氨基苯甲酸对脂肪醇的荧光标记及质谱鉴定

1、氨基苯甲酸对脂肪醇的荧光标记及质谱鉴定1引言I然界拥仃峠屣的化汁物股爹，如乙似乳酸*轴鸽它们圧型村I物代谢过程中不町缺少的物质例如，甲辭是一种非常优良的溶剂.丸无色透明液体.但是毒性很人.英柞用是祓坏视网膜神斛.逬一步中毒.最弊会川起死亡所以股的乙醉中加一点甲醉叫变性mw.甲醉除了能够作为溶剂外.也是很重要的ftJ.hjiH11"1.还有日常生活必不可少的乙醇，俗名稱稱Hit国两年參年前就知道川咎物、野果尊塩酵議酒.乙諄毒性小，是fit常用的溶剂.如中单药巾的件效成分.香料的提取.药刑中的备种酊叭華甲醉又称为¥卿它M厢的形式存在许姜績物粘油中，忒甲醉有斎烧西味多用r再料I业

2、.国为它还具有徹弱的麻醉件用+常用柞d上射削111的怕哺刑山“1111:机;山時素稀軒被就是何j2%的苯甲解水溶植w现柜报道的衍住试剂爹为1-异齒墓总-（3-二氮革内務-环己犠二亚胺（】DC：yix,1,但晁零求的条fH匕技苛刻反应敗宰低，甩观性不够理卿询木文沙肚了比丫帕）氮瓏叢叩酸对虧防醉的蔬光标记.使用1乙基（3-JP氨丙毎）-碳醸收胺EDC-HC1）作为粥冷江fi60CI挖谕反应了40介钟.HImy；Id'l口定.操作简便，重现性好.具有很好的效果.建立了醉类的高效祓柑芭谱分析方&,UJ111-*发波K和览射波t分別,340和41gnm对日常1-活用的抗静电刑屮的游關脂肪

3、8?測定2实脸部分2.1主要仪器与试剂1100型奇效液相色直质谐联用仪f美国Aplenty司人配备大汽压化学电离JSHAPCI）、荧、g测器、1曲优1'|叨迟杆器*Hypei-alBDS.es色诰杆4.（5mnX1OOminX5nin.人连依利特分析仪器有限公司人42】丫喘扯基笨屮酸丨制h脂肪醉标准样品I.海试刑厂h光诜纯乙粘（CAN.Merck公如抗静电市八曲阜百盍超市h如哈哙纯净水.矣他就剂均沟分析純试剂，DMF诞II矮惴祐使川=2J标淮溶液配制准确収一定量脂肪醉标准品，用光谐純乙躺配ritkOxlO'3md/L的洛液，相闷低臧度盛肪醉标准液DXlT+in口1/L、川光谱纯

4、乙脯稀厝向成.厭双16CmB的4-沖-听履、氨基苯甲權用光谓範乙船定容辛10mh液度为iOxlOmol/L.低浓度的试刑2,5xlOmol/L）用光谱範乙删稀蒔而成.推确称JU0.2014g4-屮址阳叱版DMAP）.乙睛定容至Hhnl.浓度为20g/L°准确称取1乙基3(3二甲氨丙基厂碳酰二亚胺(EDC-HC1)0.1438g用乙脇定容至10ml.浓度为0.0755mol/L.2.3脂肪醉标准品的衍生向2ml安誣瓶中依次加入200ul衍生试剂，40ulDMAP.40ulEDC,SOul脂肪醉标准样品,粥封百60。水浴中反by40nun.霞荡放冷。加入140ulSO%乙粘水溶液苗进样1

5、0pL衍生反应如下图41：BH4-14-(9-nrfl氨基苯甲酸打脂肪陪衍生反应图2.4色谱条件及质谱条件色说条件：HypeisilBDS.Cl8色iftll：<4.6X100mm5um大连依利特公诃九沆动相A：30%乙站水溶液，B：100%乙粘。洗脱条科见下表流动相流速为1.OmL/min柱温30C.进样10mL荧光激发和发射波氏分别为：Xex=340mn.Xem=418mn.质溝条件：人气爪化学电离源(APCI),正离模式.唏寥爪力60p.s.i(lpm=6894.76Pa)I噪气流址为5L/min,气化温度400CI：燥气温度350°C,毛细管电压3500V电晕电流400

6、0nA(Pos)o表44为高效液相色谐梯度洗脱条件衣41色诸梯度洗脱条件Tmie(nun)ASB(%)070302001003001002.5实际样品的处理称垠4g抗静电剂（L烷雄确酸商钾盐），加入10ml犬离于水.充分搅30分钟，再加入4mL0.1mol/LNaOH溶液搅梓的同时加入20ml正己烷，合并有机相，依次用0.1mol/L盐嘏、l%Na£O3溶液和去离水洗涤.超声后用N吹，残余物加入2ml80%的乙肪7水溶液溶解冷藏备用.3结果与讨论3.1衍生条件优化实验中发现，4-<9-nr®>氢華苯甲酸在衍生化过程中,衍工效率随着沮度、试剂比例以及反应时间的不同

7、会仃很大的变化.例如同定反应时何和试剂的比例.反应效率随打温度的升侖而増加.金60°时达到效率圮优化：固宜反应温度和试剂叱例.反应效宰1%杵反应时间的升高而变大,在反应时间为40分钟时，达到效率最高：固定反应温度和反应时何.反应效净随着衍生试剂的比例的升高而变人，任衍生试剂比例为2.5倍只仃址人衍生效申.木C：以丁醉（C4、戊醉（C5）.己醉（C6、庚醇（C7）4种不同的醉为例，下图4.2至4.4显示了反应效率随着温度,试剂比例及反应时间的关系图标,总结来说,当衍生试剂打标准样品的比例为2.5倍,处于60C.反应40分钟具有圮大衍生效率.C4C5C6C7C4C5C6C7图42衍生温度

8、对效率的影响C4J'fi?(Butanol)C5戊醉<Aniylalcohol)C6lAR?(Hexanol>C7庚醉(Heptanol)+C4亠C5C6+C7+C4亠C5C6+C7图4-3衍生试剂纭标准样品的比例对效率的影响C4醉(Butanol>C5戊醇(Ainylalcohol)C6lLW?(Eexaiiol)C7庚醉(Heptanol)+C4亠C5C6C7图44衍生反应时间对效率的影晌C4醉(Butanol)C5戊fi?(Amylalcohol)C6lIR?(Eexaiiol)C7庚醉<Heptanal)3.2标准品色诰分离及质谱签定依照I：述的优化条件

9、在EclipseXDB-C8色谱柱（公可）k>乙制水做流动相采川梯度洗脱.作30分钟内实現了16科C1-C16d脂肪醉衍生物的完全基线分离，结果见图45采用大气压化学电离源(APCI)在正离子检测模式下，进行了在线的柱片质谱定性各组分质谐数据见图。以己醉衍生物为例其质诰图与质谱裂解模式见图4.图45标准脂肪醉衍牛物的色请分离图戊醉(AinylalcoholC6己醉(HexanolC7庚醉(Heptanol)C8辛醉(Octanol)C9壬R?(Nonaiiol)CIO癸醉(Decanol)Cll|*-ft?(Undecaiiol)C12|二醉(DodecanalC13I三醉(Tridec

10、aiiol)C14I*PI(Tetiadecylalcohol)C15I/ift?(Fifteenalcohol)C16十六醇(Cetylalcohol)latent2<40an260300mo4)0400E=400.1討*图4-6己醉衍牛物质谄邮（A：级质谕），（B：二级质讲），（C裂解模式3.3歧性回归方程以及检出限依据标准脂肪醇衍生峰面枳及实际进样址进行线性回归.御岀线性方程、相关系数、标准偏差及各脂肪醇的检测线见衣4-2。脂肪醉的线性郴关系数都在D.9959".9998之何,保留时间的相对标准僞差RSD（%）均小f0.085%.峰潮积的相对标准備差均小于0.52%,按照

11、信噪比为S/N=3:l来计样.检出限均/I：12.5745.22foiolZ间.农42脂肪醉衍牛物的线性冋归方程、相关系数、检出限和标准偏弟子数回归方程Regressionequation检出限Detectionlimitsiflnol)相关系数CorrelationCoefficientR2RSDofretentiontune(%)RSDofpeakarea(%)Cl37.220.99S50.0850.52C2Y=62.99X1.6928.480.99740.0790.41C322.550.99750.0630.2SC419.120.999500610.39C52S.940.999S0.05

12、S0.39C6Y=68.24X+1.0229.120.99S40.0420.47C7Y=29.21X+7.6619.690.99700.03S0.15CS31.550.99690.02S0.4SC939.510.99920.0210.33CIO36.770.99S10.0150.31Cll42.540.99880.0370.19C12Y=3351X-7.1123.920.99900.0440.11C1345.220.99S30.0530.24C14Y=37.S2X-M,1937.320.99620.0590.40C1527.S90.99590.0660.2SC1612.570.99770.0710.37X：进样t：(injectedamountpmol)：Y:蜂面枳(peakarea)：RSD：相对标准僞差3.4实际样品分析将处理过的抗静电剂样品按照询述优化的条件进行测定，实际样品的色说分离图见图4-7.经测定.抗挣电剂中的脂肪醇主要为C