氨基苯甲酸对脂肪胺的荧光标记及质谱鉴定

1、氨基苯甲酸对脂肪胺的荧光标记及质谱鉴定W育嚴可以看做是氨中的氢談轻基取代的衍生物嚴舅和它冊的衍生物是十分重要的化件物a环境巾的議类物质山于其毒性及反应活性已经诫为人类生活中备覺关注的类化舍物,谏攢物质的侧定*炖于嗥物学.临味化学*耳境建学*T物学具刊非端重聲的总义；唱肪肢和芳香戡类优件物般为无嘛外吸收或界圧木刃不发比的物质，进荷化学荧光衍生是提高该类化件物井辨度检測的个有奴的途彳严W例如苯异丙胺类药物能以某种方式作用于交感神经系统而使人们有兴奋、机灵、清蠹.耀少嶽劳、增加箱神活力的感党t然大剂呈或长期服用¥NK也会引起粘冲上的不愉快零負作用.巴比妥类踊物能降低屮槪胖经泵统的話性，诱发

2、傕眠星一娄常川的頤静別因此.它们是“抑制性葩物S写苯界丙胺“兴奋性药物"正好相乩住天燃植物小的一腔胺类代合物.如吗啡等生物璇.对高尊生物的中枢累统有縊大的柞用“現在煙常使用的炎光类桁生试#h11甘：4-权听肚21一罩井黑畔(NED-F)y6-M£4*%-Hinl亚胺碳酸酣(AJQC)*1"、9-茹甲基氯甲ffii(FMOC)lK1-胡I利竝茶亠磺脱氢®NS-C1)”，；N日D-F试剂木討&廿T.物iT以中的穂定性差*见光再易分解：AQC法有较高的选择性但它反应的重現性和其衍生物的穂定性较準：FMOC时使用试利过宜会降低邑谓柱寿命，用此需要经过萃取

3、处理.操作过理JRflhDNS-C1除试剂的稳宦件皋外.衍牛物还有荧先淬灭现亀*本实脸采用4-(9-1®)氨基苯甲战作为柱前衍牛:试刑°在乙盼溶剝屮以DMAP(4-二甲氨基毗嚏)撇催化剤.任和"条件下口脂肪脈反庙孔inn：叫决酣稳址的黄比产物*建立了嵌类的岛救液相色锻分折方法。甌笈波栓和坡射放也分别为337421对日拾生活用水中的聃禺脂肪胺测宦祐果满点一2实验部分2.1主轄仪器与试剂1100飞爲戦液柑邑溝质谐联用仪(美国Agihni公司九配阵大气压化学电离W(APCI>.荧比检制糯、1叩；订|型进样器：Hypersil0DS-C8色诽社4.6iimX100m

4、mX5nm人谨依利待分析仪器育限公可九4-(9-TC)猟堆狀甲隈(门制k脂肪胺标准杆品<卜黠试剂厂h光讲纯乙脇<CAN.MerckMJ)：池烤水(取H曲阜卿范大学图书馆的；蛙哈喑純净4U儿他试刑均为分析纯试刊.DMF减爪按惴破使用g2标准溶植足制准确取址量脂肪胺标唯品.用光谐纯乙膊配JLOXIO'2molA,的涪戕相磁低浓度IB肪肢标准液(1.0X104mol/L)用光谐郭乙躺稀释而成.IIZ16.6mg':：'1-(4口丫唳)氮臺苯甲酸用比満纯乙脑定容至10ml.浓度为5.0X10-3mol/L低浓度的试剂(2.5XlOmol/L)川光活纯乙粘稀科而成。粧

5、确称取0.2014g4-甲氨堆毗陀(DMAP),乙脯定容至10ml.浓度为20g/L。准确称取1.乙也.又G：甲氨丙基).碳联二亚胺(EDC.HC1)0.1438g用乙脂定容至10ml.浓度为0.0755mol/Lo2.3脂肪胺标准品的衍生向2nd安甌瓶中依次加入200ul衍生试剂.90ulDMAP,90ulEDC50ul脂肪胺标准样品.密封疔50。水浴中反by30min.蔭荡放冷。加入170ulS0%乙肪水溶液赣进样10衍生反应如下图31：图314-(9-叶.氮基苯屮酸9脂肪胺衍生丿.2.4色谱条件及质谱条件色満条件：HypersilBDS.ClS色満柱4.6X100mm5um人连依利待公可

6、九流动相A：50%乙脯水溶液.B；100%乙酬。洗脱条件见下衣.流动相流速为1OmL/min柱温3LC.进样10uL荧光激发和发射波氏分别为：ex=337iiniAem=421nni质谐条件：大气爪化学电离源(APCI).1E离子模式，喷雾压力60p.f.i(lp.s.i=6S94.76Pa).I：燥气流量为5L/min,气化温度400°C,I燥气温度350*C,毛细管电爪3500V,电晕电流4000nA(Pos)o下3-1为梯度洗脱条件34梯度洗脱秤序Time(min)A(%)B(%)050502001003001002.5实际样品的处理flZ500ml池塘用水（曲阜师范大学图书馆

7、前）,使用0.45um滤膜除去固体杂质,随后经过高纯水、甲醉、乙粘、高纯水处理过的ODS（C18）柱子进行聚集，址麻用10ml甲醇并加入0.01mm01盐酸lml洗脱，超声后用N?吹I戏余物加入2ml80%的乙蒯水溶液溶解冷藏备川。3结果与讨论3.1衍生条件优化实脸中发現.4-（9川丫咙）氮基苯甲酸住衍生化过程中.衍生效率随着温度、试剂比例以及反应时间的不同会有很大的变化,例如.囲定反应时间和试剂的比例,反应效率隧着温度的升髙而增加,在50。时达到效率最优化:固定反应温度和试剂比例,反应效率随着反应时间的升高而变大,在反应时间为30分钟时，达到效率绘高：固定反应温度和反应时何,反应效率随着衍生

8、试剂的比例的升髙而变大,在衍生试剂叱例为4倍.具有最人衍牛效率。本章以乙胺（C2）、丁胺（C4、己胺（C6、丰胺（C8）4种不同的胺为例，下图32至34显示了反应效率随着反应时何、试剂比例及温度的关系图标,总结来说当衍生试剂打标准样品的比例为4倍.处于5DC,反应30分钟具冇最大衍生效率。图3-2衍生反应的时何对效率的形响C2：乙胺(ethyiamme)：C4：J胺(butylamine)：C6：l!胺(hexylamine)：C8：?胺(octylamine)图3-3衍生试刑与标准样品的比例对效率的影响C2：乙胺(ethylame)：C4：胺(butylamme)：C6：LL(hexylai

9、mne)：C8：胺(octylamine)C2C4-C6C8图34衍生温度对效申的影响C2：乙胺(ethylanune)：C4：J胺(butylamine)：C6：l!胺(hexylamine)：CS：宇胺(octylftiniiie)3.2标准品色谱分离及质谱鉴定依照1二述的优化条件/f：EclipseXDB-C8色谐柱(4.6X150mm,5uinAgilent公司)乙册/水做流动相.采用梯度洗脱A30分钟内实现了12种(C1.C12)直链b舫胺衍生物的完全垂线分离.结果见图35采用大气压化学电离源(APCI)在正离子检测模式E.进行了在线的柱后质谱定性,各组分质谱数据见图.以己胺衍生物为

10、例其质诸图打质活裂解模式见图36图35标准脂肪胺衍生物的色诰分离图C1甲胺（methylamine”C2乙胺（ethylamineAC3丙胺（propylamme：C4胺（butylamine：C5戊胺（pentylamine”C6lL胺hexylanune）：C7丿刃肢<heptylamme）：C8辛胺（octylainine$C9壬胺<nanylamine>：CIO癸胺<decylamine）：CllI胺mdecylamine）：C12十二胺<dodecylamine）：ODwoijGOfi.:e<40wo*»mZ3992|.UHJHl丫290

11、3图36己胺衍牛物质请烬A：级质讲)(B：级质満九(C裂解模式)3.3钱性回归方程以及检出限依据标准脂肪胺衍生峰面积及实际进样嚴进行线性回归,得出线性方程、相关系数、标准僞差及各脂肪胺的检测线见农3.2。脂肪胺的钱性相关系数都之何，保留时间的相对标准偏差RSD(%)均小P0.090%，峰面积的相对标准偵差均小0.44%,按照信噪比为S/N-3:!来计算检岀限均任19.8843.69finolZ何。表32脂肪胺衍T.物的线性冋0方用、和关系数、检出限和标擅«1差碳脈子数冋归方程Regressionequation相关系数CorrelationCoefficientR*检出限Detect

12、ionlimitsfixwl»RSDofretentiontime(%)RSDofpeakarea(%)C1Y=94.33X+7.440.999940.220.090033C2Y=6664X+4.410.999S37.6S90.0S10.24C3Y=80.21X+2.610.999725.SS0.0730.22C40.997943.690.0690.23C5Y=85.33X+4.310.99S150.990.0410.39C6Y=71.4SX+4.130.999523.7S0.0130.2SC7Y=61.5SX+4.740.99S930.790.0120.13CSY=53.44X+4

13、.210.999922990.0120.44C9Y=79.7SX+7.700.999419.S80.0100.1SC10Y=41.76X+2.S10.99S428.920.0140.29C11Y=49.9SX+3.610.99SS22.540.0290.12C12Y=33.61X+8.210.999133.880.0560.19X：进ITt(injectedaniountpmol)：Y:峰面积(peakarea)：RSD:相对标准偏怎3.4实际样品分析将处理过的池畑川水样品按照前述优化的条件讲行测岀实际样品的谱分离图s<m3-7.兀脂肪胺含秋及冋收率见衣33。图37池塘水中的脂肪胺色谐分离图W6M議贩子数水样中含量（叽）回收帑（）C133.S199.14C220.1998.72C311.50101.23C48.7299.63C51.04107.45C68.84102.82C70.72102.38CS10.28106.S1C9