洁净区沉降菌测定规程

1、XXXXXXX 有限公司洁净区（室）沉降菌测定操作规程编号页数共页制定人制定日期年月日修订日期年月日审核人审核日期年月日颁发部门批准人批准日期年月日生效日期年月日分发部门1. 目的 : 明确洁净区 ( 室) 沉降菌的质量控制标准，规范洁净区 ( 室) 沉降菌的检验操作方法2. 适用范围：洁净区 ( 室 ) 沉降菌的控制和测试方法，及车间洁净室和洁净区无菌室或无菌区域（包括洁净工作台）的沉降菌的测定和环境的验证。3. 责任者：质量控制部洁净区 ( 室) 沉降菌检验操作人员车间 QC检验操作人员。4. 操作内容和方法：4.1. 定义：菌落细菌培养后，由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落，简称CF

2、U，通常用个数表示。沉降菌 用规定的方法收集到的活微生物粒子，通过专用的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。4.2. 应对微生物进行动态监测，评估无菌生产的微生物状况。监测方法有沉降菌法、定量空气浮游菌采样法和表面取样法（如棉签擦拭法和接触碟法）等。动态取样应当避免对洁净区造成不良影响。成品批记录的审核应当包括环境监测的结果。对表面和操作人员的监测，应当在关键操作完成后进行。在正常的生产操作监测外，可在系统验证、清洁或消毒等操作完成后增加微生物监测。洁净区微生物监测的动态标准(1)如下：洁净度浮游菌沉降菌（ 90mm）表面微生物接触（ 55mm）5 指手套级别cfu/m 3cfu /

3、4 小时 (2)cfu / 碟cfu / 手套A 级1111B 级10555C 级1005025D 级200100504.2.4.1表中各数值均为平均值。4.2.4.2 单个沉降碟的暴露时间可以少于4 小时，同一位置可使用多个沉降碟连续进行监测并累积计数。4.3.沉降菌测试操作方法：4.3.1洁净区沉降菌控制限度：洁净度级别沉降菌/皿测定频次洁净度级别沉降菌/皿测定频次A 级 11次/日D 级1001次/月C级501次/周4.3.2、测试操作方法：4.3.2.1本测试方法采用沉降法， 即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以

4、平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。4.3.2.2所用的仪器和设备 高压消毒锅：使用时应严格按照仪器说明书操作。 恒温培养箱： 必须定期对培养箱的温度计进行检定。培养皿：一般采用 90mm×15mm的硼硅酸玻璃培养皿。培养基：普通肉汤琼脂培养基 （微生物限度检查法） 或其他药典认可的培养基。4.3.3.测试操作步骤：4.3.3.1采样操作方法：将已制备好的培养皿按4.2.4.2的要求放置，打开培养皿盖，使培养基表面暴露 4h，再将培养皿盖盖上后倒置。4.3.3.2培养。 全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。 在 30-35 培养箱

5、中培养，时间不少于72h。 每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染。可每批选定3 只培养皿作对照培养。4.3.3.3菌落计数：用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，然后用5 10 倍放大镜检查，有否遗漏。若培养皿上有 2 个或 2 个以上的菌落重叠，可分辨时仍以 2 个或 2 个以上菌落计数。操作注意事项：测试用具要作灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。采取一切措施防止人为对样本的污染。对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。由于细菌种类繁多， 差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落， 并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别，必要时用

6、显微镜鉴别。采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。4.3.4.、测试操作规则。4.3.4.1测试操作状态。沉降菌测试前， 被测试洁净室的温湿度须达到规定的要求， 静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内。沉降菌测试前，被测试洁净室已经过消毒。测试状态有静态和动态两种，测试状态的选择必须符合生产的要求，并在报告中注明测试状态。4.3.4.2测试人员 测试人员必须穿戴符合环境洁净级别的工作服。 静态测试时，室内测试人员不得多于二人。测试时间： 对单向流，如 A 级净化房间及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于 10min 后开始。 对非单向流 , 如 C

7、级、D 级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于 30min 后开始。沉降菌计数：采样点数目及其布置。最少采样点数目 ( 沉降法的最少采样点数可按表1 确定 ) ：。表 1最少采样点数目面2洁净度级别积（ M）A 级C级D级102-32210 2042220 4082240 1001642100 20040103200 40080206400 100016040131000 200040010032200080020063注：表中的面积，对于单向流洁净室，是指送风面面积。对于非单向流洁净室是指房间的面积。在满足最少测点数的同时，还应满足最少培养皿数，见表2表 2最少培养皿数洁净度级

8、别所需 90mm培养皿（以沉降4 h 计）A 级14C 级2D 级2采样点的布置。 采样点的位置可以同悬浮粒子测试点,采样点的布置图示如下：····注：·为采样点。图 A1A1 洁净棚（层流罩），洁净工作台等局部空气净化设施的采样点布置：A1.1水平单向流A1.2垂直单向流图 A2图 A3 工作区采样点的位置离地 0.8m1.5m 左右（略高于工作面） 。 可在关键设备或关键工作活动范围处增加采样点。4.4 、记录测试报告中应记录房间温度、相对湿度、压差及测试状态。测试报告的编写见标准的附录4.5 、结果计算。用计数方法得出各个培养皿的菌落数。平均菌落数的计算，见式（1）M1+M2+Mn平均菌落数 M=（1）n式中： M-平均菌落数，M1-1号培养皿菌落数，M2-2号培