第23章血细胞分析仪的检测技术及临床应用ppt课件

1、2.3 血细胞分析仪的检测技术及血细胞分析仪的检测技术及临床运用临床运用一、血液的组成和功能：一、血液的组成和功能： 红细胞红细胞RBC内含血内含血红蛋白红蛋白血细胞分为血细胞分为3种种 白细胞白细胞WBC 俗称血球俗称血球 血小板血小板PLT 三者在血液中的数量比约为三者在血液中的数量比约为RBC：WBC：PLT=500：1：30。 Granulocyte 嗜碱性粒细胞嗜碱性粒细胞BasophilWBC又分为又分为 淋巴细胞淋巴细胞25% Lymphcyte 单核细胞单核细胞5% Monocyte 嗜中性粒细胞Neutrophil 粒细胞75% 嗜酸性粒细胞Eosinophil3 3、 7

2、70 0 年年代代计计算算机机技技术术快快速速发发展展，将将血血小小板板计计数数的的繁繁琐琐手手续续（手手工工分分离离富富血血小小板板血血浆浆后后在在进进行行血血小小板板计计数数） ，改改进进为为血血小小板板与与红红细细胞胞同同时时计计数数。 4 4、 8 80 0 年年代代，发发展展迅迅速速，在在 8 8 项项检检测测基基础础上上加加上上红红细细胞胞指指数数、三三个个直直方方图图的的报报告告，不不仅仅提提供供是是否否贫贫血血，且且可可对对贫贫血血的的类类型型和和原原因因进进行行分分析析； 而而且且血血小小板板参参数数对对止止血血和和血血栓栓疾疾病病的的诊诊断断及及一一些些疾疾病病的的疗疗效效

3、观观察察有有重重要要价价值值。 不同年代血液细胞分析仪的检测参数 80年代 90年代白细胞白细胞 WBC WBCWBC WBC 五分群五分群 二分群、三分群二分群、三分群 二分群、三分群二分群、三分群红细胞红细胞 RBCRBC、HGBHGB、HCTHCT、MCV RBCMCV RBC、HGBHGB、HCTHCT、MCV MCV MCH MCH、MCHCMCHC、RDWRDW、HDW MCHHDW MCH、MCHCMCHC、RDWRDW、HDWHDW RET RET、HFRHFR、LFRLFR、MFRMFR血小板血小板 PLTPLT、MPVMPV、PCTPCT、PDW PLTPDW PLT、MP

4、VMPV、PCTPCT、PDWPDW 各种代号的意义各种代号的意义WBC WBC 白细胞总数白细胞总数 PDW PDW 血小板体血小板体积分布宽度积分布宽度RBC RBC 红细胞总数红细胞总数 PCT PCT 血小板比血小板比积积HGB HGB 血红蛋白浓度血红蛋白浓度 HDW HDW 血红蛋白血红蛋白分布宽度分布宽度HCT HCT 红细胞比积红细胞比积 RET RET 网织红细网织红细胞胞MCV MCV 平均红细胞体积平均红细胞体积 HFR HFR 高荧光强高荧光强度网织红细胞度网织红细胞MCH MCH 平均红细胞血红蛋白含量平均红细胞血红蛋白含量 MFR MFR 中荧光强中荧光强度网织红细

5、胞度网织红细胞MCHC MCHC 平均红细胞血红蛋白浓度平均红细胞血红蛋白浓度 LFR LFR 低荧光强低荧光强度网织红细胞度网织红细胞RDW RDW 红细胞体积分布宽度红细胞体积分布宽度 MPV MPV 平均血小平均血小板体积板体积 PLT PLT 血小板总数血小板总数二、三分群血液分析仪的检测原理二、三分群血液分析仪的检测原理 电阻抗法血细胞计数：利用血细胞经过微孔时电阻抗法血细胞计数：利用血细胞经过微孔时瞬间的电阻变化产生脉冲电流而计数。白细胞、瞬间的电阻变化产生脉冲电流而计数。白细胞、红细胞的稀释标本在一个负压的控制下，分别经红细胞的稀释标本在一个负压的控制下，分别经过各自的计数微孔，

6、流入各自通道，然后经过两过各自的计数微孔，流入各自通道，然后经过两个光电传感器，将细胞信号甄别、放大、计数。个光电传感器，将细胞信号甄别、放大、计数。其原理表示图如下图其原理表示图如下图1： 图中阴影部分是稀释标本，稀释液是由图中阴影部分是稀释标本，稀释液是由NaClNaCl等导等导电物质组成的导电液，当图中所示恒流源起作用时，电物质组成的导电液，当图中所示恒流源起作用时，稀释液将和线路一同组成一个回路，由于负压的作用，稀释液将和线路一同组成一个回路，由于负压的作用，血细胞不良导体经过计数微孔时，稀释液被细胞血细胞不良导体经过计数微孔时，稀释液被细胞替代，引起了阻抗的变化，从而在丈量线上产生了

7、电替代，引起了阻抗的变化，从而在丈量线上产生了电脉冲如上图，仪器就记录下此电脉冲的数量及幅脉冲如上图，仪器就记录下此电脉冲的数量及幅度细胞的大小度细胞的大小（1 1） 、微微孔孔管管：在在其其下下端端镶镶有有一一个个标标准准尺尺寸寸大大小小的的红红宝宝石石孔孔。R RB BC C管管道道孔孔径径：8 80 0 微微米米；W WB BC C 管管道道孔孔径径：1 10 00 0 微微米米。易易堵堵塞塞，防防止止堵堵孔孔和和维维护护。 （2 2） 、微微粒粒计计数数：细细胞胞以以外外的的杂杂质质将将被被误误认认为为细细胞胞。保保证证稀稀释释液液的的质质量量和和环环境境的的洁洁净净。 （3 3） 、

8、细细胞胞可可相相互互重重叠叠通通过过微微孔孔，产产生生偏偏差差：血血样样要要充充分分稀稀释释 W WB BC C 1 1: :4 45 50 0，R RB BC C 1 1: :6 62 20 05 5，设设计计上上要要有有纠纠正正偏偏差差的的技技术术。 4、细胞和杂质的鉴别计数：白细胞体积：、细胞和杂质的鉴别计数：白细胞体积：1201000fl，红细胞体积：红细胞体积：8298fl，血小板体积：，血小板体积：230fl。按照脉冲和。按照脉冲和细胞成比例的关系，设置不同的阈值电位门限，对同一细胞成比例的关系，设置不同的阈值电位门限，对同一杯稀释液中细胞成分的电脉冲高低分别计数，并对杂质和细杯稀

9、释液中细胞成分的电脉冲高低分别计数，并对杂质和细胞碎片进展剔除。因白细胞和红细胞的体积大小之间有交叉，胞碎片进展剔除。因白细胞和红细胞的体积大小之间有交叉，故红细胞要用白细胞故红细胞要用白细胞225倍的稀释标本，分别丈量。倍的稀释标本，分别丈量。1 1、 直方图的产生：直方图的产生： 直方图是由测量通过感应区的每个细胞脉冲累积得直方图是由测量通过感应区的每个细胞脉冲累积得到，是反映细胞大小异质性的资料。如图（图到，是反映细胞大小异质性的资料。如图（图 2 2）所示，）所示，左图是示波器显示所分析细胞的脉冲大小， 右图是相应的左图是示波器显示所分析细胞的脉冲大小， 右图是相应的体积分布直方图。体

10、积分布直方图。 淋巴细胞：淋巴细胞：353595fl95fl; ; 中间细胞：中间细胞：9595130fl130fl; ; 粒细胞粒细胞 130fl130fl 依照三群细胞在白细胞体积分布的直方图上所分布区依照三群细胞在白细胞体积分布的直方图上所分布区域的面积，计算得出每群细胞的百分比，并依照白细胞域的面积，计算得出每群细胞的百分比，并依照白细胞计数计数总数，求得每群细胞的绝对值。总数，求得每群细胞的绝对值。 红细胞通过微孔时，形成的相应大小的脉冲，将脉冲的高红细胞通过微孔时，形成的相应大小的脉冲，将脉冲的高度叠加，经换算可得红细胞的比积。有的仪器先以单个细胞高度叠加，经换算可得红细胞的比积。

11、有的仪器先以单个细胞高度计算红细胞平均体积，再乘以红细胞数，得出红细胞比积。度计算红细胞平均体积，再乘以红细胞数，得出红细胞比积。 阻抗法血液分析仪各项参数测试原理，如图（图阻抗法血液分析仪各项参数测试原理，如图（图 4 4） 三、三、 检测参数的代号及临床意义：检测参数的代号及临床意义： 1 1 白细胞计数（白细胞计数（WBCWBC） ：） ：4.4.0 01010. .0 010109 9/L/L（G/LG/L） 静脉血比毛细血管血静脉血比毛细血管血 WBCWBC 数略低。数略低。 2 2 白细胞“三分群（类） ” ：白细胞“三分群（类） ” ： 淋巴细胞群（淋巴细胞群（LYMLYM） ：

12、绝对值） ：绝对值 1.01.03.3G/L3.3G/L，18.718.747%47%。 中间细胞群（中间细胞群（MIDMID） ：绝对值） ：绝对值 0.20.20.7G/L0.7G/L，3.53.57.9%7.9% 粒细胞群（粒细胞群（GRANGRAN） ：绝对值） ：绝对值 1.81.86.4G/L6.4G/L，464676.5%76.5% 3 3 红细胞计数（红细胞计数（RBCRBC） ：） ： 男：男：4.04.05.55.510101212/L(T/L)/L(T/L) 女：女：3.53.55.05.010101212/L(T/L)/L(T/L) 4 4 血红蛋白（血红蛋白（HGBH

13、GB） ：） ： 男：男：120120170g/L170g/L 女：女：110110155g/L155g/L 5 5 红细胞比积（红细胞比积（HCTHCT） ：） ： 男男：0.400.400.500.50 女女：0.350.350.450.45 6 6 红细胞的三项平均指数：红细胞的三项平均指数： 红细胞平均体积（红细胞平均体积（MCVMCV） ：） ：828295fl95fl 红细胞平均血红蛋白量（红细胞平均血红蛋白量（MCHMCH） ：） ：272730Pg30Pg 红细胞平均血红蛋白浓度红细胞平均血红蛋白浓度（MCHMCHC C） ：） ：320320360g/L360g/L 7 7

14、红细胞分布宽度（红细胞分布宽度（RDWRDW） ：） ： 15%15%。 它是由红细胞体积的变异系数表示，比红细胞大小不它是由红细胞体积的变异系数表示，比红细胞大小不均的观察更为客观准确。其增大的临床意义：均的观察更为客观准确。其增大的临床意义： （1 1）用于用于 IDAIDA 诊断与疗效观察：诊断与疗效观察：IDAIDA 时，升高。时，升高。当当 MCVMCV 正正常时，常时，RDWRDW 增大为早期缺铁的指征，补铁后，增大为早期缺铁的指征，补铁后，RDWRDW 正常。正常。 2 用于小细胞低色素性贫血的鉴别诊断：用于小细胞低色素性贫血的鉴别诊断：IDA 时时RDW升高，而轻型地中海贫血时

15、，升高，而轻型地中海贫血时，RDW正常。正常。3 对贫血分类对贫血分类Bessmanff分类法：将分类法：将MCV与与RDW结合对贫血分类更完善。结合对贫血分类更完善。 MCVMCV RDWRDW IDAIDA 巨幼贫巨幼贫 溶贫溶贫 铁粒幼贫血铁粒幼贫血 再障再障 单纯小细胞性贫血单纯小细胞性贫血 8 8 血小板计数（血小板计数（PLTPLT） ：） ：10010030030010109 9/L/L（G/LG/L） 9 9 血小板平均体积（血小板平均体积（MPVMPV） ：） ：9.49.412.5fl12.5fl MPV MPV 应与应与 PLTPLT 相结合进行分析。相结合进行分析。 （

16、1 1） 鉴别血小板减少的原因：鉴别血小板减少的原因： 【1 1】 骨髓造血功能损伤时，骨髓造血功能损伤时，PLTPLT，MPVMPV； 【2 2】 血小板在周围血中破坏增多时，血小板在周围血中破坏增多时，PLTPLT，MPVMPV； 【3 3】 血小板分布异常时，血小板分布异常时，PLTPLT，MPVMPV 正常。正常。 M MP PV V 作作为为骨骨髓髓造造血血功功能能恢恢复复的的早早期期指指征征：骨骨髓髓造造血血功功能能衰衰竭竭时时，M MP PV V 与与 P PL LT T 同同时时持持续续下下降降，造造血血功功能能抑抑制制越越严严重重，M MP PV V 越越小小；当当造造血血功

17、功能能恢恢复复时时，M MP PV V 增增大大先先于于 P PL LT T 的的升升高高。 其其它它：M MP PV V 增增大大见见于于：骨骨髓髓纤纤维维化化、I IT TP P、血血栓栓性性疾疾病病、脾脾切切除除、慢慢粒粒、巨巨大大血血小小板板综综合合症症。 M MP PV V 减减小小见见于于：脾脾亢亢、化化疗疗后后、再再障障、巨巨幼幼贫贫。 10 10 血小板比积（血小板比积（PCTPCT） ：） ： 男：男：1.081.082.72mL/L2.72mL/L 女：女：1.141.142.82mL/L2.82mL/L PCTPCT 与与 PLTPLT、MPVMPV 正相关。所以正相关。

18、所以 PLTPLT、MPVMPV 的增减使的增减使 PCTPCT发生相应发生相应的变化。增高见于：骨纤、脾切除、慢粒；减低见的变化。增高见于：骨纤、脾切除、慢粒；减低见于：化疗后、血小板减少症等。于：化疗后、血小板减少症等。 1111 血小板分布宽度（血小板分布宽度（PDWPDW） ：） ：15.515.518.1 18.1 % % PDWPDW 是以血小板体积变异系数表示， 是反映血小板体积大小是以血小板体积变异系数表示， 是反映血小板体积大小异质性的参数。异质性的参数。 其增大见于：急非淋化疗后、巨幼贫、慢粒、脾切除、巨大其增大见于：急非淋化疗后、巨幼贫、慢粒、脾切除、巨大血小板综合症、血

19、栓性疾病。血小板综合症、血栓性疾病。 四、血细胞分析仪的细胞直方图分析四、血细胞分析仪的细胞直方图分析 1. 1.白细胞直方图白细胞直方图 在白细胞计数时， 细胞根据体积大小分布于不同的计算机通道在白细胞计数时， 细胞根据体积大小分布于不同的计算机通道中，从而得到白细胞体积分布直方图，从而可以从图形的变化中估中，从而得到白细胞体积分布直方图，从而可以从图形的变化中估计被测血液中细胞群体的变化。其意义在于：计被测血液中细胞群体的变化。其意义在于： 检验人员根据图形变化，决定是否进一步镜检；检验人员根据图形变化，决定是否进一步镜检； 提示操作者在镜检分类时注意异常细胞的存在。提示操作者在镜检分类时

20、注意异常细胞的存在。 仪器在仪器在3535450fl450fl范围内分析，其中范围内分析，其中353598fl98fl定定为淋巴细胞，为淋巴细胞，9898flfl定位中间细胞，定位中间细胞，flfl以上定位为以上定位为中性粒细胞，某一细胞的百分数中性粒细胞，某一细胞的百分数% %是其图上面积与是其图上面积与AL+AM+AGAL+AM+AG的比值。仪器在淋巴细胞、中间细胞与中的比值。仪器在淋巴细胞、中间细胞与中性粒细胞间设有一个正常的规范。电阻抗法血细胞性粒细胞间设有一个正常的规范。电阻抗法血细胞分析仪白细胞分类模示如图图分析仪白细胞分类模示如图图3 3。 。2 2. .红红细细胞胞直直方方图图

21、 某些贫血病人，红细胞体积直方图有其特点，根据图形变化结合其它参数分析，对贫血的鉴别诊断有特殊价值。图 8 IDAIDA 的直方图：曲线波峰左移，峰底变宽，显示小细胞的的直方图：曲线波峰左移，峰底变宽，显示小细胞的不均一性。不均一性。 轻型轻型海洋性贫血：曲线小峰左移，峰底变窄，典型海洋性贫血：曲线小峰左移，峰底变窄，典型的小细胞均一性贫血的小细胞均一性贫血 巨幼红细胞性贫血：治疗前波峰右移，峰底增宽，显示巨幼红细胞性贫血：治疗前波峰右移，峰底增宽，显示明显的大细胞不均一性； 给以叶酸或明显的大细胞不均一性； 给以叶酸或 B B1212治疗后， 幼稚细胞治疗后， 幼稚细胞分化成熟正常，正常细胞

22、群逐步释放入血，而病理性大细分化成熟正常，正常细胞群逐步释放入血，而病理性大细胞未完全消亡，检测时出现双峰型曲线，说明治疗有效。胞未完全消亡，检测时出现双峰型曲线，说明治疗有效。 3.3.血小板直方图的变化：血小板直方图的变化： 红细胞与血小板为一个测试系统，小红细胞与大血小板的存在对 PLT 和 MPV 检查有很大干扰。直方图可反映标本中小红细胞增多、细胞碎片或血小板聚集。图 9。 血小板直方图正常时，方能发出血小板的报告，否则，血小板直方图正常时，方能发出血小板的报告，否则，应涂片在镜下对照。应涂片在镜下对照。 血小板直方图血小板直方图 正常直方图的特征：正常直方图的特征： 仪器在仪器在

23、2 230fl30fl 范围内分析血小板，直方图上正常血小范围内分析血小板，直方图上正常血小板集中在板集中在 2 215fl15fl，呈左偏态分布，在，呈左偏态分布，在 252530fl30fl 处，曲线逐处，曲线逐渐接近横坐标。渐接近横坐标。如图如图 5 5。 血小板异常报警：血小板异常报警： URIURI：指：指 202024fl24fl 颗粒范围的血小板数超过正常标准（血颗粒范围的血小板数超过正常标准（血小板与红细胞之间） ，提示可能存在：大血小板、血小板与红细胞之间） ，提示可能存在：大血小板、血小板凝块、小红细胞、细胞碎片。小板凝块、小红细胞、细胞碎片。 LRILRI：指：指 2 2

24、3fl3fl 颗粒范围的血小板数超过了正常标准，表颗粒范围的血小板数超过了正常标准，表示可能存在血小板碎片、冷球蛋白、电噪音干扰。示可能存在血小板碎片、冷球蛋白、电噪音干扰。 血小板异常直方图示例：血小板异常直方图示例： 大血小板：峰右移，大血小板：峰右移，35fl35fl 处接近横坐标，处接近横坐标，MPVMPV 明显增高。明显增高。“大血小板”图“大血小板”图 2525。 血血小小板板凝凝集集：分分布布峰峰左左侧侧起起点点高高，离离横横坐坐标标 0 0. .6 6c cm m，右右侧侧在在 2 20 0f fl l 处处，离离横横坐坐标标 0 0. .4 4c cm m。与与正正常常差差别

25、别明明显显。血血片片上上可可见见 5 51 15 5 个个聚聚集集成成堆堆血血小小板板。图图 2 26 6。 小红细胞干扰：分布峰的右侧离横坐标较高，呈拖小红细胞干扰：分布峰的右侧离横坐标较高，呈拖尾状。图尾状。图 2727。 五、使用血液分析仪应注意的问题：五、使用血液分析仪应注意的问题： （一） 、标本的采集与储存（一） 、标本的采集与储存 1.一般要求用抗凝的静脉血。一般要求用抗凝的静脉血。静脉血取代末梢血的原静脉血取代末梢血的原因：不同部位末梢血的细胞成分、细胞与血浆的比例经常因：不同部位末梢血的细胞成分、细胞与血浆的比例经常不一致；末梢血采血量少，不易采足量不一致；末梢血采血量少，不

26、易采足量。末梢血适用于：末梢血适用于：婴幼儿、大面积烧伤、经常查血的血液病、白血病化疗病婴幼儿、大面积烧伤、经常查血的血液病、白血病化疗病人。人。 小小血血小小板板： 集集中中分分布布于于 2 21 10 0f fl l， “小小血血小小板板” 。 图图 2 28 8。 2 2、 采血时病人要情绪稳定，采血前两小时不要吸烟，不采血时病人要情绪稳定，采血前两小时不要吸烟，不要剧烈的运动。要剧烈的运动。 3 3、 血液在室温下，血液在室温下，WBCWBC、RBCRBC、PLTPLT 可稳定可稳定 2424 小时，白细小时，白细胞分类可稳定胞分类可稳定 6 68 8 小时，小时，2 2 小时后粒细胞

27、形态有变化，小时后粒细胞形态有变化，需显微镜分类的应及早推制血片。需显微镜分类的应及早推制血片。 4 4、 标标本宜室温存放，不易于本宜室温存放，不易于 4 40 0C C 条件储存。因低温存放会条件储存。因低温存放会影响血小板和平均血小板体积的值。影响血小板和平均血小板体积的值。 （二） 、抗凝剂的使用（二） 、抗凝剂的使用 1 1、 推荐使用推荐使用 EDTAEDTA 二钾抗凝。抗凝比例为二钾抗凝。抗凝比例为 1.51.52mg/ml2mg/ml 血。血。 为为 19931993 年年 ICSHICSH 推荐。推荐。 2 2、 EDTAEDTA 二钾抗凝剂的优点：二钾抗凝剂的优点： （1

28、1） 不影响细胞的数目及大小，对红细胞形态的影响不影响细胞的数目及大小，对红细胞形态的影响也最小；也最小； 可可以抑制血小板的聚集。以抑制血小板的聚集。 （三） 、预稀释标本的放置时间三） 、预稀释标本的放置时间 1 1、 “预稀释标本”即用微量采血管采、 “预稀释标本”即用微量采血管采 2020 微升末梢血与微升末梢血与 9 9 毫毫升稀释液混匀后的升稀释液混匀后的 WBCWBC、 HGBHGB 计数样本。计数样本。 同时也是同时也是 RBCRBC、 PLTPLT计数的初始稀释品。计数的初始稀释品。 2 2、要保证血样与稀释液的充分混匀。轻摇、旋转样品杯。、要保证血样与稀释液的充分混匀。轻摇、旋转样品杯。 3 3、2 20 0 分钟内完成第二次稀释的计数。分钟内完成第二次稀释的计数。二次稀释时避免气泡二次稀释时避免气泡产生。产生。 （四四）试试剂剂的的使使用用 1、原原则则上上使使用用原原仪仪器器配配套套的的试试剂剂。电电阻阻抗抗法法血血液液分分析析仪仪是是检检测测细细胞胞大大小小脉脉冲冲，除除与与细细胞胞本本身身的的大