生物学基础实验技能讲义

1、生物学基础实验技能实验讲义王玉倩 冯晓英 郭娟 张潮 汤晓辛 唐婧 编 贵州师范大学生命科学学院2012年6月目 录一、显微操作1实验一 显微镜的使用方法与绘图1实验二 简单临时装片的制作与观察，油镜的使用5实验三 压片的制作，涂片的制作7实验四 生物材料的解剖结构观察9二、溶液配制10实验五 玻璃器皿的洗涤10实验六、溶液的配制12实验七、溶液的配制14实验八 溶液pH值的调节17三、分光光度计的使用19实验九 分光光度法的介绍及分光光度计的使用方法19实验十 混合物中CuSO4的测定23实验十一 分光光度法测定叶绿素的含量25四、无菌操作27实验十二 无菌操作技术27一、显微操作实验一 显

2、微镜的使用方法与绘图一、 实验目的1、掌握显微镜的构造及原理，熟练使用光学显微镜。2、了解显微镜使用的基本要求、注意事项及一般维护方法。3、学习生物绘图的基本要求及方法。二、 实验原理显微镜的原理是经过两次成像，成为倒立的虚像。第一次先经过物镜成像，在物镜的一倍焦距和两倍焦距之间成放大的倒立的实像。第一次成的物像，经过目镜的第二次成像，是一个虚像。倒置的像常常使初学者使用发生困难。1、 显微镜的构造机械部分(1) 镜座显微镜最下面呈马蹄形或园形的部分，起稳定和支持镜身作用。(2) 镜柱从镜座向上直立的短柱。上连镜臂，下连镜座，可以支持镜臂和载物台。(3) 镜臂弯曲成马蹄形的部分，便于手持，下端

3、与镜柱相连接的地方有一个倾斜关节，可使镜臂倾斜，便于观察。(4) 载物台自镜臂下端向前伸出，放置标本用的平台，其中央有一个园孔，叫通光孔。台上有一移动器（老式的左右各有一个压片夹），用以固定和移动标本。(5) 镜筒和镜臂上方连接的园筒部分。有的显微镜镜筒内有一抽管，可适当抽长，一般长度是160170毫米。镜筒上端装有目镜，下端有一个可转动的园盘，叫物镜转换器（或叫物镜旋转盘，固着在镜筒下端，分两层，上层固着不动，下层可自由转动。转换器上有24个圆孔，用来安装不同倍数的低倍或高倍物镜）。作用是保护成像的光路与亮度。(6) 调节器（也叫调节螺旋）为镜壁上两种可转动的螺旋，一大一小，能使镜筒上下移动

4、，调节焦距。大的叫粗准焦螺旋，位于镜臂的上方，可以转动，以使镜筒能上下移动，从而调节焦距，升降镜筒较快，用于低倍镜对焦；小的叫细准焦螺旋，位于镜臂的下方，它的移动范围较粗准焦螺旋小，升降镜筒较慢，可以细调焦距。(7) 倾斜关节镜柱和镜臂交界处有一个能活动的关节。它可以使显微镜在一定的范围内后倾（一般倾斜不得超过45°）便于观察。但是在使用临时封片观察时，禁止使用倾斜关节，尤其是装片内含酸性试剂时严禁使用，以免污损镜体。(8) 载物台从镜臂向前方伸出的金属平台。呈方形或圆形，是放置玻片标本的地方。其中央具有通光孔，在通光孔的左右有一个弹性的金属压片夹，用来压住载玻片。较高级的显微镜，在

5、载物台上常具有推进器，它包括夹片夹和推进螺旋，除夹住切片外，还可使切片在载物台上移动。光学部分(1) 目镜装于镜筒上方，由两组透镜构成，目镜的作用是把物镜所形成的倒立实像再放大成为一个虚像。目镜上刻有×，×，×，×，×等符号，表示放大倍数。我们所观察到的标本的物像，其放大倍数是物镜和目镜放大倍数的乘积。如物镜是×，目镜是×，其物像的放大倍数是×倍。在目镜内两个透镜间的光栏上可装一根剪短的毛发，做为指针，用以指示要观察的材料。(2) 物镜装在镜筒下端物镜转换器的孔中，一般的显微镜有个物镜镜头，每个镜头都是由一系列的复

6、式透镜组成的，其上也有放大倍数记号，有×，×，×及×。×及×物镜是低倍镜，×是高倍镜，×是油镜。低倍镜常用于搜索观察对象及观察标本全貌，高倍镜则用于观察标本某部分或较细微的结构，油镜则常用于观察微生物或动植物更细微的结构。(3) 聚光器（集光器）位于载物台（通光孔）下方，由两块或数块镜组成，它能将反光镜反射来的光线集中以射入物镜和目镜，有的聚光器可升降，便于调光，集光器下有一可伸缩的园形光圈，叫虹彩光圈，可调集光器口径的大小和照射面，以调节光线强弱（有的显微镜只有遮光极而无集光器）。光线过强时，可缩小虹彩光圈。(4

7、) 反光镜是显微镜观察时获得光源的装置，位于显微镜镜座中央，一面为平面镜，一面为凹面镜。转动反光镜，可使外面光线通过集光器照射到标本上。使用时，光线强用平面镜，光线弱用凹面镜。2、显微镜使用（1）放置 放在左胸前，离桌边5cm的位置.（2）对光将低倍镜转至镜筒下方与镜筒成一直线。拨动反光镜，调节至视野最亮无阴影。反光镜有平、凹两面，光源强时用平面，较暗时用凹面，需要强光时，将聚光器提高，光圈放大；需要弱光时，将聚光器降低，或光圈适当缩小。（3）低倍镜使用 升高镜筒，把玻片标本放在载物台中央，使材料正对通光孔的中心，然后用压片夹压住载玻片的两端。转动粗调节器使镜筒下降至物镜距制片0.5cm。于转

8、动粗调节器的同时，须俯身在镜旁仔细观察物镜与标本之间的距离。（注意不可在调焦点时边观察边下必镜筒，否则会使物镜和玻片触碰，压碎破片，损坏物镜）。左眼于目镜观察，同时左手转动粗调节，使镜筒徐徐上升以调节焦距，使视野内的物象看到上时即停，再调微调节器，至标本清晰为止。如一次调节看不到物像，应重新检查材料是否在光轴线上，重新移正材料，再重复上述操作过程直至物像出现和清晰为止。找到物像后还可根据材料的厚薄、颜色、成像的反差强弱等是否合适再进行调节，如果太亮，可降低聚光器或缩小虹彩光圈，反之则升高聚光器或开大光圈。(1) 高倍镜使用在低倍镜下找到要观察的目标，移到视野中央，换高倍镜，转动细调节螺旋使影像

9、清晰。如果高倍物镜离盖玻片较远看不到物像时，则需重新调整焦点；此时眼睛应从侧面注视物镜，并小心地转动粗调焦螺旋使镜筒慢慢地下必到高倍镜头几乎要与切片接触时为止（注意切勿使镜头紧压玻片，以锡损坏镜头和压碎玻片标本）。然后再由目镜向下观察，同时向内，向右转动粗调焦螺旋，稍微升高镜筒至看见物像后，换细调焦螺旋，使物像看得更加清晰为止。(2) 收镜 经聚光器降下，再将物镜转成"八"字形，转动粗调节器使镜筒下降，以免物镜与聚光器相碰。应将镜头转为低倍镜，再水平取下切片，取下时要注意勿使切片触及镜头。切片取下后，再转动物镜转换器，使物镜镜头与通光孔错开。下降镜筒，使两个物镜位于载物台上

10、通光孔的两侧，并将反光镜还原成与桌面垂直。将显微镜放回原处，并盖上防尘罩。(3) 维护显微镜在从木箱中取出或装箱时，右手紧握镜臂，左手稳托镜座，轻轻取出。不要只用一只手提取，以防显微镜坠落，然后轻轻放在实习台上或装 入木箱内。显微镜放到实习台上时，先放镜座的一端，再将镜座全部放稳，切不可使镜座全面同时与台面接触，这样震动过大，透镜和微调节器的装置易损坏。显微镜须经常保持清洁，勿使油污和灰尘附着。如透镜部分不洁时，光学部分可用擦镜纸沾清洁液清洁。机械部分用干净的软布清洁。显微镜不能在阳光下暴晒和使用。目镜和物镜不要随便抽出和卸下必须抽取目镜时，须将镜筒上口净用布遮盖，避免灰尘落入镜筒内。更换物镜

11、时，卸下后应倒置在清洁的台面下，并随即装入木箱的置放物镜的管内。显微镜用完后，取下标本片，经聚光器降下，再将物镜转成"八"字形，转动粗调节器使镜筒下降，以免物镜与聚光器相碰。显微镜应放在干燥的地方，以防生霉。2、 生物绘图的基本要求及方法(1)具有高度的科学性和准确性。认真观察对象，选出正常典型的材料。形态结构要准确，比例要正确，要求真实，立体，美观。(2)画图前在纸上安排好各图的位置和比例，并预留书写图题与注字的地方。(3)先绘制草图，位置略偏左，右边留着注图。图面要力求整洁，用削尖的HB铅笔勾出图形轮廓，铅笔要保持尖锐，尽量少用橡皮。注意大小要与实物想符合。(4)正式绘

12、图用2H至3H的绘图硬铅笔，描出与物体吻合的线条。线条要一笔勾出，光滑清晰匀称，接头处无分叉和痕迹，毋重复描绘。(5)阴影用圆点衬，表示明暗深浅和立体感。点点要圆而整齐，大小一致。(6)绘图要完善，字体用正楷，大小要均匀，不能潦草。注图线用直尺画出，引出平行线，间隔要均匀，且一般多向右边引出，图注部分接近时可用折线，但注图线之间不能交叉，图注要尽量排列整齐。(7)绘图及图注一律用铅笔，不要用钢笔、水笔、圆珠笔。(8)实验题目写在报告纸上方，图题和材料的名称写在图的下方并注明放大倍数（目镜×物镜）。三、注意事项1、显微镜是精密仪器，使用时一定要严格地按规程进行操作。同时，显微镜的几个主

13、要部件都是配套的，并已编号，不能互换，特别注意不要弄错镜头。2、要注意保持显微镜清洁，特别是光学部分，如有灰尘，要用擦镜纸轻轻擦去。若使用过油镜头，需用二甲苯擦拭干净镜头与聚光器上的油。3、显微镜安放位置，显微镜应安放在离桌边缘5 cm、镜筒向前，显微镜位置稍靠左侧。4、对光根据光线的强弱来选择平面镜或凹面镜；用低倍镜进行对光，把低倍镜位置放低；在转动转换器时，物镜到位，光圈调节好，视野光线均匀、明亮。5、转动物镜时，不可直接用手接触，而应该通过转动物镜转换器。6正确使用高倍物镜的方法。由于高倍物镜的工作距离小，镜头易损坏，转动粗准焦时，眼睛要注视镜筒的下降，并且把光圈开大。不要调节粗准焦螺旋

14、，避免物镜损坏。7用显微镜观察时，切忌睁一眼闭一眼，要左眼窥镜，右眼作图。8不是倍数越大，越清晰。如果目镜倍数过大，得到的放大虚像则很不清晰。在低倍镜下能看清楚的物像，不必用高倍镜观察。9载玻片上多余的水要即时擦干净，载物台上应随时保持清洁。10标本必须加盖玻片，制作带水或药液的玻片标本时，必须两边擦净再观察，千万不可将药水沾到镜头上。11注意防潮，在观察时，显微镜上凝结的水珠（尤其在冬天观察，呼吸中的水分常在显微镜上凝结成水珠），要及时擦掉，显微镜要放干燥处保存，镜箱内应放一袋兰色硅胶干燥剂。12如遇机件不灵，使用困难时，千万不可用力转动，更不要任意拆修，应立即报告指导教师，要求协助排除故障

15、，以免造成损坏。13视野中物像与标本移动的关系：如视野中某观察对象位于左下方如何移到中央，应将装片或切片向左下方移动（同向移动）。原因是视野中物像移动的方向或切片移动的方向相反。四、结果与讨论1. 显微镜的各部分结构2. 绘制一个细胞结构图实验二 简单临时装片的制作与观察，油镜的使用（演示）一、 实验目的掌握临时装片的制作方法，并熟悉绘制细胞图的技能，了解油镜的使用方法。二、 实验内容和方法(一)、简单临时装片的制作1. 实验步骤擦：指的是擦玻片，防止玻片上的杂质影响观察效果。一手用食指和拇指轻轻夹住玻片的边缘，另一只手拿纱布将玻片放在两层纱布之间，用食指和拇指夹住轻轻擦拭，用力要均匀。滴：主

16、要指载玻片上滴加的液体。根据所做装片不同，滴加的液体不同。以适量为最佳，水滴太小容易产生气泡或干涸，影响观察，水滴太大容易溢出载玻片而污染显微镜。取：指取要观察的物体。以洋葱表皮为例，用镊子撕取洋葱鳞茎表面的薄膜，以05cm×05cm为宜。放：将所取的物体放在载玻片液滴的中央。将撕下的薄膜放在载玻片中央的水滴中，用镊子将其仔细展平，撕下的薄膜越大就越不容易展平。盖：指盖盖玻片，先使盖玻片的一端接触载玻片的水滴，然后慢慢的放下，防止出现气泡影响观察效果。滴：指的是滴加染色液。滴到盖玻片的一端，滴加的不宜过多。染色，将装片从显微镜载物台上取下，放在桌面上进行染色。不能直接在显微镜的载物台

17、上进行染色，否则会污染显微镜，染色后的装片一定要擦干净周边的液体，再用显微镜观察。吸：用吸水纸从盖玻片的另一端吸引，使染液浸透所取物体。2. 实验材料和方法（1） 洋葱表皮细胞方法同上（2） 果肉离散细胞用解剖针跳去番茄果肉少许，放在载玻片上一滴清水中，用针将果肉细胞拨匀，盖上盖玻片观察。（二）、油镜观察材料和器具11218h的微生物培养物。 2染色液：草酸铵结晶紫、石碳酸复红。 3仪器及其他用具：显微镜、酒精灯、载玻片、盖玻片、接种环、废液缸、洗瓶、火柴、纱布、擦镜纸、吸水纸、无菌水、香柏油、二甲苯等。方法及步骤1、简单染色 涂片：取一块载玻片，滴一小滴（或用接种环挑取少许）无菌蒸馏水于载玻

18、片中央，用接种环按无菌操作要求挑取少量菌体与水滴充分混匀，涂片要薄而均匀。干燥、固定：手执玻片一端，将涂有菌体的面朝上，通过火焰23次（用手指触及玻片背面，以不烫手为宜）。其目的是使细菌细胞质凝固，以固定细菌细胞形态，并使之牢固附着在载玻片上。染色：将玻片平放于玻片搁架上，在涂菌的部位滴加适量的石炭酸复红(或草酸铵结晶紫)，染色约12min。水洗：倾去染色液，用洗瓶中的自来水冲去染色液，直至涂片上流下的水无色为止。干燥：自然干燥，或用吸水纸轻轻吸干水分（注意勿擦去菌体）。镜检：待标本片完全干燥后，用油镜镜检。2油镜的使用 调节光源：将10×的低倍镜转到工作的位置。上升聚光器，打开可变

19、光阑，安装在镜座内的光源灯可通过调节电压以获得适当的照明亮度，应根据光源的强度及所用物镜的放大倍数选用凹面或凸面反光镜并调节其角度，使视野内的光线均匀，亮度适宜。 调节双筒显微镜的目镜：根据使用者的个人情况，双筒显微镜的目镜间距可以适当调节，而左目镜上一般还配有曲光度调节环，可以适应眼距不同或两眼视力有差异的观察者。 调节聚光器和物镜的数值口径相一致：取下目镜直接向镜筒内观察，先将可变光阑缩到最小，再慢慢打开，使聚光器的孔径与视野的直径一样大，然后再放回目镜。目的是使入射光所展开的角度与镜口角度相符合，否则因光圈开得太大而超过物镜的数值口径时会产生光斑，如光圈收得太小则降低分辨率，从而影响了物

20、像的清晰度。因为各物镜的数值口径不同，所以每转一次物镜都要进行调节。 低倍镜观察：调节粗螺旋，下降载物台，将染色标本片置于载物台上，用标本夹好，移动推进器将观察的位置移到物镜的正下方，调节粗螺旋，缓慢上升载物台，调节到物像清晰为止。移动标本片，把合适的观察部位移至视野的中心。 高倍镜观察：眼睛从侧面观察，旋转转换器，将高倍镜转至正下方，注意避免与玻片相撞。眼睛从目镜观察，细心调节粗、细螺旋，直至物像清晰为止。将最适宜观察的部位移至视野的中心。注意不要移动玻片标本的位置。 油镜的观察：用高倍镜找到合适的部位后，眼睛从侧面观察，旋转转换器，使高倍镜与油镜的镜头呈“八”字形，在玻片标本的镜检部位滴一

21、滴香柏油。然后眼睛从侧面观察，将油镜转到正下方，小心油镜的镜头与载物台相撞，小心上升载物台，使油镜的镜筒浸入香柏油中。眼睛从目镜观察，调节微螺旋，直至物像清楚为止。仔细观察并绘图(6)注意不能用粗准焦螺旋，调节要适度，特别是当载玻片过厚时应更换盖玻片。(7)油镜使用完毕，用棉棒或者擦镜纸蘸少许清洁剂擦去油迹。三、 结果与讨论绘制一个临时装片的细胞图简述油镜使用的注意事项实验三 压片的制作，涂片的制作（介绍）一、 实验目的1. 掌握植物根尖压片的制作方法2. 掌握涂片的制作方法3. 了解油镜的使用二、 实验材料和方法（一） 根尖压片1、器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、刀片、烧杯等。2、试剂：

22、Carnoy固定液（3份95%乙醇1份冰乙酸）；1mol/L HCL；改良苯酚品红3、实验材料：洋葱根尖4、步骤（1）准备将洋葱剥去外层老皮，置于盛清水的小烧杯口上，使根茎部与水接触，在25左右培养使其生根。每天换水1到2次，一般3天左右即可获得实验所需材料。（2）解离剪下根尖约1cm备用。放入1mol/L的盐酸解离1015min。（3）染色解离后吸出HCl，蒸馏水洗2次，每次35min。将根尖置于载玻片中间，切去根冠，从乳白色分生组织切取尽可能薄的一片，滴加20l改良苯酚品红染液，染色1015min。（4）压片 在经染色的材料上加一滴染液，盖上盖玻片，覆一层吸水纸，用左手一个手指压住盖玻片的

23、一角，右手用带橡皮头的铅笔/镊子垂直敲打，或以拇指垂直紧压盖片（压片必须用力适当，注意勿使盖片移动），使材料分散压平，便于观察。（5）镜检通常染色清晰而又分散得很好的分裂相只是少数，因此压片后要认真仔细地进行镜检。（二） 根尖涂片 1.取材：细胞分裂旺盛时期取样，一般植物在上午9-12时，下午2-5时，一般取根尖、茎尖。2.预处理（观察细胞分裂时需该步骤）：目的是防止纺锤体的形成，使细胞分裂停止在中期阶段，从而获得较多的中期分裂相，同时预处理还可以使染色体收缩变短，便于观察统计。 3.前低渗：将处理后的材料放在0.075M KCl低渗液中，在20-25条件下处理30分钟左右。4去壁：倒去KCl

24、溶液，加入2.5%混合酶液（纤维素酶与果胶酶各占2.5%），在温度25-30下处理2-5小时左右，其间将材料轻轻摇动数次，促使酶反应充分。酶液与材料的比例适当，酶液不能过少。5 后低渗：倒去酶液，用蒸馏水冲洗2-3次，然后在蒸馏水中停留5-10分钟左右后进行后低渗。6 固定：用甲醇:冰醋酸（3:1）固定液固定。7. 涂片：将去壁固定的材料放在载玻片上，加一滴固定液，然后用镊子将材料夹碎，去掉大块残渣，然后从载玻片一侧向材料轻轻吹气，使组织分散成一薄层。8. 火焰干燥：将载玻片于酒精灯上微微加热烤干。9染色：用40:1的Giemsa染液（用pH7.2的1/15M 磷酸缓冲液稀释）染色4-30分钟

25、或更长，蒸馏水清洗，空气干燥后可用树胶封片。10. 镜检：于显微镜下观察。（三） 花粉涂片1. 取材：取幼嫩花序2. 固定：将花或者花序固定于卡诺固定液中，2-24小时。3. 将花取出，换入95%酒精和85%酒精浸洗，再转入70%酒精中保存。注意必须在酒精中洗净固定液中的醋酸。4. 将固定好的材料转入50%酒精。5. 经蒸馏水清洗后，取出一个花药置于清洁载玻片上，加一小滴改良的苯酚品红染色液。6. 用刀片切去花药的一端，用小镊子夹着花药，将切面放在载玻片上涂抹，成一薄层，再滴一滴45%醋酸软化分色。7. 盖上盖玻片，使花粉母细胞均匀散开。三、 结果与讨论1. 装片、压片、切片的异同点2. 油镜

26、的使用有哪些注意事项实验四 生物材料的解剖结构观察一、实验目的1. 学习使用显微镜观察生物材料的解剖结构2. 通过显微镜图像观察，理解认识生物材料解剖图的方法二、实验方法和步骤1. 实验材料叶的切片，新鲜的植物叶片2. 实验步骤（1） 观察单子叶植物和双子叶植物的叶片（2） 用显微镜观察单子叶和双子叶的叶片解剖结构三、结果与讨论如何通过叶片的纵切装片理解叶片的结构，其它的生物材料又是如何？二、溶液配制实验五 玻璃器皿的洗涤一、实验目的及要求1、掌握常用仪器的洗涤和干燥方法2、掌握烘箱的使用二、实验原理为确保实验顺利的进行，要求把实验所用的玻璃仪器清洗干净并干燥，不同类型器皿的清洗方法不同，不同

27、用途的器皿清洗要求也不同。这些工作看起来很普通简单，但如操作不当或不按操作规定去做，则会影响实验结果，甚至会导致实验的失败。三、实验器材培养皿，烧杯，三角瓶，量筒，移液管，试管，玻璃棒，容量瓶，试管刷，平皿刷，烧杯刷，瓶刷，烘箱四、常用仪器的洗涤和干燥1、玻璃仪器的洗涤要求：内外壁被水均匀润湿而不挂水珠（1）新购的玻璃仪器的洗涤将器皿放入2%盐酸溶液中浸泡数小时，以除去游离的碱性物质，最后用流水冲净。（2）常用的旧玻璃仪器的洗涤a、试管、烧杯、量筒、三角瓶、量杯等（一般玻璃仪器）用毛刷蘸洗衣粉或洗洁精等刷洗自来水洗净蒸馏水润洗(本着“少量、多次”的原则)3次润洗：化学定量分析中的一种操作。它是

28、在所用的玻璃仪器清洗完毕、确认清洁后，用待装的工作试液浸泡仪器内壁的一个过程。b、滴定管、移液管、吸量管、容量瓶等（有精确刻度）自来水冲洗用0.2%-0.5%的合成洗涤液或铬酸洗液浸泡几分钟自来水洗净蒸馏水润洗3次c、光度分析用的比色皿，由光学玻璃或石英制成，可用热的HCl-乙醇浸泡自来水洗净去离子水洗净d、超声波洗涤：超声波的能量能够穿透玻璃器皿的内壁和细微的缝隙、小孔、死角，通过震动，松弛污垢和纤维之间的附着力，将大的污垢团分散成细小的颗粒，以利于洗除，故可以应用于任何玻璃器皿的清洗。（3）铬酸洗液的配制与使用（分浓溶液与稀溶液两种）配方如下：浓溶液：重铬酸钠或重铬酸钾（工业用） 50g自

29、来水 150 mL浓硫酸（工业用） 800 mL稀溶液：重铬酸钠或重铬酸钾（工业用） 50g自来水 850 mL浓硫酸（工业用） 100 mL配法都是将重铬酸钠或重铬酸钾先溶解于自来水中，可慢慢加温，使溶解，冷却后徐徐加入浓硫酸，边加边搅动。重铬酸钠或重铬酸钾与硫酸作用后形成铬酸（chro-mic acid），酪酸的氧化能力极强，因而此液具有极强的去污作用。配好后的洗涤液应是棕红色或桔红色。贮存于有盖容器内，以防氧化变质。洗涤液可反复使用，但当其变为墨绿色时即已失效，不能再用。2、玻璃仪器的干燥(1)空气晾干，又叫风干。(2)烤干：将仪器外壁擦干后用小火烘烤（不停转动仪器，使其受热均匀）。适用

30、于试管、烧杯、蒸发皿等仪器的干燥。(3)烘干：将仪器放在金属托盘上置于烘箱中，控制温度在105左右烘干。但不能用于精密度高的容量仪器的烘干。(4)吹干：用电吹风吹干。五、烘箱的使用1、把要灭菌的物品放在烘箱内，堆积时要留有空隙，勿使接触器壁，关闭箱门。2、打开电源，控温仪上有数字显示。3、按SET键进入温度设定，将温度设为80-120。4、再按SET键进入时间设定，将时间设定为120min。5、烘干完毕，待烘箱内温度降至60时，才能打开箱门取出器材。实验六、溶液的配制一、实验目的及要求1、掌握电子天平的使用2、了解分析天平的使用3、掌握常用玻璃仪器的使用方法4、了解不同等级纯水的不同用途5、学

31、习配制溶液母液浓度的计算方法二、实验器材电子天平，分析天平，称量纸（杯），烧杯，三角瓶，量筒，容量瓶，移液管，吸耳球，玻璃棒，药勺三、仪器的使用1、电子天平的使用（1）水平调节：调整地脚螺旋高度，使水平仪内空气泡位于圆环中央。（2）接通电源，预热30min。（3）按开关键（ON/OFF键），使显示器亮，并显示称量模式0.0000g（4）称量：按 TAR键，显示为零后。将称量物放入盘中央，待读数稳定后，该数字即为称物体的质量。（5）去皮称量：按 TAR键清零，将空容器放在盘中央，按 TAR键显示零，即去皮。将称量物放入空容器中，待读数稳定后，此时天平所示读数即为所称物体的质量。2、分析天平的使用

32、分析天平是定量分析工作中不可缺少的重要仪器，一般是指能精确称量到0.0001g（0.1mg）的天平。（1）事先检查电源电压是否匹配（必要时配置稳压器），按仪器要求通电预热至所需时间。（2）开启、预热（1 小时），调水平；（3）校准 CAL；（4）称量 将量器（称量纸，称量杯等）归零去皮（Tare 或 T.O）后，慢慢加样至量器，当加试样与指定量相差不到10 mg时，极小心地将盛有试样的药勺伸向量器的正上方2-3 cm处，勺的另一端顶在掌心上，用拇指、中指及掌心拿稳药勺，并以食指轻弹勺柄，将试样慢慢的抖入量器中。多加的药品取出，但不能返回试剂瓶中。（5）称量结束应及时除去称量纸（杯），关上侧门，

33、切断电源，并做好使用情况登记。3、常用玻璃仪器的使用（1）烧杯粗略配制一定体积的溶液用容量：10-5000 mL使用注意：加热时应置于石棉网上，一般不可干烧（2）三角瓶加热处理试样和容量分析滴定容量（mL）：50、100、250、500、1000使用注意：加热时应置于石棉网上，一般不可干烧（3）量筒或量杯量取一定体积的液体用，精确度不高容量（mL）：5、10、25、50、100、250、500、1000、2000使用注意：沿壁加入或倒出使用；不能加热和量取热的液体；不能作反应容器；不能在量筒里稀释溶液；量液和读数时，量筒必须放平，视线同量筒内液体的凹液面的最低处保持水平。（4）容量瓶配制标准体

34、积的标准溶液或被测溶液用容量（mL）：10、25、50、100、150、200、250、500、1000等使用注意：只能配制容量瓶上规定容积的溶液；容量瓶的容积是在20时标定的，转移到瓶中的溶液的温度应在20左右；非标准磨口塞要保持原配；漏水的不能用；不能直接用火加热，可水浴加热（5）移液管或吸量管用于准确移取一定体积的溶液容量（mL）：1、2、5、10、15、20、25、50、100等，微量0.1、0.2、0.5等使用注意：吸溶液时，左手握住移液管，右手捏吸耳球多次；把溶液吸到管颈标线以下，不时放松食指，试管内液面慢慢下降；把液面调节到标线；放出溶液时，移液管下端紧贴锥形瓶内壁，放开食指，溶

35、液沿瓶壁自由流出；残留在移液管尖的最后一滴溶液，一般不要吹掉。四、不同等级纯水的不同用途1、超纯水（Ultrapure Water）：既将水中的导电介质几乎完全去除，又将水中不离解的胶体物质、气体及有机物均去除至很低程度的水。通常用于多种精密分析实验的需求。2、双蒸水（Distillation-Distillation H2O，ddH2O）：经过2次蒸馏而得的水。适用于多种需求，包括试剂制备、溶液稀释、细胞培养所需营养液的配制等。3、去离子水（Deionized Water）：应用离子交换树脂去除水中的阴离子和阳离子。可用于清洗、配制分析标准样、制备试剂和稀释样品。4、纯水（Reverse o

36、smosis Water，RO水）：通过反渗透膜过滤后的水，能够去除95%以上的离子态杂质。通常用于实验室器皿的最后清洗；高压灭菌锅用水。5、蒸馏水（Distilled Water）：实验室最常用的一种纯水，虽设备便宜，但极其耗能和费水且速度慢，应用会逐渐减少。蒸馏水能去除自来水内大部分的污染物，但挥发性的杂质无法去除。实验七、溶液的配制一、实验目的及要求1、掌握溶液母液的配制流程2、掌握不同溶液的贮存要点3、学习母液浓度和使用浓度的换算4、掌握常用缓冲液的配制二、实验器材烧杯，量筒，药勺，称量纸，移液管，玻璃棒，容量瓶，吸耳球，滴管，试剂瓶，pH试纸，pH计三、实验试剂NaH2PO4

37、3;2H2O，Na2HPO4·12H2O四、溶液的配制方法及步骤1、实验的准备：准备所需的药品和玻璃仪器；洗涤。2、计算：算出所需固体溶质的质量或液体溶质的体积。（1）百分比浓度计算：a、G/V比例如配1% NaCl，称1g NaCl溶于100 mL水。b、V/V比：例如配75%乙醇100 mL，75%=X/100, X=75 mL。取75 mL无水乙醇，加25 mL 蒸馏水。乙醇：乙醚：丙酮=2：1：2配500 mL，各取200 mL，100 mL，200 mL混合。c、G/G比：用的较少，如计算灰分中某种元素如Fe的含量。（2）摩尔浓度的计算：(药品的分子量一般在标签中注明)M=

38、摩尔数（mol）/体积（L），摩尔数（mol）=质量（g）/摩尔质量1 mol/L = 1 m mol/L×1000 = 1 µmol/L×1000000a、0.1 mol/L或0.1 mol/L NaCl配100 mL：称取NaCl 0.1 mol/L×0.1 L×40 g/mol=0.4gb、0.1 m mol/L NaCl配100 mLmM=毫摩尔数/体积（L） 毫摩尔数=质量（mg）/摩尔质量称取NaCl 0.1 m mol/L×0.1L×40 g/mol=0.4mgc、0.1 mol/L NaCl配100 mLmo

39、l/L =微摩尔数/体积（L） 微摩尔数=质量（g）/摩尔质量称取NaCl 0.1mol/L×0.1 L×40 g/mol=0.4 ug（3）混合溶液配制的计算：如配3 mol/L EDTA，2.25 m mol/L NBT以及60 mol/L核黄素溶液100ml，用50m mol/L磷酸缓冲液配制。注意：分别计算三种成分的质量；用磷酸缓冲液分别配制三种成分的溶液，再混合，使混合后的总体积为100 mL。3、称量：根据需要选择不同量程的天平；根据要求选择不同精度的测量器，如量筒或移液管。4、溶解：（1）将固体或液体溶质倒入烧杯里。（2）根据药品配置要求选择溶剂：如：蒸馏水，

40、双蒸水，去离子水等。（3）加入适量的溶剂（约为所配溶液体积的1/6），用玻璃棒搅拌使之完全溶解，冷却至室温。（药品标签中一般标识有药品的溶解性能和分子式，可根据分子式和所学的常识判断药品的结构和性质特点）如配制酸碱两性物质（氨基酸、蛋白质、核苷酸等）时，如果溶解性能不好，可以用稀酸或稀碱促进溶解，但pH应在被要求的范围内。（4）加热可以促进溶解，但注意应该在配制的范围内。有的药品还需水浴加热较好。如配0.1%的淀粉，水浴加热（温度在80-90），过热会糊化。5、定容（1）固体：于小烧杯中溶解后，移到容量瓶中，用玻璃棒引流或用小漏斗，将小烧杯用剩余溶剂多洗几次。用溶剂加入到将容量瓶2/3时，将容

41、量瓶水平方向摇动几周（勿倒置），使溶液大体混匀。再慢慢加溶剂到接近刻度，然后用滴管加入到刻度。眼睛平视刻度，加溶剂至液体凹面与刻度相切。盖紧瓶塞倒转，使气泡升到顶，将瓶震荡数次，再倒置，重复操作，混合均匀即可。（注意：不再定容了，防止溶液漏掉）（2）液体稀释：用移液管移取一定体积的溶液于容量瓶中，再按上法进行。如果稀释时产生热量，可先于小烧杯中加少量溶剂溶解，冷却后移到容量瓶中，再按上法进行。6、容量瓶定容后，装入试剂瓶，贴上标签。标签应注明以下内容：药品浓度、名称、配制人、配制日期等。7、清理实验场所。五、缓冲溶液的配制1、概念由一定物质组成的溶液，在加入一定量的酸或碱时，其氢离子浓度改变甚

42、微或基本不变，此种溶液称为缓冲溶液；这种作用称为缓冲作用；其溶液内所含物质称为缓冲剂，调节缓冲剂的比例可以配置成各种pH的缓冲液。缓冲剂的组成，多为弱酸及这种弱酸与强碱所组成的盐，或弱碱及这种弱碱与强酸所组成的盐。调节二者的比例可以配制成各种 pH 的缓冲液。例如：某一缓冲液由弱酸（HA）及其盐(BA)所组成，它的解离方程式如下：HA H ABA B A若向缓冲液中加入碱（NaOH），则：HA NaOH NaA（弱酸盐）+ H2O若向缓冲液中加入酸（HCl），则：BA HCl BCl HA（弱酸）由此可见，向缓冲液中加酸或碱，主要的变化就是溶液内弱酸（HA）的增加或减少。由于弱酸（HA）的解离

43、度很小，所以它的增加或减少对溶液内氢离子浓度改变不大，因而起到缓冲作用。实例：磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液原理：加入盐酸溶液，其缓冲作用： NaH2PO4 + Na2HPO4 + HCl 2 NaH2PO4 + NaCl 加入氢氧化钠溶液，其缓冲作用： NaH2PO4 + Na2HPO4 + NaOH 2 Na2HPO4 + H2O 缓冲溶液：磷酸氢二钠-磷酸二氢钠溶液缓冲剂：磷酸氢二钠和磷酸二氢钠2、配制0.2 mol/L pH=6.8的磷酸缓冲液（用磷酸氢二钠-磷酸二氢钠做缓冲液）选用药品：Na2HPO4·12H2O（碱）和NaH2PO4·2H2O（酸）配缓冲液100

44、mL。（1）计算100 mL 0.2 mol/L NaH2PO4·2H2O： g100 mL 0.2 mol/L Na2HPO4·12H2O： g（2）分别配制0.2 mol/L Na2HPO4和0.2 mol/L NaH2PO4各100 mL，定容于容量瓶之后。注意：在容量瓶上帖标签。（3）按照下表中的比例分别量取0.2 M Na2HPO4 和 0.2 M NaH2PO4溶液，混合后装入试剂瓶，贴上标签，标签应注明以下内容：试剂名称，试剂浓度，pH值，配制人，配制日期，贮存条件等。（4）磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液（0.2 mol/L）的检验：取一滴所配制的缓冲溶液于精密

45、pH试纸上，检测其pH值。（5）如配50 mM pH=6.8的缓冲液100 mL，以配制好的母液稀释即可。计算： 取0.2 M pH=7.2的缓冲液 mL，用蒸馏水定容至100 mL即可。3、实验结果：检验所配制的缓冲溶液与预期pH值是否相符合。4、注意事项（1）溶液要用带塞的试剂瓶盛装。（2）每瓶试剂必须标明名称、规格、浓度和配制日期的标签。（3）配制硫酸、磷酸、硝酸、盐酸等溶液时，应把酸倒入水中。（4）不能用手接触腐蚀性及有剧毒的溶液，剧毒废液应作解毒处理，不可直接倒入下水道。（5）应熟悉一些常用溶液的配制方法。5、实验报告（1）详细记录溶液配制步骤。（2）如果所配制的缓冲溶液与预期pH值

46、不相符合，请思考其原因。附表 磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液（0.2 mol/L）pH0.2 mol/L Na2HPO4 (mL)0.2 mol/L NaH2PO4 (mL)pH0.2 mol/L Na2HPO4 (mL)0.2 mol/L NaH2PO4 (mL)5.8 8.092.07.0 61.0 39.05.910.090.07.167.033.06.012.387.77.272.028.06.115.085.07.377.023.06.218.581.57.481.019.06.322.577.57.584.016.06.426.573.57.687.013.06.531.568.57

47、.789.510.56.637.562.57.891.58.56.743.556.57.993.07.06.849.051.08.094.75.36.955.045.0实验八 溶液pH值的调节一、实验目的及要求1、掌握稀酸稀碱的配制方法2、学习pH试纸和pH计的使用方法3、掌握测定溶液pH值的原则二、实验器材烧杯，三角瓶，量筒，称量纸，移液管，玻璃棒，容量瓶，吸耳球，滴管，pH试纸，pH计三、稀酸稀碱的配制方法1、1 M KOH液的配制：称取57.1 g KOH，加蒸馏水至1000 mL。2、0.1 M KOH液的配制：取10 mL、1 M KOH液加蒸馏水90 mL。3、1 M NaOH液的

48、配制：称取40 g NaOH，加蒸馏水至1000 mL。4、0.1 M NaOH液的配制：取10 mL、1 M NaOH液加蒸馏水90 mL。5、1 M HCl液的配制：取浓盐酸（比重1.19）82.5 mL加蒸馏水至1000 mL。配制时先将浓盐酸缓缓加入约800 mL的蒸馏水中，然后用蒸馏水补足至1000 mL。6、0.1 M HCl液的配制：取10 mL、1 M HCl液加蒸馏水90 mL。7、酒精是组培工作中常用的消毒液，广泛用于外植体材料、接种用具及接种人员双手的消毒，也用于培养室的酒精喷雾消毒等。酒精的消毒效果以70%为最好。所以常将市售95%的酒精稀释至70%-75%（检测学生如

49、何换算）。四、pH试纸的使用用干燥、洁净的玻璃棒蘸有待测溶液（不能在原瓶中），滴在干燥的pH试纸中部，试纸变色，立即与标准比色卡比较，确定溶液的pH值。在操作过程中，试纸不能用水润湿，也不能将pH试纸丢放在待测溶液中。五、pH计的使用方法1、开机前准备：（1）取下复合电极套；（2）用蒸馏水清洗电极，用滤纸吸干。2、开机：按下电源开关，预热30 min。（短时间测量时，一般预热不短于5 min；长时间测量时，最好预热在20 min以上，以便使其有较好的稳定性。）3、标定：（1）拔下电路插头，接上复合电极；（2）把选择开关旋钮调到pH档；（3）调节温度补偿旋钮白线对准溶液温度值；（4）斜率调节旋钮

50、顺时针旋到底；（5）把清洗过的电极插入pH缓冲液中；（6）调节定位调节旋钮，使仪器读数与该缓冲溶液当时温度下的pH值相一致。4、测定溶液pH值：（1）先用蒸馏水清洗电极，再用被测溶液清洗一次。（2）用玻璃棒搅拌溶液，使溶液均匀，把电极浸入被测溶液中，读出其pH值。5、结束：（1）用蒸馏水清洗电极，用滤纸吸干；（2）套上复合电极套，套内应放少量补充液；（3）拔下复合电极，接上短接线，以防止灰尘进入，影响测量准确性；（4）关机。六、测定溶液pH值的原则1、读数时保留整数；2、不能将pH试纸湿润（稀释了待测溶液，影响测量结果）；3、不能将pH是指直接深入待测液中（污染待测液）。三、分光光度计的使用实

51、验九 分光光度法的介绍及分光光度计的使用方法一、实验目的学习分光光度法的原理、应用范围，学会使用可见分光光度计。二、分光光度法的介绍分光光度法是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸光度或发光强度，对该物质进行定性和定量分析的方法。在分光光度计中，将不同波长的光连续地照射到一定浓度的样品溶液时，便可得到与众不同波长相对应的吸收强度。如以波长（）为横坐标，吸收强度（A）为纵坐标，就可绘出该物质的吸收光谱曲线。利用该曲线进行物质定性、定量的分析方法，称为分光光度法，也称为吸收光谱法。用紫外光源测定无色物质的方法，称为紫外分光光度法；用可见光光源测定有色物质的方法，称为可见光光度法。它们

52、与比色法一样，都以Lambert-Beer定律为基础。 上述的紫外光区与可见光区是常用的。但分光光度法的应用光区包括紫外光区，可见光区，红外光区。1、波长范围：(1)200400nm的紫外光区，(2)400760nm的可见光区， (3)2.525m(按波数计为4000cm<-1>400cm<-1>)的红外光区。2、仪器：紫外分光光度计，可见分光光度计（或比色计）、红外分光光度计或原子吸收分光光度计。3、基本原理：当一束强度为I0的单色光垂直照射某物质的溶液后,由于一部分光被体系吸收,因此透射光的强度降I,则溶液的透光率T为：根据朗伯(Lambert)-比尔(Beer)定

53、律：A=abc式中A为吸光度，b为溶液层厚度（cm），c为溶液的浓度（g/dm-3)， a为吸光系数。其中吸光系数与溶液的本性、温度以及波长等因素有关。溶液中其他组分（如溶剂等）对光的吸收可用空白液扣除。由上式可知，当固定溶液层厚度和吸光系数时，吸光度A与溶液的浓度成线性关系。在定量分析时，首先需要测定溶液对不同波长光的吸收情况（吸收光谱），从中确定最大吸收波长 ，然后以此波 的光为光源，测定一系列已知浓度c溶液的吸光度A，作出A-c工作曲线。在分析未知溶液时，根据测量的吸光度A，查工作曲线即可确定出相应的浓度。这便是分光光度法测量浓度的基本原理。三、可见分光光度计的使用 （一）、722型分光

54、光度计仪器介绍目前科研最常用的分光光度仪器（可见光区）是721分光光度计。721型分光光度计采用自准式光路，单光束方法。光谱范围在360800nm。以钨丝灯泡为光源，经透镜聚光后射入单色器内，再经棱镜色散后，反射到准直镜，穿狭缝得到波长范围更窄的光波作为入射光，进入比色池透出的光波被光电管接受，产生光电流。经微电流放大器送至对数放大器，由对数放大器变换成常用对数值输出，再送至浓度调节器，数字面板表面通过切换开关分别选择微电流放大器的输出、对数放大器的常用对数输出及浓度调节器的输出信号进行透射比（T）、光密度（A）和浓度（C）的显示。104379862511、 液晶显示屏；2、0%T调节按钮，数字下调按钮； 3、100%T调节按钮，数字上调按钮；4、 模式转换按钮； 5、功能按钮； 6、模式显示；7、波长调节旋钮； 8、波长指示窗；9、样品槽； 10、样品移动拉杆（二）、器材1、擦镜纸或棉花、滤纸片。2、1厘米的比色皿，铺有滤纸的表面皿或培养皿。3、220V交流电源，外接地线牢固。4、722型分光光度计，配有仪器布罩。（三）、试剂1.蒸馏水或空白试剂（B）。2.不同浓度的同种颜色透明溶液两份，用作标准液（S）及待测液（U）。（四）、仪器的基本操作1、 预热