微生物基本操作讲义

1、1. 1. 玻璃器皿的清洗玻璃器皿的清洗 1.11.1新购的玻璃器皿新购的玻璃器皿 浸泡于的工业盐酸中数小时，除去游离浸泡于的工业盐酸中数小时，除去游离的碱性物质的碱性物质1.21.2用过的玻璃器皿用过的玻璃器皿 污染的器皿，必须经过适当消毒，污染的器皿，必须经过适当消毒， 污迹不能洗净时，可浸泡于洗液内。污迹不能洗净时，可浸泡于洗液内。 1.31.3洗液的配制洗液的配制 称取重铬酸钾称取重铬酸钾100g100g与与1000mL1000mL水置大烧瓶中加热水置大烧瓶中加热搅拌溶化，待冷却后，将烧瓶置冷水中，慢慢加入浓搅拌溶化，待冷却后，将烧瓶置冷水中，慢慢加入浓流酸流酸250mL250mL，并

2、不断搅拌。，并不断搅拌。 l3. 3. 间歇灭菌法间歇灭菌法（fractional sterilizationfractional sterilization）: :将待灭菌的物将待灭菌的物品品100 100 加热加热15153030分分 钟，杀死其中的细菌繁殖体，然后将物钟，杀死其中的细菌繁殖体，然后将物品置于品置于3737温箱中过夜使芽胞发育成繁殖体，次日再通过流通蒸温箱中过夜使芽胞发育成繁殖体，次日再通过流通蒸 汽加热，如此连续三次，可将所有细菌繁殖体和芽胞全部杀死。汽加热，如此连续三次，可将所有细菌繁殖体和芽胞全部杀死。 l4.4.高压蒸汽灭菌法：高压蒸汽灭菌法：是灭菌效果最好、目前应

3、用最广的灭菌方是灭菌效果最好、目前应用最广的灭菌方法。方法是在一密闭蒸锅法。方法是在一密闭蒸锅高压蒸汽高压蒸汽 灭菌器内进行的。通常灭菌器内进行的。通常 在在1.05kg/cm21.05kg/cm2的压力下，温度达的压力下，温度达121.3,121.3,维持维持15153030分钟，可杀死分钟，可杀死包括细菌芽胞在内的所有微生物。包括细菌芽胞在内的所有微生物。 此法适用于耐高温和不怕潮此法适用于耐高温和不怕潮湿物品的灭菌。湿物品的灭菌。消毒剂类别消毒剂类别名称名称浓度浓度(%)用途用途重金属盐重金属盐红汞红汞2皮肤、粘膜、小创面消毒皮肤、粘膜、小创面消毒硫柳汞硫柳汞0.01生物制品防腐生物制品

4、防腐氧化剂氧化剂高锰酸钾高锰酸钾0.1皮肤、尿道、水果、蔬菜消毒皮肤、尿道、水果、蔬菜消毒过氧化氢过氧化氢3皮肤、粘膜、创伤消毒皮肤、粘膜、创伤消毒过氧乙酸过氧乙酸0.20.5塑料、玻璃、人造纤维消毒塑料、玻璃、人造纤维消毒卤素类卤素类碘液碘液2.5皮肤消毒皮肤消毒醇类醇类乙醇乙醇7075皮肤、体温计消毒皮肤、体温计消毒酚类酚类石炭酸石炭酸35地面、器皿表面和排泄物消毒地面、器皿表面和排泄物消毒来苏来苏35同上、也常用于手及皮肤消毒同上、也常用于手及皮肤消毒表面活性剂表面活性剂新洁尔灭新洁尔灭0.1手术器械消毒手术器械消毒酸碱类酸碱类生石灰生石灰1:41:8排泄物、地面消毒排泄物、地面消毒染料

5、染料龙胆紫龙胆紫24表浅创伤消毒表浅创伤消毒革兰氏染色图解革兰氏染色试剂 步骤1：用蒸馏水滴瓶滴一小滴蒸馏水于洁净的载玻片上 步骤2：用无菌操作法取少许培养物于蒸馏水滴上 步骤3：用接种环将培养物涂布成一薄层 步骤4：风干 步骤5：在酒精灯火焰外层尽快的来回通过3-4次固定步骤6：结晶紫染色1分钟 步骤7：用蒸馏轻轻冲洗玻片 步骤8：革兰氏碘液染色1分钟，再用蒸馏水轻轻冲洗 步骤9：酒精脱色至下滴液为无色，立即用蒸馏水冲洗 步骤10：番红复染1分钟，用蒸馏水轻轻冲洗 大肠杆菌（Escherichia coli）革兰氏染色图 革兰氏染色阴性杆菌（红色） 金黄色葡萄球菌（金黄色葡萄球菌（Staph

6、ylococcus aureusStaphylococcus aureus）革兰氏染色）革兰氏染色 革兰氏染色阳性球菌（紫色） 1接种针 2.接种环 3.接种钩 4.5.玻璃涂棒 6.接种圈 7.接种锄 8.小解剖刀 图5-1接种和分离工具图5-2斜面接种时的无菌操作 (1)接种灭菌 (2)开启棉塞 (3)管口灭菌 (4)挑起菌苔 (5)接种 (6)塞好棉塞 图1倾注平板法（a）涂布平板法（b）图解 1.菌悬液 2.熔化的培养基 3.培养物 4.无菌水 稀释倒平板和涂布法稀释倒平板和涂布法图2平板划线分离法 1.斜线法 2.曲线法 3.方格法 4.放射法 5.四格法 划线接种示意图划线接种示意图45左右的冻箱中贮存。一般细菌可保存13个月、酵母菌和霉菌可保存26个月后，再移种到新配的斜面培养基1次，经适当培养后，再行保藏。 优点是操作简单，不需特殊设备；缺点是保藏时间短，菌种经反复转接后，遗传性状易发生变异，生理活性减退。 图中为产酸管 图中管）为产气阳性 细菌对各种糖、醇和糖苷等的发酵能力，从而进行各种细菌的鉴别 某些细菌可以产生分解淀粉的酶，把淀粉水解为麦芽糖或葡萄糖。淀粉水解后，遇碘不再变蓝色。 某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮