技能训练一单胞藻的形态观察及浓度的测定

1、技能训练一单胞藻的密度的测定微藻培养微藻的计数及培养结果评价任务 教学目标：教学目标：（一）能力目标（一）能力目标1.掌握血球计数板的使用方法掌握血球计数板的使用方法2.掌握小球藻、扁藻、硅藻的计数掌握小球藻、扁藻、硅藻的计数3.通过计数学会评价微藻培养的效果通过计数学会评价微藻培养的效果（二）知识目标（二）知识目标1.掌握微藻的计数原理掌握微藻的计数原理2.微藻生长特点微藻生长特点一、计数方法选择1.1.血球计数板血球计数板2.2.分光光度计的使用分光光度计的使用1.1 血球计数方法此法是利用血球计数板在显微镜下直接进行测定。它观察此法是利用血球计数板在显微镜下直接进行测定。它观察在一定的容

2、积中的微生物的个体数目，然后推算出含藻细在一定的容积中的微生物的个体数目，然后推算出含藻细胞数，包括死活细胞均被计算在内，这样得出结果往往偏胞数，包括死活细胞均被计算在内，这样得出结果往往偏高。这种方法常用于形态个体较大的菌体、微藻、孢子。高。这种方法常用于形态个体较大的菌体、微藻、孢子。1.2血球计数构造显微镜下计数框1mm模式图计数板是一块特制的厚玻璃片，玻片上有四个槽构成三个平计数板是一块特制的厚玻璃片，玻片上有四个槽构成三个平台，中央平台又由一短槽隔成两半，其上各刻有一小方格网，台，中央平台又由一短槽隔成两半，其上各刻有一小方格网，每个方格网共分九个大格，中央的一大格作为计数用，称为每

3、个方格网共分九个大格，中央的一大格作为计数用，称为计数室。计数室。计数室刻度有计数室刻度有2 2种：一种是种：一种是2525中格中格X16X16小格，而另一种为小格，而另一种为1616中中格格X25X25小格，它们都是由小格，它们都是由400400个小格组成。每个大方格边长为个小格组成。每个大方格边长为1mm1mm，则每个大方格面积为，则每个大方格面积为1 1X X1=1mm1=1mm2 2。盖上盖玻片后，载玻。盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间高度为片与盖玻片之间高度为0.1mm,0.1mm,所以每个计数室的体积为所以每个计数室的体积为0.1 0.1 X X 1 1 X 1=0.1X 1=0.

4、1mmmm3 3, ,每个大格有每个大格有400400个小格，所以每个小方格体个小格，所以每个小方格体积为积为0.1/400=1/4000mm0.1/400=1/4000mm3 3=1/4000,000ml=1/4000,000ml。计数原则1.1.取出藻液的原液时一定要混匀取出藻液的原液时一定要混匀!2.2.不同的移液管吸取不同浓度的、不同品种的藻不同的移液管吸取不同浓度的、不同品种的藻液液, ,不要混用不要混用!注意细节操作注意细节操作! ! 3.3.计数小格采取计上不计下，计左不计右的方式计数小格采取计上不计下，计左不计右的方式 血球计数板的分区与分格血球计数板的分区与分格例一例一 例二

5、例二1 1大格大格=16=16中格中格 1 1大格大格=25=25中格中格 =16 =16 X X 2525小格小格 =25 =25 X X 16 16小格小格 =400=400小格小格 =400=400小格小格 *#三、材料与仪器1 1、待测样品：微藻悬液、待测样品：微藻悬液2 2、显微镜，血球计数板，盖玻片等。、显微镜，血球计数板，盖玻片等。四、方法与步骤:1 1、取洁净的血球计数板，在计数室上面盖上盖玻片。、取洁净的血球计数板，在计数室上面盖上盖玻片。2 2、取稀释到一定程度（、取稀释到一定程度（510510个细胞个细胞/ /小格）藻液，从小格）藻液，从盖片边缘滴一小滴，使藻液自行渗入，

6、计数室内不能盖片边缘滴一小滴，使藻液自行渗入，计数室内不能有气泡。先在低倍镜下找到小方格网后，再转换高倍有气泡。先在低倍镜下找到小方格网后，再转换高倍镜观察并计数。镜观察并计数。3 3、如用、如用16 16 X X 2525计数板，只计四个角上中方格的藻细计数板，只计四个角上中方格的藻细胞数。若是胞数。若是25 25 X X 16 16的计数板，除计数四个角上的中格的计数板，除计数四个角上的中格藻细胞数外，还要计算中央中格的菌数。每个样品重藻细胞数外，还要计算中央中格的菌数。每个样品重复计数复计数2323次。计数时应不时调节焦距，才能观察到不次。计数时应不时调节焦距，才能观察到不同深度的细胞。

7、同深度的细胞。4 4、位于格线上的细胞一般只计此格的上方线及左方线上的菌、位于格线上的细胞一般只计此格的上方线及左方线上的菌体。体。5 5、计数方法：、计数方法：样品中细胞数样品中细胞数/ml=/ml=每小格平均细胞数每小格平均细胞数 x 4000 ,000 x x 4000 ,000 x 稀释倍数，稀释倍数，本实验采用本实验采用25 x 1625 x 16规格，要求数这些方格中的全部小格即规格，要求数这些方格中的全部小格即8080个小格。个小格。设：每个中方格的细胞数为设：每个中方格的细胞数为A A，则，则每小格平均细胞数每小格平均细胞数= =（A A1 1+A+A2 2+A+A3 3+A+

8、A4 4+A+A5 5)/80)/80 A A1 1+A+A2 2+A+A3 3+A+A4 4+A+A5 5样品中的细胞数样品中的细胞数/ml= X 4000,000 /ml= X 4000,000 X X 稀释倍数稀释倍数 8080 结果记录：微藻名称微藻名称 总细胞数总细胞数 个个/ml/ml第一个中格第二个中格第三个中格第四个中格第五个中格第一次测定第二次测定平均六、测定注意事项:1 1、测定时，藻液要摇匀，防止藻细胞凝聚沉淀。、测定时，藻液要摇匀，防止藻细胞凝聚沉淀。2 2、位于格线上的藻细胞一般只计此格的上方线及左、位于格线上的藻细胞一般只计此格的上方线及左方线上的菌体。方线上的菌体。血球计数板的清洁血球汁数板使用后血球汁数板使用后, ,用自来水冲洗用自来水冲洗, ,切勿用硬物洗刷切勿用硬物洗刷, ,洗后洗后自行晾干或用吹风机吹干自行晾干或用吹风机吹干, ,或用或用95%95%的乙醇的乙醇, ,无水乙醇无水乙醇, ,丙酮丙酮等有机溶剂脱水使其干燥等有机溶剂脱水使其干燥. .通过镜检观察每小格内是否残通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物留菌体或其他沉淀物. .若不干净若不干净, ,则必须重复清洗直到干净则必须重复清洗直到干净为止为止. . 七、