末端。79 .质粒的不相容性：细菌质粒分类的一种标准，指在无选择压力的条件下，亲缘关系密切的不同质粒或同一不相容群的质粒不能稳定共存于同一宿主细胞，在细胞增殖过程中将有一种被排斥的现象。80 .稳定表达：转染的DNAJ宿主染色体整合，能随宿主基因组的复制转录和翻译，并被稳定遗传。81 .多克隆位点：是包含多个（最多20个）限制性酶切位点的一段很短

19、的DNA序列。也称为多位点切头，是基因工程中藏用到的载体质粒的标准配置序列。在多克隆位点中，每个限制性酶切位点通常是唯一的，即他们在一个特定的载体质粒中只出现一次.基因打靶：是利用DNM源重组原理，在基因组中的某一特定部位进行定点的基因重组，是研究基因的功能的有效手段。包括基因敲除（geneknockout）和基因敲入（geneknockin）。82 .慢病毒：属于逆转录病毒科。慢病毒核蛋白质前整合复合物具有噬核特性，病毒基因组运输至细胞核，从而使慢病毒可以感染和在非有丝分裂细胞中复制。这一特性使慢病毒成为基因治疗的转移载体。.短串联重复序列：是第二代遗传标志，染色体上的一种串联重复序列，重复

20、单位是2-6个核甘酸，具有高度多态性，又可以利用PCR技术进行自动化操作，因而为完成人类基因组计划中遗传图采用的主要遗传标志。.限制性酶切片段多态性：是第一代遗传标志一位置上由于核甘酸序列的差别而造成的限制性内切酶酶切位点丢失而体现o第页供10页1.1. 荧光原位杂交：是一种物理图谱绘制方法，使用荧光素标记探针，以检测探针和分裂中期的染色体活分裂中期的染色体或分裂间期的染色质的杂交。荧光原位杂交图谱：用不同颜色标记的各种DNA列（探针），与染色体上的互补序列杂交而不破坏染色体的整体形态，显微镜下观察、辨认荧光标记在染色体上的定位而绘制的图谱。90 .连续克隆系（图）：是最重要的一种图谱，以序列

21、标签为标志。.固相杂交：是核酸分子杂交的一种，指液相中的核酸探针与固定在固相支持物的上的待测核酸片段进行杂交的过程，分为原位杂交和印记杂交两种。91 .液相杂交：是核酸分子杂交的一种，指待测核酸样品与探针在液相中发生杂交。.酶保护分析：主要用来检测染色质结构与功能状态的方法。当染色质结构致密，DNA被组蛋白压缩很紧时，基因是不表达的，同时也对DNA酶不敏感。反之，结构蓬松、活跃进行基因表达的染色质，则易遭DNA酶的降解。92 .对角线电泳：用于分析混合物中某一组分对某些化学处理或光处理后变化的双向电泳技术。样品加样后先从一个方向进行电泳分离，经化学或光处理后，再以与第一次电泳垂直方向进行第二次

22、电泳分离，则经过处理未被修饰的组分皆位于电泳图谱的对角线上。不在对角线处出现的多肽含有由于二硫键氧化而形成的半胱氨酸残基，由此可分析多肽中二硫键位置。93 .分光光度法：通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析的方法。.Ti质粒：是在根瘤土壤杆菌细胞中存在的一种染色体外自主复制的环状双链DNA分子。它控制根瘤的形成，可作为基因工程的载体。.Klenow片段：E.coliDNA聚合酶I经胰蛋白酶或枯草杆菌蛋白酶部分水解生成的，保存了5'-3'聚合酶和3'-5'外切酶活性，但缺少5'-3'外切酶活性。.分子离

23、子：有机质谱分析中，化合物分子通过某种电离方式失去一个外层电价电子形成的带正电荷的离子，常用M.+表示。94 .碎片离子：广义的碎片离子为由分子离子裂解产生的所有离子。95 .基峰：质谱图中表现为最高丰度离子的峰。计算各峰相对值时常以基峰为100.二、填空.在生物大分子提取时，材料的选择原则是（含有效成分丰富、稳定性好）、（来源丰富，保持新鲜）（适合加工提取）和（有经济利用价值）。1 .YAC的三个主要功能成份分别是（端粒）、（着丝粒）和（ARS元件）。2 .从功能上可将Caspase分为（ICE亚类）、（凋亡启动亚类）和（凋亡效应亚类）三大类。.限制酶切割DNAB产生的切口有（平末端）、（3

24、'粘性末端）和（5'粘性末端）三种形式。3 .印迹技术常用的固相支持物分别是（尼龙膜）和（硝酸纤维素膜）。4 .进行生物活性物质提取时，动物性来源主要有（）、（）、（）和（）。第页铁10页）、（-6）和（-9）位置最好.Kozak规则表明在起始密码子上游的（-3是G。.流式细胞仪用滤片减少荧光干扰，这些滤片分别是（长通滤片）、（短通滤片）和（带通滤片）。.基因工程中使用的连接酶有（T4DNA1接酶）和（大肠杆菌连接酶），其中以（T4DNA隹接酶）更常用。5 .按杂交介质的不同可将杂交分为（固相杂交）和（液相杂交）两类。6 .生物活性物质提取时必需同时建立一套有效的检测手段，常用

25、的技术有（PCR）、（电泳技术）、（免疫标记技术）及（）。.转基因的三个层次分别是（细菌转基因）、（离体真核细胞转基因）和（生物转基因）。.流式细胞仪主要由（流动室和液流）系统、（激光源和光学）系统、光电管及检测系统、计算机和分析系统以及（细胞分选系统）系统等五部分组成。.连接酶连接目的基因和载体时需要能量，（T4DNA连接酶）连接酶以ATP为能量形式，而（大肠杆菌连接酶）连接酶则以（NAD+）供能。7 .三种印迹技术的名称分别是（Southern）、（Northern）和（Western）。8 .细胞破碎的方法主要有（机械破碎法）（物理破碎法）、（化学破碎法）、（酶解法）。.转基因动物的主要

26、用途有（疾病型转基因动物）、（利用转基因动物制药）、（动物改良型）和基础生物学研究。.流式细胞检测时三个重要的参数分别代表FS（前向散射）、SS（侧向散射）和FL（每条线路上的光强）。.连接酶（大肠杆菌连接酶）只能连接粘性末端，而（T4DNA连接酶）即能连接粘端又能连接平端。9 .三种印迹技术检测的目的物分别为（Southern测蛋白）、（Northern测RNA）和（western-测DNA）。10 .DNA序列测定的主要方法有（sanger法）、（Maxam-Gilbert化学降解法）、（基因芯片技术）及（PCR1I序）等。.双脱氧合成终止法是在不同体系的底物中加入一种（ddNTP）,在D

27、N蛤成过程中聚合酶随机终止合成反应，这个体系中每一条链都以（相应的ddNTP）结尾，经电泳后可（不同片段末端的ddNTP）读出DNA勺序列。.化学断裂法利用特异的选择性试剂断裂DNA链，其中喋吟选择试剂为（甲酸），喀咤选择性试剂为（肿）。.PCR时，为了避免假阳性结果的出现需要分别做（阴性对照）、（阳性对照）和（试剂对照）三个对照。11 .PCR的一个循环包含（变性）、（退火）和（延伸）三个过程。12 .常用的测定蛋白质含量的方法有（凯氏定氮法）、（Lowry法）、（紫外光谱吸收法）及（考马斯亮蓝染色法）等。13 .基因组计划所作的四张图分别是（物理图）、（遗传图）、（转录图）和（序列图）。1

28、4 .遗传图作图时所用的遗传标记分别是（SNP）、（STR）和（RFLP）。.物理图作图的常用方法为（荧光原位杂交作图）、（限制性酶切作图）、（辐射杂交作图）及（稀有切点限制作图）。15 .原核细胞常用的四个表达系统分别是（大肠杆菌表达系统）、（链霉菌表达系统）、（芽抱杆菌表达系统）和（蓝藻表达系统）。16 .大肠杆菌表达载体构建时必要的顺式元件有（启动子和终止子）（核糖体结合位点）、（复制子）及（筛选标记）等。17 .活化的CASPASE是由同源（4）聚体组成，酶分子中含有（半胱氨酸）残基，作用的底物分子中含有（天冬氨酸）残基。18 .不连续电泳的三个效应分别是（浓缩效应）、（分子筛效应）和

29、（电荷效应）。.转基因动物制备过程中，转基因的方法主要有（微量注射）、（胚胎干细胞法）、（生殖细胞载体法）、（逆转录和慢病毒转染法）、（精子载体法）、（受体介导法）等。19 .基因敲除技术是建立在（胚胎干细胞植入）、（胚胎显微操作技术）和（基因重组）三个技术的基础上的边缘技术。36.酵母质粒载体的主要类型有（YIp）、（YEp）、（YR©和（YC©。三、选择题C1.提出双脱氧法测DNA一级结构的科学家是AMaxamBGilbertCSangerDChargaffECrickA2.原核表达系统中不包括A金黄色葡萄球菌B大肠杆菌C芽抱杆菌D蓝藻E链霉菌C3.构建真核细胞表达载体

30、时不需要的顺式元件是A启动子B筛选标记CSD序列D加尾信号E增强子C4.随机引物一般是由6个核甘酸组成的片段，原则上可设计多少种这样的引物A42B44C46D48E410C5.蛋白质序列测定时对蛋白质的纯度要求达到A95%B96%C97%D98%E99%B6.人类基因组计划是哪年开始实施的A1985B1990C1995D1997E2003B7.胰蛋白酶专一性位点是由下列哪种氨基酸年形成的肽键A甲硫氨酸B赖氨酸C苯丙氨酸D亮氨酸E苏氨酸B8.最早构建的质粒载体是ApUCBpBR322CpUR278DpGPD-2E柯斯质粒C9.转基因动物制备时，能使目的基因表达不影响邻近基因表达的元件是A启动子B

31、增强子C绝缘子D沉默子EKozak序列A10.PCR引物设计时，按经验，引物自身存在的连续互补序列一般不超过A3bpB5bpC7bpD9bpE10bpA11.双脱氧合成终止法测DNA列时，加A体系中所得到的DNA段都是以哪个核甘酸结尾AABCCGDTEUC12.原核细胞mRNAf核糖体特异结合的序列称为AKozak序列B启动子CSD序列D起始密码E帽子结构C13.与分泌表达相关的元件是A启动子B核糖体识别位点C信号肽序列D报告基因E加尾信号B14.能检测不同细胞表达区别的PCR技术是A彩色PCRB差异显示PCRC原位PCRD不对称PCRE定量PCRD15.蛋白质组成分析时，酸水解的主要缺点是破坏了下列哪种氨基酸A丝氨酸B脯氨酸C组氨酸D色氨酸E酪氨酸E16.人类基因组计划是哪年完成的A1985B1990C1995D1997E2003C17.胃蛋白酶专一性位点是由下列哪种氨基酸年形成的肽键A甲硫氨酸B赖氨酸C苯丙氨酸D亮氨酸E苏氨酸D18.植物基因工程中使用的基因载体是A质粒B粘粒C穿梭质粒DTi质粒EF质粒C19.KOZAK序列作用是A启动子B核糖体结合位点C帽