细胞计数原理学习教案

1、会计学1细胞计数细胞计数(j sh)原理原理第一页，共24页。二二 酵母细胞计数原理酵母细胞计数原理 微生物常用的计数方法有两种微生物常用的计数方法有两种，即直接计数法和间接计数法。，即直接计数法和间接计数法。前者利用血球计数板在显微镜下前者利用血球计数板在显微镜下直接计数，能立即得到数值，但直接计数，能立即得到数值，但死活细胞都计数在内。后者是在死活细胞都计数在内。后者是在乎板上长成菌落后再计数，反应乎板上长成菌落后再计数，反应(fnyng)较真实，但费时太长。较真实，但费时太长。本实验是利用血球计数板进行直本实验是利用血球计数板进行直接计数。计数前需对样品做适当接计数。计数前需对样品做适当

2、稀释，按照规定方法及计算公式稀释，按照规定方法及计算公式运算后，即可得出实际数值。运算后，即可得出实际数值。 第2页/共24页第二页，共24页。第3页/共24页第三页，共24页。肽聚糖肽聚糖(peptidoglycan)革兰阳性菌肽聚糖革兰阳性菌肽聚糖聚糖骨架聚糖骨架(gji)、四肽侧链、五肽交联、四肽侧链、五肽交联桥桥青霉素作用点溶菌酶作用点N-乙酰葡糖胺N-乙酰胞壁酸第4页/共24页第四页，共24页。革兰阴性菌肽聚糖革兰阴性菌肽聚糖聚糖骨架聚糖骨架(gji)、四肽侧、四肽侧链链肽聚糖肽聚糖(peptidoglycan)第5页/共24页第五页，共24页。革兰阳性菌细胞壁特殊革兰阳性菌细胞壁特

3、殊(tsh)组分组分壁磷壁酸膜磷壁酸第6页/共24页第六页，共24页。革兰阴性菌细胞壁特殊革兰阴性菌细胞壁特殊(tsh)组分组分第7页/共24页第七页，共24页。革兰阳性菌与阴性菌细胞壁结构革兰阳性菌与阴性菌细胞壁结构(jigu)比较比较细胞壁细胞壁 革兰阳性菌革兰阳性菌革兰阴性菌革兰阴性菌强度强度较坚韧较坚韧较疏松较疏松厚度厚度20-80nm10-15nm肽聚糖层数肽聚糖层数可多达可多达50层层1-2层层肽聚糖含量肽聚糖含量占细胞壁干重占细胞壁干重50%-80%占细胞壁干重占细胞壁干重5%-20%磷壁酸磷壁酸+外膜外膜+脂蛋白脂蛋白+脂多糖脂多糖+第8页/共24页第八页，共24页。n复染液复

4、染液番红番红第9页/共24页第九页，共24页。第10页/共24页第十页，共24页。（一）（一） 染色染色(rns)实验实验第11页/共24页第十一页，共24页。第12页/共24页第十二页，共24页。而脱色不够时，阴性菌可被误而脱色不够时，阴性菌可被误染为阳性菌。此外，菌龄也影染为阳性菌。此外，菌龄也影响染色结果，如阳性菌培养时响染色结果，如阳性菌培养时间过长，或已死亡及部分菌自间过长，或已死亡及部分菌自行溶解了，都常呈阴性反应。行溶解了，都常呈阴性反应。第13页/共24页第十三页，共24页。第14页/共24页第十四页，共24页。大肠杆菌(d chn n jn)革兰氏染色第15页/共24页第十五

5、页，共24页。炭疽芽胞杆菌炭疽芽胞杆菌第16页/共24页第十六页，共24页。第17页/共24页第十七页，共24页。(二二)酵母细胞数的测定操作方法酵母细胞数的测定操作方法1.血球计数板的构造血球计数板的构造(guzo) 血球计数板是由一块比普通载玻片血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的。玻片中有四条下厚的特制玻片制成的。玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台。中间的平台较凹的槽，构成三个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面个刻有一个方格网。方格网上半边上面个刻有一个方格网。方格网上刻有刻有9个大方格，其中只有中间的一个个大方格，

6、其中只有中间的一个大方格为计数室，供微生物计数用。这大方格为计数室，供微生物计数用。这一大方格的长和宽各为一大方格的长和宽各为1m，深度为，深度为，其体积为其体积为0.1mm3。 第18页/共24页第十八页，共24页。计数室通常有两种规格。一种是大方格内分为计数室通常有两种规格。一种是大方格内分为16中格，每中格，每一中格又分为一中格又分为25小格；另一种是大方格内分为小格；另一种是大方格内分为25中格，每中格，每一中格又分为一中格又分为16小格。但是不管计数室是哪一种构造小格。但是不管计数室是哪一种构造(guzo)；它们都有一个共同的特点，即每一大方格都是；它们都有一个共同的特点，即每一大方

7、格都是由由1625=2516=400个小方格组成，见图。个小方格组成，见图。2.血球计数板的使用血球计数板的使用(1)用血球计数板计数酵母菌悬液的酵母菌个数。用血球计数板计数酵母菌悬液的酵母菌个数。(2)样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数，以每小方样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数，以每小方格内含有格内含有4-5个酵母细胞为宜，一般稀释个酵母细胞为宜，一般稀释10倍即可。倍即可。 第19页/共24页第十九页，共24页。(3)将血球计数板用擦镜纸擦净，在中央的计数室上加盖专用的厚玻片。(4)将稀释后的酵母菌悬液，用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘，使菌液缓缓渗入，多余的菌液用吸水纸吸取，捎待片刻

8、(pin k)，使酵母菌全部沉降到血球计数室内。(5)计数时，如果使用16格25格规格的计数室，要按对角线位，取左上、右上、左下、右下4个中格（即100个小格）的酵母菌数。如果规格为25格16格的计数板，除了取其4个对角方位外，还需再数中央的一个中格(即80个小方格)的酵母菌数。 第20页/共24页第二十页，共24页。4.血球计数板的清洁血球计数板的清洁 血球汁数板使用后，用自来水冲洗，切勿用硬物血球汁数板使用后，用自来水冲洗，切勿用硬物洗刷，洗后自行晾干或用吹风机吹干，或用洗刷，洗后自行晾干或用吹风机吹干，或用95的的乙醇、无水乙醇、丙酮等有机溶剂脱水使其干燥。乙醇、无水乙醇、丙酮等有机溶剂脱水使其干燥。通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物。若不干净，则必须。若不干净，则必须(bx)重复清洗直到干净为止重复清洗直到干净为止。 第21页/共24页第二十一