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1、PCR反应原理及其操作反应原理及其操作.2 .3.4 4 4种种dNTPdNTP混合物混合物 各各200umol/L200umol/L（dATP,dGTP,dCTP,dTTP） 引物引物 各各1010100pmol100pmol 模板模板DNA DNA 0.10.12ug2ug Taq DNATaq DNA聚合酶聚合酶 2.5u2.5u MgMg2+ 2+ 1.5mmol/L1.5mmol/L.5 1. DNA变性变性（90-96）：双链）：双链DNA模板在热作用模板在热作用下，下， 氢键断裂，形成单链氢键断裂，形成单链DNA。2. 退火（复性）退火（复性）（25-65）：系统温度降低，引物与

2、）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部双链。模板结合，形成局部双链。3. 延伸延伸（70-75）：在）：在Taq酶（在酶（在72左右，左右，活性最佳）的作用下，以活性最佳）的作用下，以dNTP为原料，为原料，从引物的从引物的5端端3端延伸，合成与模板互端延伸，合成与模板互补的补的DNA链。链。.6.7.8.9.10.11.12.13 在引物作在引物作用下，用下，Taq酶酶从从引物引物3端端开开始延伸始延伸DNA链，链，即即DNA的合成的合成方向是从子链方向是从子链的的5端自端自3端端延伸的延伸的。实际。实际上就是在体外上就是在体外模拟细胞内模拟细胞内DNA的复制过的复制过程。程。DNA的复的复制需要引物，制需要引物，其主要原因是其主要原因是DNA聚合

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