革兰氏阴性球菌.

1、第七章 革兰阴性球菌脑膜炎奈瑟菌N. meningitismeningococcus奈瑟菌属奈瑟菌属 （Neisseria）奈瑟氏菌属是一群革兰阴性球菌，常成双排列，无鞭毛，无芽胞，有菌毛人类为奈瑟氏菌属的自然宿主，对人致病的只有脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌，两种细菌DNA序列有70的同源性主要区别点为，淋病奈瑟菌寄居于尿道黏膜，引起泌尿生殖系统疾病；而脑膜炎奈瑟菌和其他奈瑟菌和其他奈瑟菌均存在于鼻咽腔黏膜。脑膜炎奈瑟菌有多糖成分脑膜炎双球菌形态与染色 G- ，0.6-0.8m 肾形或豆形，成双排列，凹面相对； 病人脑脊液（CSF）中典型，多位于中性粒细胞内； 无鞭毛和芽胞；新分离株具有荚膜和菌毛

2、培养特性与生化反应 培养特性 专性需氧。营养要求高。最常用的培养基是巧克力色培养基 生化反应 可产生自溶酶，人工培养时若不及时移种，数日后菌体自溶抗原构造、抵抗力致病性与免疫性 致病物质 荚膜 菌毛 内毒素 所致疾病 流行性脑膜炎（简称流脑） 人类是唯一的易感宿主 免疫性 6月2岁年龄组婴儿免疫力最低，是易感人群脑膜炎奈瑟菌鼻咽腔繁殖繁殖入血菌/ /败血症中枢神经系统主要侵犯蛛网膜暴发型脑膜炎微循环衰竭微循环衰竭、内毒素休克内毒素休克、DICDIC儿童和成人的脑膜炎症状微生物学检查法 标本 直接涂片镜检 如镜下见到中性粒细胞内、外有革兰阴性双球菌，即可作出初步诊断 分离培养与鉴定 巧克力色血琼

3、脂平板 快速诊断法对流免疫电泳SPA协同凝集试验脑膜炎奈瑟菌（N.meningitidis)脑膜炎奈瑟菌（N.meningitidis)革兰阴性双球菌,肾形或豆形生物学性状生物学性状形态染色： G- ，呈肾型，成双排列（凹面相对，凸面相背），有荚膜及菌毛 培养特性 营养要求较高，血平板或巧克力平板或卵黄双抗平板，形成光滑透明“露滴样”菌落专性需氧，510%CO2，35-37（40 30均不生长）pH7.47.6易产生自溶酶生物学性状生物学性状n生化反应：氧化酶及触酶（+），分解葡萄糖和麦芽糖n抗原和分类：根据荚膜多糖群特异性抗原的不同可分为13个血清群，根据膜蛋白不同，各血清群又可分为若干血清

4、型n抵抗力：很弱，对热、冷、干燥和消毒剂极度敏感脑膜炎奈瑟菌（N.meningitidis)氧化酶试验阳性：紫红色 阴性：无色氧化酶： +DNA酶： - 营养琼脂生长： -葡萄糖： +麦芽糖： +防治原则 综合性预防措施 隔离病人、检查带菌者、预防性投药，室内通风 流脑疫苗： 6个月-2岁接种两次，间隔1月 A群脑膜炎球菌多糖抗原。制备疫苗 青霉素、磺胺大剂量治疗 脑膜炎接种淋病奈瑟菌，淋球菌Gonococcus脑膜炎奈瑟菌 淋病奈瑟菌 相似点： 生物学性状 差异： 荚膜：有荚膜（脑），分离初期有荚膜（淋） 质粒：很少有质粒（脑），有质粒（淋）； 所致疾病：引起脑膜炎（脑），引起泌尿生殖系统疾

5、病（淋）。 感染部位不同，标本取材部位不同两者关系两者关系形态与染色 革兰染色阴性，0.6-0.8m 肾形、成双排列 有菌毛，无芽胞和鞭毛，新分离株有荚膜男性急性淋病患者尿道分泌物涂片（革兰染色）男性慢性淋病患者尿道分泌物涂片（革兰染色）女性急性淋病患者阴道分泌物涂片（革兰染色）培养特性 生化反应 培养特性 需氧，营养要求高。常用的培养基为巧克力色血液琼脂平板 生化反应 除葡萄糖外，不分解其它糖类与脑膜炎奈瑟菌相似，营养要求更高，只能在巧克力平板及专用培养基上生长，形成灰白色细小S型呈滴露样菌落主要菌体表面抗原构造 菌毛 与粘附有关，免疫原性不强 脂多糖抗原 经常变异，相应抗体不能防止再感染

6、外膜蛋白 PI：主要外膜蛋白，将淋病奈瑟菌分为18个血清型 PII：吸附易感细菌的蛋白致病物质 菌毛 脂多糖（内毒素） IgA1蛋白酶所致疾病 淋病 人类是淋球菌唯一的天然宿主 成人淋病绝大多数通过性接触感染，是重要的性传播疾病（sexually transmitted disease，STD） 新生儿淋球菌性结膜炎 “脓漏眼”微生物学检查法 标本 保暖（运送时35C保温）、保湿、立即送检 直接涂片镜检 分离培养与鉴定 巧克力色培养基快速诊断法 ELISA法、核酸杂交、PCR技术 生物学特性生物学特性 形态染色：与脑膜炎奈瑟菌相似， G，双球菌，咖啡豆状，有荚膜和菌毛，无芽胞，无鞭毛 脓汁标本

7、中 急性病人：细菌位于中性粒细胞内 慢性病人：细菌位于细胞外 培养特性：与脑膜炎奈瑟菌相似，营养要求更高，只能在巧克力平板及专用培养基上生长，形成灰白色细小S型菌落 生化反应：氧化酶（+），只分解葡萄糖，不分解麦芽糖（脑膜炎奈瑟菌分解麦芽糖）等其它糖类 抗原及分类：以外膜蛋白抗原分16个血清型 抵抗力：极弱（与脑膜炎奈瑟菌相似）淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌鉴定依据淋病奈瑟菌鉴定依据： 1. 涂片染色为革兰阴性双球菌； 2. 巧克力平板上为半透明、灰白色、凸 起滴露状菌落；3. 氧化酶及触酶均阳性； 4. 只分解葡萄糖，产酸不产气；5. 血清学试验阳性。防治原则 预防淋病应取缔娼妓、防止不正当的两性关系

8、 新生儿1%硝酸银滴眼，或红霉素、四环素眼药膏 药物首选青霉素，但多有耐药性，应用新型青霉素族抗生素比比 较较 内内 容容 脑膜炎奈瑟菌脑膜炎奈瑟菌 淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌 生生物物学学性性状状 形态结构形态结构 G双球菌；有荚膜、菌毛双球菌；有荚膜、菌毛(新新) 同左同左 培养特性培养特性 高营养、高营养、5%CO2露滴状、自溶酶露滴状、自溶酶 高营养、高营养、5%CO2 生化反应生化反应 分解葡萄糖、麦芽糖分解葡萄糖、麦芽糖 只分解葡萄糖只分解葡萄糖 抗原抗原与与分类分类 荚膜多糖群特异荚膜多糖群特异Ag外膜蛋白型特异外膜蛋白型特异Ag脂多糖脂多糖Ag核蛋白核蛋白Ag 菌毛蛋白菌毛蛋白Ag脂

9、多糖脂多糖Ag外膜蛋白外膜蛋白Ag (P、P、P) 抵抗力抵抗力 冷、热、干燥、消毒剂均敏感冷、热、干燥、消毒剂均敏感 同左同左 致致病病性性 致病物质致病物质 荚膜、菌毛、内毒素荚膜、菌毛、内毒素 荚膜、菌毛、外膜蛋白、荚膜、菌毛、外膜蛋白、IgA1 所致疾病所致疾病 流行性脑脊膜炎流行性脑脊膜炎 淋病淋病 防治原则防治原则 荚膜多糖疫苗荚膜多糖疫苗 洁身自好洁身自好 脑膜炎奈瑟菌与淋病奈瑟菌比较脑膜炎奈瑟菌与淋病奈瑟菌比较 小 结化脓性球菌化脓性球菌 革兰阳性菌：葡萄球菌，链球菌，肺炎链革兰阳性菌：葡萄球菌，链球菌，肺炎链球菌球菌 革兰阴性菌：脑膜炎奈瑟菌，革兰阴性菌：脑膜炎奈瑟菌， 淋病

10、奈瑟淋病奈瑟菌菌N. gonorrhoeaeN.meningitidisS. pneumoniaestaphylococcusStreptococcus脓汁或喉拭子 涂片、革兰染色、镜检血琼脂平板观察菌落特征及溶血情况生化反应、致病力试验及药敏试验病原性球菌的鉴别 由脑脊液标本中发现中性粒细胞内外有由脑脊液标本中发现中性粒细胞内外有G G- -双球菌双球菌，可初步，可初步诊断为诊断为脑膜炎球菌脑膜炎球菌 由泌尿、生殖系统来源的标本中分离出的由泌尿、生殖系统来源的标本中分离出的G G- -双球菌双球菌，可初，可初步诊断为步诊断为淋球菌淋球菌 37 24h葡萄球菌鉴别 金黄色葡萄球菌 表皮葡萄球菌

11、 色素 金黄色 白色-溶血素 + -血浆凝固酶试验 + -耐热DNA酶试验 + -甘露醇发酵试验 + -致病力 强 弱或无脓汁标本 找出两种菌落 Gram染色 甘露醇发酵试验 菌落小、半透明 、表面光滑、边缘整齐 G+ 、链状 完全溶血 乙型链球菌不溶血 丙型链球菌草绿色不完全溶血环甲型链球菌 肺炎链球菌菊糖发酵试验 -（紫色） +（黄色） 胆汁溶菌试验 -（混浊） +（澄清）喉拭子标本 找出两种菌落 Gram染色痰培养肺炎链球菌检验全程报道姚军微生物检验1.痰涂片（肺炎链球菌镜下）:1.痰涂片（肺炎链球菌镜下）:2.原始培养物18h后菌落（肺炎链球菌菌落）:2.原始培养物18h后菌落（肺炎链

12、球菌菌落）:3.传代后的纯培养物:3.传代后的纯培养物:传代后的菌落直径较首代有些缩小了传代后的菌落直径较首代有些缩小了,菌落湿润程度也有些降低菌落湿润程度也有些降低,但仍然很湿润但仍然很湿润.4.Optochin抑制试验:抑菌环中也微弱的生长了些菌落抑菌环中也微弱的生长了些菌落,但经过涂片发现是口腔球菌但经过涂片发现是口腔球菌.可能是做该试验的同事挑可能是做该试验的同事挑菌落的时候菌落的时候,没把握好没把握好.把杂菌带进去了把杂菌带进去了.尽管如此尽管如此,抑菌环还是非常明显而宽大抑菌环还是非常明显而宽大(22mm).5.生化反应:用的就是普通微量管用的就是普通微量管,在接种前滴加小牛血清在

13、接种前滴加小牛血清1滴滴.5%CO2,35培培养养1824h后读取并记录结果后读取并记录结果.6.肺炎链球菌乳胶凝集试验：左边是测试，右边是阴性对照：7.药敏试验（K-B法）：7.药敏试验（K-B法）：思考题一、填空题：一、填空题：二、是非题：三、选择题：三、选择题：三、选择题：三、选择题：四、名词解释： 1、血浆凝固酶 2、葡萄球菌A蛋白问答题 1、如何从脓汁标本中检出金黄色葡萄球菌，请写出检验程序，鉴定依据？ 2、肺炎链球菌与甲型溶血性链球菌的主要区别有那些？ 3、简述下列细菌的形态特征、首选培养基及主要菌落特点？金黄色葡萄球菌、伤寒沙门菌、霍乱弧菌。 4、流脑患者脑脊液革兰氏染色的镜下特

14、征，如何分离培养及菌落特点？ 5、如何从脓液中检出乙型溶血性链球菌？ 6、简述下列细菌的形态特征、首选培养基及主要菌落特点？肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌、铜绿假单胞菌。培养特性与生化反应 培养特性 专性需氧。营养要求高。最常用的培养基是巧克力色培养基 生化反应 可产生自溶酶，人工培养时若不及时移种，数日后菌体自溶生物学性状生物学性状n生化反应：氧化酶及触酶（+），分解葡萄糖和麦芽糖n抗原和分类：根据荚膜多糖群特异性抗原的不同可分为13个血清群，根据膜蛋白不同，各血清群又可分为若干血清型n抵抗力：很弱，对热、冷、干燥和消毒剂极度敏感脑膜炎奈瑟菌（N.meningitidis)防治原则 综合性预防措施

15、 隔离病人、检查带菌者、预防性投药，室内通风 流脑疫苗： 6个月-2岁接种两次，间隔1月 A群脑膜炎球菌多糖抗原。制备疫苗 青霉素、磺胺大剂量治疗 脑膜炎接种主要菌体表面抗原构造 菌毛 与粘附有关，免疫原性不强 脂多糖抗原 经常变异，相应抗体不能防止再感染 外膜蛋白 PI：主要外膜蛋白，将淋病奈瑟菌分为18个血清型 PII：吸附易感细菌的蛋白比比 较较 内内 容容 脑膜炎奈瑟菌脑膜炎奈瑟菌 淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌 生生物物学学性性状状 形态结构形态结构 G双球菌；有荚膜、菌毛双球菌；有荚膜、菌毛(新新) 同左同左 培养特性培养特性 高营养、高营养、5%CO2露滴状、自溶酶露滴状、自溶酶 高营养、高营养、5%CO2 生化反应生化反应 分解葡萄糖、麦芽糖分解葡萄糖、麦芽糖 只分解葡萄糖只分解葡萄糖 抗原抗原与与分类分类 荚膜多糖群特异荚膜多糖群特异Ag外膜蛋白型特异外膜蛋白型特异Ag脂多糖脂多糖Ag核蛋白核蛋白Ag 菌毛蛋白菌毛蛋白Ag脂多糖脂多糖Ag外膜蛋白外膜蛋白Ag (P、P、P) 抵抗力抵抗力 冷、热、干燥、消毒剂均敏感冷、热、干燥、消毒剂均敏感 同左同左 致致病病性性 致病物质致病物质 荚膜、菌毛、内毒素荚膜、菌毛、内毒素 荚膜、菌毛、外膜蛋白、荚膜、菌毛、外膜蛋白、IgA1 所致疾病所致疾病 流行性脑脊膜炎流行性脑脊膜炎 淋病淋病 防治原则防治原则 荚膜多糖疫苗荚膜