分子生物学朱玉贤笔记

1、第二章染色体与DNA染色体(chromosome是细胞在有丝分裂时遗传物质存在的特定形式，是间期细胞染色质结构紧密包装的结果。真核生物的染色体在细胞生活周期的大部分时间里都是以染色质(chromatin)的形式存在的。染色质是一种纤维状结构，叫做染色质丝，它是由最基本的单位一核小体(nucleosome)成串排列而成的。原核生物(prokaryote):DN腰成一系列的环状附着在非组蛋白上形成类核。染色体由DN府口蛋白质组成。蛋白质由非组蛋白和组蛋白(H1,H2A,H2B,H3,H4)DNAF组蛋白构成核小体。组蛋白的一般特性：P24进化上的保守性无组织特异性肽链氨基酸分布的不对称性：碱性氨基

2、酸集中分布在N端的半条链上。组蛋白的可修饰性：甲基化、乙基化、磷酸化及AD腺糖基化等。H5组蛋白的特殊性：富含赖氨酸(24%(鸟类、鱼类及两栖类红细胞染色体不含H1而带有H5)组蛋白的可修饰性在细胞周期特定时间可发生甲基化、乙酰化、磷酸化和ADP核糖基化等。HSH4修饰作用较普遍，H2B有乙酰化作用、H1有磷酸化作用。所有这些修饰作用都有一个共同的特点，即降低组蛋白所携带的正电荷。这些组蛋白修饰的意义：一是改变染色体的结构，直接影响转录活性；二是核小体表面发生改变，使其他调控蛋白易于和染色质相互接触，从而间接影响转录活性。2、DNA1) DNA的变性和复性变性(Denaturation)DN敏

3、链的氢键断裂，最后完全变成单链的过程称为变性。增色效应(Hyperchromaticeffect)在变性过程中，260nm紫外线吸收值先缓慢上升，当达到某一温度时骤然上升，称为增色效应。融解温度(Meltingtemperature,Tm)变性过程紫外线吸收值增加的中点称为融解温度。生理条件下为85-95C影响因素：G+饶量，pH值，离子强度，尿素，甲酰胺等复性(Renaturation)热变性的DN遨慢冷却，单链恢复成双链。减色效应(Hypochromaticeffect)随着DNA勺复，性，260nm紫外线吸收值降低的现象。2) C值反常现象(C-valueparadox)C值是一种生物的

4、单倍体基因组DNA勺总量。真核细胞基因组的最大特点是它含有大量的重复序列，而且功能DNAff列大多被不编码蛋白质的非功能DN惭隔开，这就是著名的“C值反常现象”。(四)核小体(nucleosome):用于包装染色质的结构单位，是由DNAit缠绕一个组蛋白核(H2AH2BHSH4)*2的八聚体】构成的。1、原核生物基因组结构特点基因组很小，大多只有一条染色体结构简炼存在转录单元(trnascriptionaloperon)多顺反子(polycistron)重叠基因由基因基因、部分重叠基因、一个碱基重叠组成。2、真核生物基因组结构特点真核基因组结构庞大3Xl09bp、染色质、核膜单顺反子基因不连续

5、性断裂基因(interruptedgene)、含子(intron)、外显子(exon)非编码区较多多于编码序列(9:1)含有大量重复序列 不重复序列/单一序列：在基因组中有一个或几个拷贝。真核生物的大多数基因在单倍体中都是单拷贝的。如：蛋清蛋白、血红蛋白等功能：主要是编码蛋白质。 中度重复序列：在基因组中的拷贝数为101104。如：rRNAtRNA一般是不编码蛋白质的序列，在调控基因表达中起重要作用 高度重复序列：拷贝数达到几百个到几百万个。卫星DNAA?T含量很高的简单高度重复序列。1、DNA的一级结构：指4种脱氧核甘酸的连接及其排列顺序，DNA序列是这一概念的简称。碱基序列2)特征：双链反

6、向平行配对而成脱氧核糖和磷酸交替连接，构成DNAt架，碱基排在侧侧碱基通过氢键互补形成碱基对(A:T,C:G)。2、DNA的二级结构：指两条多核甘酸链反向平行盘绕所产生的双螺旋结构。2)分类：右手螺旋：A-DNAB-DNA左手螺旋：Z-DNA3、DNA的高级结构：指DNA双螺旋进一步扭曲盘绕所形成的特定空间结构。是一种比双螺旋更高层次的空间构象。2)主要形式：超螺旋结构(正超螺旋和负超螺旋)(一)DNA勺半保留复制(semi-nservativereplication)1、定义：由亲代DNAfe成子代DNAM,每个新形成的子代DNA中，一条链来自亲代DNA而另一条链则是新合成的，这种复制方式称

7、半保留复制。3、DN砰保留复制的生物学意义：DNA勺半保留复制表明DNA&代上的稳定性，保证亲代的遗传信息稳定地传递给后代。(二)与DNA&制有关的物质1、原料：四种脱氧核甘三磷酸(dATPdGTPdCTPdTTP)2、模板：以DNA勺两条链为模板链，合成子代DNA3、引物：DNA勺合成需要一段RNAJ作为引物4、引物合成酶(引发酶)：此酶以DNA为模板合成一段RNA这段RNA作为合成DNA的弓I物(Primer)。实质是以DNA模板的RN膘合酶。5、DNA聚合酶：以DNA模板的DN始成酶以四种脱氧核甘酸三磷酸为底物反应需要有模板的指导反应需要有3-OH存在DNAJ的合成方向为53性质聚合酶I

8、聚合酶n聚合酶田35外切活性+53外切活性+-53聚合活性+中+很低+很高新生链合成-+聚合酶I主要是对DN硼伤的修复；以及在DN侬制时切除RN用|物并填补其留下的空隙。聚合酶H修复紫外光引起的DN龈伤聚合酶mDNA复制的主要聚合酶，还具有3-5外切酶的校又t功能，提高DN腹制的保真性6、DNA连接酶（1967年发现）：若双链DNA中一条链有切口，一端是3-OH,另一端是5-磷酸基，连接酶可催化这两端形成磷酸二酯键，而使切口连接。但是它不能将两条游离的DN嶂链连接起来DNA连接酶在DN侬制、损伤修复、重组等过程中起重要作用7、 DNA拓扑异构酶（DNATopisomerase）:拓扑异构酶？：

9、使DNA-条链发生断裂和再连接，作用是松解负超螺旋。主要集中在活性转录区，同转录有关。例：大肠杆菌中的e蛋白拓扑异构酶H：该酶能暂时性地切断和重新连接双链DNA作用是将负超螺旋引入DNA分子。同复制有关。例：大肠杆菌中的DN顺转酶8、DNA解螺旋酶/解链酶（DNAhelicase）:通过水解ATP获得能量来解开双链DNAE.coli中的rep蛋白就是解螺旋酶，还有解螺旋酶I、II、III。rep蛋白沿35移动，而解螺旋酶I、II、III沿53移动。9、单链结合蛋白（SSBP-single-strandbindingprotein）:稳定已被解开的DN婵链，阻止复性和保护单链不被核酸酶降解。（三

10、）DNA勺复制过程（大肠杆菌为例）双链的解开RNA引物的合成DNA链的延伸切除RN阿物，填补缺口，连接相邻的DN街段1、双链的解开ftju制有特定的起始位点，叫做复制原点。ori（或o）、富含A、T的区段。从复制原点到终点，组成一个复制单位，叫复制子复制时，解链酶等先将DNA勺一段双链解开，形成复制点，这个复制点的形状象一个叉子，故称为复制叉双链解开、复制起始P44大约20个DnaA蛋白在ATP的作用下与oriC处的4个9bp保守序列相结合在HU蛋白和ATP的共同作用下,Dna复制起始复合物使3个13bp直接重复序列变性，形成开链解链酶六体分别与单链DN於空合（需DnaC帮助），进一步解开DN

11、敏链2、RNAgl物的合成DnaB蛋白活化引物合成酶，引发RNAgI物的合成。引物长度约为几个至10个核甘酸，3、DNAJ的延伸DNA勺半不连续复制（semi-discontinuousreplication）:DNA制时其中一条子链的合成是连续的，而另一条子链的合成是不连续的，故称半不连续复制。在DN侬制时，合成方向与复制叉移动的方向一致并连续合成的链为前导链；合成方向与复制叉移动的方向相反，形成许多不连续的片段，最后再连成一条完整的DN闸为滞后链。在DN侬制过程中，前导链能连续合成，而滞后链只能是断续的合成53的多个短片段，这些不连续的小片段称为凶，崎片段4、切除RN陶物，填补缺口，连接相

12、邻的DNAt段（复制终止）当复制叉遇到约22个碱基的重复性终止子序列（Ter）时，Ter-Tus蛋白复合物能使DnaB不再将DN&S链，阻挡复制叉继续前移。P47在DN膘合酶I催化下切除RN用|物；留下的空隙由DN膘合酶I催化合成一段DNA填补上；在DNA1接酶作用下，连接相邻的DNAJ（四）复制的几种主要方式P421、双链环状、0型复制、双向等速2、滚环型：（1）模板链和新合成的链分开；（2）不需RN阿物，在正链3OHh延伸（3）只有一个复制叉；3、D环复制-单向复制的特殊方式如：动物线粒体DNA（五）真核生物中DNA勺复制特点1、真核生物每条染色体上有多个复制起点，多复制子（约150bp左

13、右）；2、复制叉移动的速度较慢（约50bp/秒），仅为原核生物的1/10。3、真核生物染色体在全部复制完之前，各个起始点不再重新开始DN侬制；真核生物快速生长时，往往采用更多的复制起点。4、真核生物有多种DN膘合酶。5、真核生物DNAM制过程中的引物及冈崎片段的长度均小于原核生物。（真核冈崎片段长约100-200bp,原核冈崎片段长约1000-2000bp。）（六）原核和真核生物DNA勺复制特点比较复制起点（ori）:原核一个，真核多个；复制子：原核一个，真核多个；复制子长度：原核长；真核短；复制叉：原核多个；真核多个；复制移动速度：原核较快；真核较慢；真核生物染色体在全部完成复制前，各起始点

14、的DNA复制不能再开始。而在快速生长的原核生物中，复制起点上可以连续开始新的DNAM制。原核生物染色体的复制与细胞分裂同步，可以多次复制；真核生物染色体的复制发生在S期，是细胞分类的特定时期，而且仅此一次。四、DNA勺修复DNA修复系统功能错配修复恢复错配碱基切除修复切除突笠的碱基核甘酸切除修复修复被破坏的DNADNAt接修复SO繇统修复嘴咤一体或甲基化DNADNA勺修复，导致变异1、 错配修复(mismatchrepair) Dam甲基化酶使母链位于5GAT/列中腺甘酸甲基化 甲基化紧随在DN侬制之后进行(几秒种后至几分钟) 根据复制叉上DNA甲基化程度，切除尚未甲基化的子链上的错配碱基2、

15、碱基切除修复excisionrepair所有细胞中都带有不同类型、能识别受损核甘酸位点的糖甘水解酶，它能特意切除受损核甘酸上的N-B-糖昔键，在DNA链上形成去喋吟或去口咤位点，统称为AP位点。一些碱基在自发或诱变下会发生脱酰胺，然后改变配对性质，造成氨基转换突变*腺喋吟变为次黄喋吟与胞喀咤配对*鸟喋吟变为黄喋吟与胞喀咤配对*胞喀咤变为尿喀咤与腺喋吟配对3、核甘酸切除修复1)通过特异的核酸切酶识别损伤部位2)由酶的复合物在损伤的两边切除几个核甘酸3) DNA聚合酶以母链为模板复制合成新子链4) DNA11接酶将切口补平4、DNA勺直接修复在DNAt解酶的作用下将环丁烷胸腺喀咤二体和6-4光化物

16、还原成为单体甲基转移酶使O6-甲基鸟喋吟脱甲基生成鸟喋吟，防止G-T配对SO混应(SOSresponse):是细胞DNAS到损伤或复制系统受到抑制的紧急情况下，细胞为求生存而产生的一种应急措施。*包括诱导DNA员伤修复、诱变效应、细胞分裂的抑制以及溶原性细菌释放噬菌体等。细胞癌变也与SO皈应有关。两个作用(1)DNA勺修复；(2)产生变异五、DNA的转座DNA的转座或叫移位(transposition):由可移位因子(transposableelement)介导的遗传物质重排现象。转座子(transposonTn):存在于染色体DNA_t可自主复制和位移的基本单位。已经发现“转座”这一命名并不

17、十分准确，因为在转座过程中，可移位因子的一个拷贝常常留在原来位置上，在新位点上出现的仅仅是它的拷贝。因此，转座有别于同源重组，它依赖于DN侬制。原核生物转座子的类型：1、插入序列(IS)IS是最简单的转座子，不含有任何宿主基因，它们是细菌染色体或质粒DNA的正常组成部分。2、复合转座子(compositetransposon)复合转座子是一类带有某些抗药性基因(或其他宿主基因)的转座子，其两翼往往是两个相同或高度同源的IS序列3、TnA家族TnA家族没有IS序列、体积庞大（5000bp以上）、带有3个基因，其中一个编码B-酰胺酶（AmpR）,另两个则是转座作用所必须的。（三）转座作用的机制转座

18、时发生的插入作用的普遍特征，是受体分子中有一段很短的（3l2bp）、被称为靶序列的DNA被复制，使插入的转座子位于两个重复的靶序列之间。对于一个特定的转座子来说，它所复制的靶序列长度是一样的，如IS1两翼总有9个碱基对的靶序列，而Tn3两端总有5bp的靶序列。靶序列的复制可能起源于特定切酶所造成的黏性DN袜端。（三）转座作用的遗传学效应p63（1）转座引起插入突变（2）转座产生新的基因（3）转座产生的染色体畸变（4）转座引起的生物进化反转录转座子（retrotransposon）:指通过RNA中介，反转录成DNAW进行转座的可动元件。第三章生物信息的传递（上）一一从DNAiURNA转录（tra

19、nscription）:生物体以DNA模板合成RNA勺过程。参与转录的物质原料：NTP（ATP,UTP,GTP,CTP）模板:DNA酶：RNA聚合酶其他蛋白质因子RN始成方向：5至U3转录的不对称性：在RNA勺合成中，DNA勺二条链中仅有一条链可作为转录的模板，称为转录的不对称性。与mRN麻列相同的那条DNAS称为编码链；将另一条根据碱基互补原则指导mRNA成的DNAJ称为模板链。DN粉子上车录出RNA勺区段，称为结构基因。转录单元（transcriptionunit）一段从启动子开始至终止子结束的DNAff列。二、参与转录起始的关键酶与元件（一）RNA聚合酶原核生物RNA!合酶（大肠杆菌为例

20、）-全酶农心酶十0因子亚基基因相对分子量亚基数组分功能arpoA365002核心酶核心酶组装，启动子识别rpoB1510001核心酶B和B共同形成B/rpoC1550001核心酶RNA合成的活性中心3?11000（需查）1核心酶?(TrpoD700001CT因子存在多种（T因子，用于识别不同的启动子真核细胞的三种RN婢合酶特征比较酶小转录产物相对活性对口-鹅膏蕈碱的敏感性RNA聚合酶I核仁rRNA50-70%不敏感RNA聚合酶n核质hnRNA20-40%敏感RNA聚合酶田核质tRNA约10%存在物种特异性RN婢合酶与DN婢合酶的区别RN膘合酶DN膘合酶大小（M）大,4.8x105dol小，1.

21、09X105dol引物无有产物较短，游离较长，与模板以氢键相连作用方式一条链的某一段两条链同时进行外切酶活性无5，3,3，5校对合成能力有修复能力无有（二）启动子（promoter）启动子定义：指能被RN婢合酶识别、结合并启动基因转录的一段DN崎列。TATAK:酶的紧密结合位点（富含AT碱基，利于双链打开）TTGAC餐：提供了RNA!合酶全酶识别的信号转录起点-与新生RNAS第一个核甘酸相对应DNAS上的碱基。真核生物启动子的结构核心启动子（corepromoter）定义：指保证RNA!合酶II转录正常起始所必需的、最少的DNA#列，包括转录起始位点及转录起始位点上游TATAK作用：选择正确的

22、转录起始位点，保证精确起始2、上游启动子元件包括CAATt（CCAAT和GCa（GGGCG博作用：控制转录起始频率。（三）转录起始复合物-二元闭合复合物、二元开链复合物、三元复合物。（原核）三、转录的基本过程1、起始位点的识别：RNA!合酶与启动子DN敏链相互作用并与之相结合的过程。RN婢合酶全酶(2)与模板结合2、转录起始RN膘合酶全酶(2)与模板结合?DNA链解开?在RN膘合酶作用下发生第一次聚合反应，形成转录起始复合物5-pppG-OH+NTP5-pppGpN-OH3+ppi转录起始复合物：RNApol(2)-DNA-pppGpN-OH33、RNAJ的延伸亚基脱落，RNA-pol聚合酶核

23、心酶变构，与模板结合松弛，沿着DNA莫板前移；在核心酶作用下，NTP不断聚合，RNAJ不断延长。注意：9个核甘酸以前还在启动子区，容易脱落，一旦形成9个以上的核甘酸并离开启动子区，转录正式进入眼神阶段。4、转录终止终止子(terminator):位于基因的末端，在转录终止点之前有一段回文序列(反向重复序列)约6-20bp。真核生物终止：由一段特定序列5-AATAAA3和回文序列(反向重复序列)组成。分为两类：强终止子部终止子：不依赖Rho(p)因子的终止。弱终止子一需要p因子(rhofactor),又称为p依赖性终止子(Rho-dependentterminator)不依赖因子的终止当RNAJ

24、延伸到转录终止位点时，RN膘合酶不再形成新的磷酸二酯键，RNA-DNAfe合物分离，转录泡瓦解，DNAK复成双链状态，而RN膘合酶和RNAS都被从模板上释放出来，这就是转录的终止。终止位点上游一般存在一个富含G渊基的二重对称区，RN腰成发夹结构；在终止位点前面有一段由4-8个A组成的序列，RNA勺3端为寡聚U发夹式结构和寡聚U的共同作用使RNAA三元复合物中解离出来。依赖因子的终止因子：六聚体蛋白、水解各种核甘三磷酸促使新生RNAJ从三元转录复合物中解离出来，从而终止转录。(二)、真核生物的转录过程1 .转录起始真核生物的转录起始上游区段比原核生物多样化，转录起始时，RNA-pol不直接结合模

25、板，具起始过程比原核生物复杂。(1) .转录起始前的上游区段?顺式作用元件(cis-actingelement):影响自身基因表达活性的非编码DNAff歹限例：启动子、增强子、弱化子等?增强子：在启动区存在的能增强或促进转录的起始的DNAff列。但不是启动子的一部分。特点：1.远距离效应；2.无方向性；3.顺式调节；4.无物种和基因的特异性；5.具有组织特异性；6.有相位性；7.有的增强子可以对外部信号产生反应。(2) .转录因子：能直接、间接辨认和结合转录上游区段DNA的蛋白质，现已发现数百种，统称为反式作用因子(trans-actingfactors)。反式作用因子中，直接或间接结合RN婢

26、合酶的，则称为转录因子(transcriptionalfactors,TF)。参与RNA-polII转录的TFH-TFIIDTFHA、TFHB、TFHF、TFHE、TFHH(3)转录起始前复合物(pre-initiationcomplex,PIC)真核生物RNA-pol不与DN粉子直接结合，而需依靠众多的转录因子。(4)模板理论(piecingtheory)一个真核生物基因的转录需要3至5个转录因子。转录因子之间互相结合，生成有活性、有专一性的复合物，再与RNA!合酶搭配而有针对性地结合、转录相应的基因。2 .转录延伸真核生物转录延长过程与原核生物大致相似，但因有核膜相隔，没有转录与翻译同步的

27、现象。RNA-pol前移处处都遇上核小体。转录延长过程中可以观察到核小体移位和解聚现象。3 .转录终止一一和转录后修饰密切相关。四、转录后加工5端加帽、3端加尾、RNA勺剪接、RNA勺编辑1、在5端加帽5端的一个核甘酸总是7-甲基鸟核甘三磷酸(m7Gppp。mRNA5端的这种结构称为帽子(cap)。帽子结构功能：能被核糖体小亚基识别，促使mRNA口核糖体的结合；m7Gppp吉构能有效地封闭mRNA5末端，以保护mRNAfe受5核酸外切酶的降解，增强mRNA勺稳定。2、3端加尾-多聚腺甘酸尾巴-AAUAAA:准确切割。加poly(A)多聚腺甘酸尾巴功能：提高了mRNAE细胞质中的稳定性。3、RN

28、A勺剪接生物体含子的主要类型：U-AGAU-ACI类含子、II类含子田类含子参与RNA接的物质：snRNA(核小分子RNA、snRNP(与snRNA吉合的核蛋白)、核RNA(U1、U2、U4、U5U6)4、RNA勺编辑*编辑(editing)是指转录后的RNAB编码区发生碱基的突变、加入或丢失等现象。五、原核生物与真核生物mRNA勺特征比较1、原核生物mRNA勺特征半衰期短多以多顺反子的形式存在单顺反子mRNA只编码一个蛋白质的mRNA多顺反子mRNA编码多个蛋白质的mRNAZ:(3-半乳糖甘酶丫：透过酶A:乙酰基转移酶ZYA为结构基因 5端无“帽子”结构，3端没有或只有较短的poly(A)结

29、构。 SD序列：原核生物起始密码子AUGk游7-12个核甘酸处有一被称为SD序列的保守区。mRN冲用于结合原核生物核糖体的序列。P852、真核生物mRNA勺特征“基因”的分子生物学定义：产生一条多肽链或功能RN期必需的全部核甘酸序列。 5端存在“帽子”结构多数mRNA3端具有poly（A）尾巴（组蛋白除外）以单顺反子的形式存在六、RN始成与DN始成异同点相同点：1、都以DNAS作为模板2、合成的方向均为5-33、聚合反应均是通过核甘酸之间形成的3,5-磷酸二酯键，使核甘酸链延长。不同点：复制模板两条链均复制模板链转录（不对称转录）原料（INTPNTP酶DNA!合酶RNA!合酶产物子代双链DNA

30、（半保留复制）mRNAtRNA,rRNA配对/-T;G-CA-U;T-A;G-C引物FMA引物无第四章生物信息的传递（下）一从mRN剧蛋白质翻译：指将mRNAit上的核甘酸从一个特定的起始位点开始，按每三个核甘酸代表一个氨基酸的原则，依次合成一条多肽链的过程。蛋白质合成的场所是核糖体。蛋白质合成的模板是mRNA模板与氨基酸之间的接合体是tRNA蛋白质合成的原料是20种氨基酸一、遗传密码？a?a三联子（一）三联子密码：mRNAl上每三个核甘酸翻译成蛋白质多肽链上的一个氨基酸，这三个核甘酸就称为密码子或三联子密码（tripletcoden）。至1966年，20种氨基酸对应的61个密码子和三个终止密

31、码子全部被查清。（三）遗传密码的性质1、连续性编码蛋白质氨基酸序列的各个三联体密码连续阅读，密码间既无间断也无交叉。基因损彳引起mRN阑读框架的碱基发生插入或缺失，可能导致框移突变（frameshiftmutation）。从mRN后端起始密码子AUGS3端终止密码子之间的核甘酸序列，各个三联体密码连续排列编码一个蛋白质多肽链，称为开放阅读框架（openreadingframe,ORF2、简并性由一种以上密码子编码同一个氨基酸的现象称为简并（degeneracy）,对应于同一氨基酸的密码子称为同义密码子（synonymouscodon）。3、通用性与特殊性蛋白质生物合成的整套密码，从原核生物到人

32、类都通用。已发现少数例外，如动物细胞的线粒体、植物细胞的叶绿体。4、摆动性转运氨基酸的tRNA上的反密码子需要通过碱基互补与mRNAt的遗传密码子反向配对结合，在密码子与反密码子的配对中，前两对严格遵守碱基配对原则，第三对碱基有一定的自由度，可以“摆动”，这种现象称为密码子的摆动性。二、tRNA的结构、功能与种类（一）tRNA的结构1、二级结构：三叶草形2、三级结构：“L”形（二）tRNA的功能1、解读mRNA勺遗传信息2、运输的工具，运载氨基酸tRNA有两个关键部位：3端CCA接受氨基酸，形成氨酰-tRNA。与mRNA吉合部位一反密码子部位tRNA凭借自身的反密码子与mRN龌上的密码子相识别

33、，把所带氨基酸放到肽链的一定位置。1、起始tRNA和延伸tRNA能特异地识别mRNAI板上起始密码子的tRNA称起始tRNA,其他tRNA统称为延伸tRNA。真核生物：起始密码子AUG所编码的氨基酸是Met,起始AA-tRNA为Met-tRNAMet。原核生物：起始密码子AUG所编码的氨基酸并不是甲硫氨酸本身，而是甲酰甲硫氨酸，起始AA-tRNA为fMet-tRNAfMet2、同工tRNA代表同一种氨基酸的tRNA称为同工tRNA同工tRNA既要有不同的反密码子以识别该氨基酸的各种同义密码，又要有某种结构上的共同性，能被相同的氨基酰-tRNA合成酶识别（P119）。3、校正tRNA无义突变校正

34、tRNA可以通过改变反密码子区校正无义突变错义突变校正tRNA通过反密码子区的改变把正确的氨基酸加到肽链上，合成正常的蛋白质。无义突变：在蛋白质的结构基因中，一个核甘酸的改变可能使代表某个氨基酸的密码子变成终止密码子（UAGUGAUAA,使蛋白质合成提前终止，合成无功能的或无意义的多肽，这种突变就称为无义突变。错义突变：由于结构基因中某个核甘酸的变化使一种氨基酸的密码子变为另一种氨基酸的密码子，这种基因突变叫错义突变。GGA（甘氨酸）AGA（精氨酸）四、氨酰-tRNA合成酶?AA-tRNA合成酶是一类催化氨基酸与tRNA结合的特异性酶，它既能识别tRNA,又能识别氨基酸，对两者都具有高度的专一

35、性。三、核糖体的结构与功能核糖体是由rRNA（ribosomalribonucleicacid）和多种蛋白质结合而成的一种大的核糖核蛋白颗粒，蛋白质肽键的合成就是在这种核糖体上进行的。细菌是70s50s30s哺乳动物是80s60s40s（二）核糖体的功能：合成蛋白质在单个核糖体上，可化分多个功能活性中心，在蛋白质合成过程中各有专一的识别作用和功能。mRNA吉合部位小亚基结合或接受AA-tRNA部位（A-）大亚基结合或接受肽基tRNA的部位一一大亚基肽基转移部位（P的）大亚基形成肽键的部位（转肽酶中心）一一大亚基四、蛋白质合成的过程（生物学机制）?氨基酸的活化?翻译的起始?肽链的延伸?肽链的终止

36、?蛋白质前体的加工（一）氨基酸的活化原核生物中，起始氨基酸是：甲酰甲硫氨酸起始AA-tRNA是：fMet-tRNAfMet真核生物中，起始氨基酸是：甲硫氨酸起始AA-tRNA是：Met-tRNAMet（二）翻译的起始原核生物（细菌）为例：所需成分：30S小亚基、50S大亚基、模板mRNAfMet-tRNAfMet、GTPMg2+翻译起始因子：IF-1、IF-2、IF-3、翻译起始（翻译起始复合物形成）又可被分成3步：（P129）1.核蛋白体大小亚基分离2、30S小亚基通过SD序列与mRN模板相结合。3.在IF-2和GTP的帮助下，fMet-tRNAfMet进入小亚基的P位，tRNA上的反密码子

37、与mRNAt的起始密码子配对。4、带有tRNAmRNA口3个翻译起始因子的小亚基复合物与50S大亚基结合，GTPt）解，释放翻译起始因子。真核生物翻译起始的特点核糖体较大，为80S;起始因子比较多； mRNA5端具有m7Gpp由冒子结构 Met-tRNAMetmRNA勺5端帽子结构和3端polyA都参与形成翻译起始复合物；真核生物翻译起始复合物形成（区别原核生物）原核生物中30S小亚基首先与mRNAI板相结合，再与fMet-tRNAfMet结合，最后与50S大亚基结合。而在真核生物中，40S小亚基首先与Met-tRNAMet相结合，再与模板mRNA吉合，最后与60S大亚基结合生成80SmRNA

38、Met-tRNAMet起始复合物（P131）。（三）肽链的延伸肽链延伸由许多循环组成，每加一个氨基酸就是一个循环，每个循环包括：AA-tRNA与核糖体结合、肽键的生成和移位。延伸因子（elongationfactor,EF）:原核生物：EF-T（EF-Tu,EF-Ts）、EF-G真核生物：EF-1、EF-21、AA-tRNA与核糖体A位点的结合需要消耗GTP并需EF-Tu、EF-Ts两种延伸因子2、肽键形成：是由转肽酶/肽基转移酶催化3、移位：核糖体向mRNA3端方向移动一个密码子。需要消耗GTP并需EF-G延伸因子A位点是新到来的氨酰-tRNA的结合位点。P位点是肽酰-tRNA的结合位点。E

39、位点是延伸过程中释放tRNA的位点，即，去氨酰-tRNA通过E位点脱出，释放到核糖体外的胞质中。（四）肽链的终止RF1:识别终止密码子UA街口UAG终止因子RF2:识别终止密码子UA街口UGARF3:具GTPB活性，刺激RF1和RF2活性，协助肽链的释放真核生物只有一个终止因子（eRF）（五）蛋白质前体的加工1、N端fMet或Met的切除2、二硫键的形成3、特定氨基酸的修饰磷酸化、糖基化、甲基化、乙基化、羟基化和竣基化4、切除新生肽链中非功能片段（六）蛋白质折叠由核糖体合成的所有新生肽链必须通过正确的折叠才能形成动力学和热力学稳定的三位构象，从而表现出生物学活性或功能。新生多肽一一级结构-二级

40、结构-三级结构已经具有活性一（对于寡聚蛋白需要组装称为四级结构才有活性。(七)蛋白质合成抑制剂?青霉素、四环素和红霉素只与原核细胞核糖体发生作用，从而阻遏原核生物蛋白质的合成，抑制细菌生长。被广泛用于人类医学。?氯霉素和喋吟霉素既能与原核细胞核糖体结合，又能与真核生物核糖体结合，妨碍细胞蛋白质合成，影响细胞生长。氯霉素有时也用于治病，但剂量和周期受到较严控制。五、蛋白质的运转机制1、翻译-运转同步机制2、翻译后运转机制(1)线粒体蛋白质跨膜运转(2)叶绿体蛋白质的跨膜运转3、核定位蛋白的运转机制4、蛋白质的降解?*蛋白质的合成位点与功能位点常常被细胞的膜所隔开，蛋白质需要运转。?*核糖体是真核生物细胞合成蛋白质的场所，任何时候都有许多蛋白质被输送到细胞质、细胞核、线粒体和质网等各个部分，补充和更新细胞功能。?*细胞各部分都有特定的蛋白质组分，蛋白质必须准确无误地定向运送才能保证生命活动的正常进行。?*细胞中蛋白质的合成：绝大多数在细胞质中合成；一小部分在细胞器(叶绿体和线粒体)中合成。?*定位于细胞器的大部