对氨基苯甲酸酯和酰苯胺类局麻药物的分析

1、 第八章第八章 对氨基苯甲酸酯和对氨基苯甲酸酯和酰苯胺类局麻药物的分析酰苯胺类局麻药物的分析主要内容：主要内容： 结构与性质结构与性质 鉴别试验鉴别试验 杂质检查杂质检查 含量测定含量测定 体内药物分析体内药物分析第一节第一节 对氨基苯甲酸酯和酰对氨基苯甲酸酯和酰苯胺类药物的结构与性质苯胺类药物的结构与性质对氨基苯甲酸酯类：对氨基苯甲酸酯类：具有具有游离的芳伯氨游离的芳伯氨( (或仲胺或仲胺) )基，基，而对位而对位有取代有取代酰苯胺类：酰苯胺类：芳伯氨基被酰化芳伯氨基被酰化，对位，对位或临位或临位有取代有取代一、对氨基苯甲酸酯类一、对氨基苯甲酸酯类（一）基本结构与典型药物（一）基本结构与典型

2、药物COOR2NR1H苯佐卡因苯佐卡因盐酸丁卡因盐酸丁卡因盐酸普鲁卡因胺盐酸普鲁卡因胺盐酸普鲁卡因盐酸普鲁卡因（二）性质（二）性质 1.1.具有芳伯氨基，具有芳伯氨基，发生重氮化发生重氮化-偶合反应。偶合反应。 （盐酸丁卡因除外）（盐酸丁卡因除外）2.2.具有酯结构具有酯结构易水解易水解 3.3.具有脂烃胺侧链具有脂烃胺侧链弱碱性弱碱性( (叔胺氮原子叔胺氮原子) ) 与酸成盐，与生物碱试剂反应与酸成盐，与生物碱试剂反应4.4.溶解性溶解性游离碱难溶于水，易溶于有机溶游离碱难溶于水，易溶于有机溶 剂；盐酸盐易溶于水，难溶于有机溶剂。剂；盐酸盐易溶于水，难溶于有机溶剂。5.5.具有苯环结构具有苯

3、环结构紫外吸收紫外吸收 二、酰胺类二、酰胺类（一）基本结构与典型药物（一）基本结构与典型药物NH C R2OR1R3R4盐酸利多卡因盐酸利多卡因盐酸布比卡因盐酸布比卡因盐酸罗哌卡因（盐酸罗哌卡因（USP）（二）性质（二）性质 1.水解后可发生重氮化水解后可发生重氮化-偶合反应偶合反应 具有酰胺结构的共性具有酰胺结构的共性 水解成芳伯氨基，发生重氮化偶合反应水解成芳伯氨基，发生重氮化偶合反应 利多卡因、布比卡因、罗哌卡因等因邻位利多卡因、布比卡因、罗哌卡因等因邻位有有2个甲基，受空间位阻的影响，较难水解。个甲基，受空间位阻的影响，较难水解。 2.弱碱性具叔胺氮原子弱碱性具叔胺氮原子能与酸成盐能与

4、酸成盐 能与生物碱沉淀试剂能与生物碱沉淀试剂 （利多卡因、布比卡因、罗哌卡因）（利多卡因、布比卡因、罗哌卡因）3.重金属离子反应酰胺的氮与铜重金属离子反应酰胺的氮与铜/钴离钴离 子生成配位化合物子生成配位化合物 （利多卡因、布比卡因、罗哌卡因）（利多卡因、布比卡因、罗哌卡因）4.紫外吸收苯环结构紫外吸收苯环结构 5.溶解性溶解性芳胺类芳胺类氨基直接与苯环相连的药物氨基直接与苯环相连的药物 芳烃胺类芳烃胺类氨基在烃基侧链上的药物氨基在烃基侧链上的药物 第二节第二节 鉴别试验鉴别试验（一）重氮化（一）重氮化偶合反应偶合反应 ( (芳香第一胺类的鉴别反应芳香第一胺类的鉴别反应) )具有芳伯氨基或潜在

5、芳伯氨基的药物具有芳伯氨基或潜在芳伯氨基的药物ArNH2HClNaNO2重氮盐橙黄猩红色萘酚OH- 直接反应直接反应：苯佐卡因、盐酸普鲁卡因、：苯佐卡因、盐酸普鲁卡因、盐酸普鲁卡因胺、对氨基水杨酸钠盐酸普鲁卡因胺、对氨基水杨酸钠苯佐卡因和盐酸普鲁卡因苯佐卡因和盐酸普鲁卡因 Ch.P（2010） 本品显芳香第一胺类的鉴别反应（附录本品显芳香第一胺类的鉴别反应（附录） 取供试品约取供试品约50mg，加稀盐酸，加稀盐酸1ml，必要时缓，必要时缓缓煮沸使溶解，放冷，加缓煮沸使溶解，放冷，加0.1mol/L亚硝酸钠溶液亚硝酸钠溶液数滴，滴加碱性数滴，滴加碱性-萘酚试液数滴，视供试品不同，萘酚试液数滴，视

6、供试品不同，生成由橙黄到猩红色沉淀。生成由橙黄到猩红色沉淀。 间接间接：对乙酰氨基酚、醋氨苯砜、贝诺酯对乙酰氨基酚、醋氨苯砜、贝诺酯水解后生成芳伯氨基水解后生成芳伯氨基对乙酰氨基酚对乙酰氨基酚 Ch.P（2010） 取本品约取本品约0.1g，加稀盐酸，加稀盐酸5ml，置水浴中加，置水浴中加热热40分钟，放冷；取分钟，放冷；取0.5ml，滴加亚硝酸钠试液，滴加亚硝酸钠试液5滴，摇匀，用水滴，摇匀，用水3ml稀释后，加碱性稀释后，加碱性-萘酚试液萘酚试液2ml，振摇，即显红色。，振摇，即显红色。 盐酸丁卡因盐酸丁卡因（芳香第二胺结构）（芳香第二胺结构） 与与NaNO2作用生成作用生成乳白色乳白色N

7、-N-亚硝基化合物沉淀亚硝基化合物沉淀 乳白色COOCH2CH2N(CH3)2NH(CH2)3CH3NaNO2H+COOCH2CH2N(CH3)2N(CH2)3CH3NO（二）与金属离子反应（二）与金属离子反应 1. 与铜和钴离子反应与铜和钴离子反应 （盐酸利多卡因（盐酸利多卡因/ /布比卡因布比卡因/ /罗哌卡因）罗哌卡因） 试液2羟肟酸铁盐反应羟肟酸铁盐反应 （盐酸普鲁卡因胺）（盐酸普鲁卡因胺）（三）水解产物反应（三）水解产物反应 酯键水解生成的水解产物酯键水解生成的水解产物（盐酸普鲁卡因、苯佐卡因）（盐酸普鲁卡因、苯佐卡因）1. 盐酸普鲁卡因盐酸普鲁卡因 Ch.P（2010） 取本品约取

8、本品约0.1g，加水，加水2ml溶解后，加溶解后，加10氢氧氢氧化钠溶液化钠溶液1ml，即生成，即生成白色沉淀白色沉淀；加热，变为；加热，变为油油状物状物；继续加热，发生的；继续加热，发生的蒸气蒸气，能使湿润的红色，能使湿润的红色石蕊试纸变为石蕊试纸变为蓝色蓝色；热至油状物消失后，放冷，；热至油状物消失后，放冷，加盐酸酸化，即析出加盐酸酸化，即析出白色沉淀白色沉淀。 NH2COOCH2CH2N(C2H5)2.H ClNH2COOCH2CH2N(C2H5)2NaOH N a O H N H 2 C O O N a + H O C H 2 C H 2 N ( C 2 H 5 ) 2 可使湿润的红色

9、石蕊试纸变蓝 H C l N H 2 C O O H H C l 白色 N H 2 C O O H . H C l 2. 苯佐卡因苯佐卡因 Ch.P（2010） 取本品约取本品约0.1g，加氢氧化钠试液，加氢氧化钠试液5ml，煮沸，煮沸，即有即有乙醇乙醇生成；加碘试液，加热，即生成生成；加碘试液，加热，即生成黄色黄色沉淀沉淀，并发生，并发生碘仿碘仿的臭气。的臭气。 NH2COOC2H5+ NaOHNH2COONa+ C2H5OH C 2 H 5 O H + I 2 + N a O H C H 3 I + H C O O N a + H 2 O 黄色 （四）制备衍生物测定熔点（四）制备衍生物测定

10、熔点1三硝基苯酚衍生物三硝基苯酚衍生物 盐酸利多卡因盐酸利多卡因 Ch.P（2010） 取本品取本品2g，加水，加水20ml溶解后，取溶液溶解后，取溶液10ml，加三硝基苯酚试液加三硝基苯酚试液10ml，即生成沉淀；滤过，即生成沉淀；滤过，沉淀用水洗涤后，沉淀用水洗涤后，105干燥，熔点为干燥，熔点为228232，熔融时同时分解。，熔融时同时分解。 盐酸布比卡因盐酸布比卡因 Ch.P（2010）2. 硫氰酸盐衍生物硫氰酸盐衍生物 盐酸丁卡因盐酸丁卡因 Ch.P（2010） 取本品约取本品约0.1g，加，加5%醋酸钠溶液醋酸钠溶液10ml溶解溶解后，加后，加25%硫氰酸铵溶液硫氰酸铵溶液1ml，

11、即析出白色结晶；，即析出白色结晶；滤过，结晶用水洗涤，在滤过，结晶用水洗涤，在80干燥，熔点约为干燥，熔点约为131。（五）光谱法（五）光谱法 含有苯环含有苯环 盐酸布比卡因盐酸布比卡因 Ch.P（2010） 取本品，精密称定，按干燥品计算，加取本品，精密称定，按干燥品计算，加0.01mol/L盐酸溶液制成每盐酸溶液制成每1ml中含中含0.40mg的溶的溶液，照紫外液，照紫外-可见分光光度法测定，在可见分光光度法测定，在263nm与与271nm的波长处有最大吸收；其吸光度分别为的波长处有最大吸收；其吸光度分别为0.530.58与与0.430.48。1.UV2.IR 特征性强，专属性好特征性强，

12、专属性好盐酸普鲁卡因：盐酸普鲁卡因：本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集谱集397图）一致图）一致 。第三节第三节 特殊杂质检查特殊杂质检查一、盐酸普鲁卡因中对氨基苯甲酸的检查一、盐酸普鲁卡因中对氨基苯甲酸的检查 来源：水解产物来源：水解产物 方法：方法：HPLC 杂质对照品法杂质对照品法对氨基苯甲酸对氨基苯甲酸 取本品，精密称定，加水溶解并定量稀释制取本品，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每成每lml中含中含0.2mg的溶液，作为的溶液，作为供试品溶液供试品溶液；另取对氨基；另取对氨基苯甲酸对照品，精密称定，加水溶解并定量制成每苯甲酸对照品，精密称

13、定，加水溶解并定量制成每lml中含中含 1g的溶液，作为的溶液，作为对照品溶液对照品溶液；取供试品溶液；取供试品溶液lml与对照品与对照品溶溶 液液9ml混合均匀，作为混合均匀，作为系统适用性试验系统适用性试验溶液。照高效液溶液。照高效液相色谱法（附录相色谱法（附录VD)试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以充剂；以 含含0. 1%庚烷磺酸钠庚烷磺酸钠的的0. 05mol/L磷酸二氢钾溶液磷酸二氢钾溶液（用磷酸（用磷酸 调节调节pH值至值至3.0)-甲醇（甲醇（68 :32)为流动相；检测波为流动相；检测波长为长为 279nm。取系统适用性试验溶液。取系统适用

14、性试验溶液101，注入液相色谱，注入液相色谱仪，理论板数按对氨基苯甲酸峰计算不低于仪，理论板数按对氨基苯甲酸峰计算不低于2000，盐酸普，盐酸普鲁卡因峰和对氨基苯甲酸峰的分离度应大于鲁卡因峰和对氨基苯甲酸峰的分离度应大于2.0。取对照品。取对照品溶液溶液l0 1, 注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰髙约为满量程峰髙约为满量程 的的20%。精密量取供试品溶液与对照品溶。精密量取供试品溶液与对照品溶液各液各10 1 ，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品供试品溶液色谱图中如有与对氨基苯甲酸峰保留时间一致的色谱溶液色

15、谱图中如有与对氨基苯甲酸峰保留时间一致的色谱峰，按外标法以峰面积计峰，按外标法以峰面积计 算，不得过算，不得过0.5%。 二二 盐酸氯普鲁卡因注射液中有关物质和盐酸氯普鲁卡因注射液中有关物质和 光解产物的检查（自学）光解产物的检查（自学）HPLC-MS 精密量取本品适量，用流动相定量稀释制成每精密量取本品适量，用流动相定量稀释制成每lml中约含盐中约含盐酸利多卡因酸利多卡因2mg的溶液，的溶液，作为供试品溶液作为供试品溶液； 精密量取精密量取lml，置，置100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，为对照溶液量瓶中，用流动相稀释至刻度，为对照溶液；另取；另取2 ,6-二二甲基苯胺对照品，精密称定，加

16、流动相甲基苯胺对照品，精密称定，加流动相 溶解并稀释制成每溶解并稀释制成每lml中中约含约含0.8 g的溶液，作为的溶液，作为对照品溶对照品溶 液液。照含量测定项下的色谱。照含量测定项下的色谱条件，取对照溶液条件，取对照溶液20 l ，注入液相，注入液相 色谱仪，调节检测灵敏度，色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程使主成分色谱峰的峰高约为满量程 的的20%;再精密量取上述三种再精密量取上述三种溶液各溶液各20 l ，分别注入液相色，分别注入液相色 谱仪，记录色谱图至主成分峰保谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的留时间的3.5倍，倍，供试品溶液供试品溶液 的色谱图中如有与的色谱

17、图中如有与2,6-二甲基苯胺二甲基苯胺保留时间一致的色谱峰，其峰面积不得大于对照品溶液主峰面保留时间一致的色谱峰，其峰面积不得大于对照品溶液主峰面积（积（0.04%),其他单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的其他单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0.5倍（倍（0.5%),其他各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面其他各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积（积（1.0%)。 三三 盐酸利多卡因注射液中盐酸利多卡因注射液中2,6-二甲基苯二甲基苯胺胺 及其他杂质的检查及其他杂质的检查四四 盐酸罗哌卡因的对映体纯度检查（自学）盐酸罗哌卡因的对映体纯度检查（自学）毛细管电泳毛细管电泳第四节

18、第四节 含量测定含量测定一、亚硝酸钠滴定法一、亚硝酸钠滴定法1.原理原理 芳伯氨基，在酸性条件下与芳伯氨基，在酸性条件下与NaNO2定量定量发生反应，生成重氮盐，根据消耗发生反应，生成重氮盐，根据消耗NaNO2量，量，计算含量。计算含量。 含潜在芳伯氨基药物，如芳酰氨基、硝基含潜在芳伯氨基药物，如芳酰氨基、硝基等，可先水解或还原，得芳伯氨基后，再进行等，可先水解或还原，得芳伯氨基后，再进行测定。测定。 NHCOR + H2ONH2 + RCOOHH+NO2 + 6HNH2 + 2H2OOH2NaClClNArHCl2NaNONHAr22222.测定的主要条件测定的主要条件反应速度受多种因素影响

19、反应速度受多种因素影响 滴定液滴定液NaNO2及生成物重氮盐均不稳定及生成物重氮盐均不稳定 重氮化反应属于分子反应重氮化反应属于分子反应 （1）酸的种类：加入适量）酸的种类：加入适量KBr加速反应加速反应在盐酸存在下，重氮化反应的历程为在盐酸存在下，重氮化反应的历程为：NaNO2+HClHNO2+NaClHNO2+HClNOCl+H2O重氮化反应速度是重氮化反应速度是HBrHClH2SO4、HNO3加入加入KBr（1）K1（2）K2 K1 300 K2 加入加入KBr，可增大被测溶液中，可增大被测溶液中NO+的浓度，所的浓度，所以能加快重氮化反应速度。以能加快重氮化反应速度。（2）药物结构与反

20、应速度的关系）药物结构与反应速度的关系 游离芳伯胺游离芳伯胺的的浓度越高浓度越高反应速度越反应速度越快快碱性强游离的少碱性强游离的少碱性弱游离的多碱性弱游离的多 a.当在苯环上特别是氨基的邻位或对位上当在苯环上特别是氨基的邻位或对位上有吸电子取代基时，如有吸电子取代基时，如-SO3、-COOH、-NO2等可使氨基的碱性降低，重氮化反应速度加快。等可使氨基的碱性降低，重氮化反应速度加快。b.当在苯环上有供电子取代基时，反应速度当在苯环上有供电子取代基时，反应速度降低。降低。 （3）酸的用量：加过量盐酸加速反应）酸的用量：加过量盐酸加速反应加入盐酸作用：加入盐酸作用： 重氮化反应速度加快；重氮化反

21、应速度加快； 重氮盐在酸性溶液中稳定；重氮盐在酸性溶液中稳定； 防止生成偶氮氨基化合物而影响测定防止生成偶氮氨基化合物而影响测定 结果。结果。 A r N + N C l + H 2 N A r A r N N N H A r + H C l 芳胺芳胺:盐酸盐酸 1:2.56 酸度不足酸度不足 未反应的芳胺与生成的重氮盐产生未反应的芳胺与生成的重氮盐产生 偶氮氨基化合物偶氮氨基化合物酸度过大酸度过大 游离芳伯氨的量减小游离芳伯氨的量减小( (成盐成盐), ), 影响重影响重 重氮化反应速度重氮化反应速度, , 使使反应速度减慢反应速度减慢（4）反应温度）反应温度温度升高温度升高 升高升高10，

22、反应速度，反应速度加快加快2.5倍。倍。 升高升高10，重氮盐，重氮盐分解速度分解速度加快加快2倍。倍。 滴定液亚硝酸钠滴定液亚硝酸钠逸失速度逸失速度加快加快 重氮化反应宜在低温下进行，经试验，重氮化反应宜在低温下进行，经试验，室温：室温：1030 （5）滴定速度：先快后慢）滴定速度：先快后慢 在在30 C以下，滴定管尖端插入液面下以下，滴定管尖端插入液面下2/3处，处， 在不断搅拌下快速加入大部分标准溶液。在不断搅拌下快速加入大部分标准溶液。(约约80%90%)；目的目的：防止亚硝酸的挥发和分解：防止亚硝酸的挥发和分解提出液面后缓缓滴定至终点提出液面后缓缓滴定至终点 目的目的：降低近终点滴定

23、速度，避免终点提前。：降低近终点滴定速度，避免终点提前。 3.指示终点的方法指示终点的方法永停法永停法（中国药典）中国药典） 电位法电位法 外指示剂法外指示剂法 内指示剂法内指示剂法 （1）永停法（）永停法（DEAD STOP）永停滴定装置永停滴定装置在两个铂电极间外加在两个铂电极间外加10200mV电压，并且电压，并且在回路中串联一个灵在回路中串联一个灵敏的电流计。敏的电流计。 终点前：线路中无电流，终点前：线路中无电流，电流计指针电流计指针指零指零 终点时：溶液中存在微过终点时：溶液中存在微过量的量的HNO2，电极电极发生氧化发生氧化还原反应，电流计指针偏转，还原反应，电流计指针偏转，不回零不回零 OHNO2eHHNO2eHHNO2OHNO2阳极：阳极： 阴极：阴极： （2）电位法）电位法 USP电极：甘汞电极：甘汞- -铂电极铂电极 终点：稍过量的终点：稍过量的NaNO2使使电位产生突跃电位产生突跃 （3）外指示剂法）外指示剂法 KI-淀粉试纸淀粉试纸 2NaNO2+2KI+4HCl 2NO+I2+2KCl+2NaCl+2H2O （4）内指示剂法）内指示剂法 取本品约取本品约0.