乌拉地尔缓释胶囊相对生物利用度和体内外相关性研究_图文

1、乌拉地尔缓释胶囊相对生物利用度和体内外相关性研究周静1,蒋学华1*,张迅2,杨俊毅1(1.四川大学药学院,I召ml成都610041;2.四川大学华西第二医院,it11成都610041摘要:目的对乌拉地尔缓释胶囊进行相对生物利用度和体内外相关性研究。方法采用反相高效液相色谱法测定24名健康志愿受试者单剂量和多剂量口服乌拉地尔缓释胶囊供试制剂与参比制剂后乌拉地尔血药浓度的变化。用3P97药动学程序处理试验数据,并对试验结果进行方差分析和双单侧t检验;体外释放度采用中国药典2000版二部的转篮法。结果单剂量试验乌拉地尔的相对生物利用度为:(96.37±13.77%;两种制剂乌拉地尔的药.时

2、曲线下面积(AUC(卜,分别为:(2347.6士493.2,(2458.9±526.5nghmL。1;达峰时间(f一分别为:(4.17±O.28,(4.23±0.29h;峰浓度(c一分别为:(325.6±40.3,(322.0±75.5ng-mL.。多剂量试验乌拉地尔的相对生物利用度为:(99.99±16.24%;两种制荆乌拉地尔的药一时曲线下面积(AuC咿。分别为:(4513.1±1372.7,(4549.7±1308.8IlghmL_1;稳态达峰时间(f一分别为:(4.00±0.49,(4.08

3、77;0.43h;稳态峰浓度(c一分别是:(544.5±147.1,(565.7士146.8flgmL_1;波动度DF分别是(91.22±14.07%,(84.53土26.10%。体外12h平均累积释放86.33%和87.35%。结论对单剂量口服两种制剂后的1nAUC咿。,lnAUC睁。lIlc一及多剂量口服两种制剂达稳态后的lnAUC睁。,lnAUC咿。,lncm酆单侧t检验,一经秩和检验进行生物等效性评价,表明两者为生物等效制剂,且乌拉地尔缓释胶囊的体内吸收与体外释药有良好的相关性(P<0.05。关键词:乌拉地尔;生物利用度;体内外相关性中图分类号:R959.1文

4、献标识码:A文章编号:10012494(200502012305Relative bioavailability and the correlation study on urapidil sustained-release capsules between伽vitro and in vivoZHOU Jin91,JIANG XuehuaH,ZHANG Xun2,YANG Jun.yil(1.Scoof矿瑚nrm可,Sichuan University,Chengdu610041Chi一阮;2.Second够如匏d Hospital,Swhuan University,Chengdu61004

5、1Ch/naABSTRACT:OBJECTIVE Toinvestigate the relative bioavailabilityand the correlation study o/1urapidil sustainedrelease capsules between in vitro and讥v/vo.METHODS Urapidil concentration in plasma was detected by RP-HPLC after twemy four healthy male volunteers were treated with a sinde dose and mu

6、ltiple doses of oral urapidil sustained-release capsules test and reference preparations.nle data was ealeulated with3P97program.The msults were analyzed by ANOVA and two one-side test.The dissolution of urapidil was determined in vitro according to CP(2000ed,partII.RESULTS The relative bioavailabil

7、ity ofurapidil in the single dose treatment was(96.37±13.77%.AUC0.t ofura-pidil test and reference preparationswere(2347.6±493.2nghmL一1vel骘,us(2458.9±526.5nghlL一1;f.naxwere(4.17±0.28h versus(4.23±0.29h;emaxwere(325.6±40.3ng。mL一1versus(322.0±75.5ng。mL一1.The relative

8、 bioavailability of urapidil in the multiple dose treatment was(99.99±16.24%.AUC咿t ofurapidil test and reference preparation were(4513.1±1372.7ngh。mLversus(4549.7±I308.8ng-hl【|一1,f。were(4.(30±O.49h(4.08±0.43h,enmx were(544.5±147.1tagmL一1versus(565.7±146.8ngmL一1,DF

9、were(91.22±14.07%versus(84.53±26.10%.The dissolution of urapidil in the two preparations was86.33%and87.35%within12h,respectively.CONCLUSIONBioequivalent evaluation of two preparations by two one-side testand rank sum test showed that the two preparations were bioequivalent.There was a sig

10、nificant relationship between absorption/n v/vo and dissolution/n vitro(P <0.05.KEY WORDS:urapidil;bioavailability;correlation in vivo and vitro乌拉地尔是苯哌嗪取代的尿嘧啶衍生物,兼有外周al受体阻滞作用和中枢5.羟色胺.1A受体激动活性,适用于单独治疗及长期治疗高血压,降压迅速有效,降压幅度适中,很少导致血压过低,停药后也无血压反跳现象2|。尤其是缓控释制剂,可避免由于血药浓度急剧上升引起的体位性低血压,使血药浓度较长时间维持在治疗浓度范围内。

11、乌拉地尔由德国百克顿公司1981年首先开发上市,现已在欧美一些国家及日本、韩国等上市,我国1992年开始进口其缓释胶囊制剂(优匹敌,其疗效、安全性和耐作者简介:周静,女,硕士,讲师。通讯作者:蒋学华,男,教授,博士生导师Tel:(02885501370Fax:(02885503024Email:jxhl013 163.COBChin PharmJ,2005January,V01.40No.2123万方数据受眭已得到肯定,但价格较为昂贵。本试验采用tiPHPLC测定24名健康受试者单剂量及多剂量口服乌拉地尔缓释胶囊后,血浆中乌拉地尔的浓度,进行其相对生物利用度评价,并研究了乌拉地尔缓释胶囊的体外

12、释放度和体内生物利用度的相关性,为该制剂的临床应用提供依据。1试验材料1.1药品、试剂与仪器乌拉地尔参比制剂优匹敌胶囊(德国百克顿公司,30mg粒,批号:199431;供试制剂乌拉地尔缓释胶囊华裕(无锡制药有限公司研制,30嘲粒,批号:991102;乌拉地尔对照品(含量99.9%和内标1,3一二甲基.4.(7一氯丙基氨基一尿嘧啶(含量99.8%华裕(无锡制药有限公司;乙腈为色谱纯;其余试剂为分析纯;水为超纯水。LC一6A高效液相色谱仪、SPD.10AVP紫外检测器、CTO一6A柱温箱(日本岛津;Auastar工作站(天津奥特赛思斯仪器有限公司。1.2研究对象24名健康男性,年龄(21.13&#

13、177;1.48岁,体重(62.75±4.50kg,身高(170.80±4.28cm,试验前所有受试者经肝、肾功及心电图检查,均正常。在充分了解本试验的目的、方法及该产品的药理与不良反应,并自愿签署“志愿受试者知情同意书”后成为本试验志愿受试者。近两周及试验中未使用过其他药物。2试验方法与结果2.1人体相对生物利用度试验方案采用两制剂双周期交叉试验设计方法试验。2.1.1单剂量试验将24名志愿受试者随机分为两组,每组12人。禁食12h后,分别口服供试制剂1粒和参比制剂1粒,服药前、后在规定时间点上肢静脉采血约5mL,采血点为服药前取空白血,服药后1.0,2.0,3.0,3.

14、5,4.0,4.5,5.0,6.0,9.0,12.0, 15.0,24.0h采集血样。间隔1周后,交叉服药,于相同时间点上肢静脉采血。将血样置于肝素化塑料离心管中,离心后分离血浆,置一20低温箱保存待测。服药后3h内禁食并控制饮水,受试期间禁烟、酒、茶及饮料,进食统一餐。2.1.2多剂量试验24名受试者随机分为2组,每组12人,分别口服乌拉地尔缓释胶囊供试制剂1粒(30mg粒。1和参比制剂1粒(30mg粒。1,2次d,于第5天晨服药前、第5天晚、第6天晨服药前抽取血样5mL测定谷浓度值,第6天早晨空腹服药。124Ch/n Pharm J,2005January,V01.40No.2后,在规定时

15、间由上肢静脉取血5mL,离心分离血浆备测(置于一20保存。采血时间点为服药后1.0,2.0,3.0,3.5,4.0,4.5,5.0,6.0,9.0,12.0,15.0, 24.0和36.0h。间隔两周后开始第2阶段试验,两组受试者交叉服药,于第2阶段的第5天晨、第5天晚、第6天晨服药前抽取血样5mL测定谷浓度值,第6天早晨空腹服药后,在规定时间点由上肢静脉取血5mL,离心分离血浆备测(置于一20保存。服药后3h内禁食并控制饮水,受试期间禁烟、酒、茶及饮料,进食统一餐。2.2血浆中乌拉地尔测定方法与结果2.2.1色谱条件色谱柱:大连依利特科学仪器有限公司hypersil BDS C18色谱柱(5

16、pan,4.6inln×200 inl'n,编号N02106112。流动相:乙腈.0.05molLKH2P04溶液.三乙胺一冰乙酸(20:80:0.1:0.1,流速: 1mLmin-。,检测波长270n/n。在上述色谱条件下,空白血浆、血浆样品色谱图见图1。由图可见,血浆中内源性物质不干扰乌拉地尔与内标的分离测定。图1空白血浆(A及乌拉地尔血浆样品(B色谱图Fig1HPLC chromatograms of blank plasma(Aand plasma sam-pie(B2.2.2血浆样品处理与测定精密量取血浆2.0 mL,加人105ng皿。1内标1,3.二甲基一4一(7

17、.氯丙基氨基一尿嘧啶溶液20汕,旋涡混匀10s,加入5mL 二氯甲烷.异丙醇(9:1混合液旋涡提取10min,然后置高速离心机中,3000rmin。1离心30min,分离有机层,室温下氮气挥干,残渣用100血流动相溶解,进样50止,在上述色谱条件下分离测定,记录色谱图、内标峰面积(A;、乌拉地尔峰面积(A。,内标法计算血浆中乌拉地尔的浓度。2.2.3标准曲线制备取乌拉地尔对照品约12 IIlg,精密称定,置50mL量瓶中,用流动相溶解,并稀释至刻度,取2mL此溶液置10mL量瓶中用流动相稀释至刻度,得到50.2/agmL一乌拉地尔对照品贮备液;取乌拉地尔对照品贮备液用流动相稀释成不同浓度的乌拉

18、地尔对照品溶液。取7支干燥试管,万方数据分别精密加入空白血浆2.0mL及不同浓度的乌拉地尔对照品溶液50汕和内标溶液20肚(105ggmL。1,混匀,然后按“2.2.2”方法,依法测定,记录色谱图、内标峰面积(Ai、乌拉地尔峰面积(A。,以各浓度Ai和As计算l,(Y=A。/Aj,以y值为纵坐标,乌拉地尔浓度C(ngmL。为横坐标,直线回归,标准曲线方程为:Y=0.0025c一0.0002,r=0.9999。结果表明,血浆中乌拉地尔浓度在9.35935.0ngmL一范围内,浓度与峰面积比有良好的线性关系。方法的最低定量浓度为9.35ngmL。2.2.4回收率实验分别于2.0mL的空白血浆中加入

19、高、中、低3种不同浓度的乌拉地尔对照品溶液,混匀,得高、中、低3种不同浓度的乌拉地尔血浆样品,按“2.2.2”项下方法,测定乌拉地尔回收率。结果见表1。表1乌拉地尔在血浆中的回收率.忍=5,贾±sTab1Recovery of urapidil in the plasma.n=5.贾±52.2.5精密度实验分别于2.0mL的空白血浆中加人高、中、低3种不同浓度的乌拉地尔对照品溶液,混匀,得高、中、低3种不同浓度的乌拉地尔血浆样品,按“2.2.2”项下方法,测定乌拉地尔的日内与日间(5d内精密度。结果见表2。表2乌拉地尔在血浆中的精密度.凡=5Tab2Precision of

20、 urapidil in the plasma./,=5JnAit臁L藤/rigmL/蠼.札一l RsD/%/蠼.mLl/%16.716.37.3715.712.5125.0122.05.17120.75.62111:!丝:!:!墅:!:堑2.2.6提取回收率实验取乌拉地尔对照品约20 mg,精密称定,置50mL量瓶中,用流动相溶解,并稀释至刻度,取2mL此溶液置10mL量瓶中用流动相稀释至刻度,得到77.8肛gmL_1乌拉地尔对照品溶液。分别在水中加入高、中、低3种不同浓度的乌拉地尔对照品溶液及相同的内标溶液,混匀,得高、中、低3种不同浓度的乌拉地尔水溶液样品,直接进样测定;分别在空白血浆中

21、加入高、中、低3种不同浓度的乌拉地尔对照品溶液及相同的内标溶液,混匀,得高、中、低3种不同浓度的乌拉地尔血浆样品,按照“2.2.2”项下方法提取后进样测定(样品浓度相当于上述不同浓度的乌拉地尔水溶液样品。计算提取回收率。结果见表3。表3乌拉地尔提取回收率试验结果.n=3Tab3The extract recovery of urapidil.n=3登曼!型:些:!旦些主!望堕里丝兰塑旦坚奎!丝38.984-8±6.655.64233.488.3±0.420.3788.2±4.32丝:!:!:!:!:墅2.2.7稳定性考察取已知浓度乌拉地尔血浆样品数份,分别置室温、

22、冰冻、冰融条件下存放不同时间后,按“2.2.2”项下操作,测定乌拉地尔浓度,考察样品放置稳定性。结果表明乌拉地尔在室温条件下至少能稳定48h,在冰融条件下至少能稳定10h,在冰冻条件下至少能稳定30d。2.3相对生物利用度试验数据处理方法与结果2.3.1单剂量试验结果24名志愿者单剂量口服相同剂量的供试制剂和参比制剂的乌拉地尔均值药一时曲线见图2。用3P97药动学程序对单剂量口服乌拉地尔供试制剂和参比制剂经时血药浓度数据进行处理,采用非室模型计算Auc咿。,c一,根据实际血药浓度数据读出。对一进行秩和检验,结果见表4,对AuC睁。,AuC咿。,Cmax经对数转换后进行方差分析与双单侧t检验,结

23、果见表5和表6。结果表明,两种制剂生物等效(t1t卜o.05(22,t2t1一o.05(22。篓一300皂翥,so100图2单剂量口服乌拉地尔供试制荆和参比制剂的均值药时曲线一一供试品;I一参比品Fig2Mean plasma concentration-time curve of urapidil after a single oral dose of two preparations卜一test;l一妇nce表4单剂量口服乌拉地尔供试品和参比品后一的秩和检验结果Tab4Rank SHill test results oftmaxafter a single dose of oral two

24、 urapidil preparationst1t2tl t2df to05结论制剂间135*179无差异阶段间137*179无差异2.3.2多剂量试验结果24名志愿者多剂量口服相同剂量的供试制剂和参比制剂的乌拉地尔均值药一时曲线见图3。同“2.3.1”项下方法处理数据。结Chin Pharm J,2005January,V01.40No.2125万方数据表5单剂量口服乌拉地尔供试品和参比品后等效性检验结果Tab5Bioequivalent result of urapidil after a single dose orally表6单剂量口服乌拉地尔供试品和参比品后的方差分析结果Tab6AN

25、OVA result of a single doseurapidil orally参数方差来源Ss df MS P lIl(Au%一。总体2.089347个体间1.8584230.08080.0000周期间0.071510.07150.0023制剂问o.02661o.0266o.0475误差0.1328220.0060 ln(AuG咿t总体1.953647个体间1.7136230.07450.0000周期间0.120810.12050.0000制剂问0.025410.02540.0233误差0.0942220.0043 h1(c一总体1.547747个体问0.7687230.03340.14

26、32周期问0.304610.30460.0010制剂问0.009610.00960.5063堡薹!:!竺!丝!:丝!果多剂量试验乌拉地尔的相对生物利用度为: (99.99±16.24%。两种制剂乌拉地尔的药.时曲线下面积(AuC【卜。分别为:(4513.1±1372.7, (4549.7±1308.8nghmL。1;稳态达峰时间(一分别为:(4.00±0.49h,(4.08±0.43h;稳态峰浓度(c一分别是:(544.5±147.1,(565.7±146.8ngmL-1;波动度(DF分别是(91.22±14.07

27、%,(84.53±26.10%。结果表明,两种制剂生物等效(tlt1一o.05(22,t2t1一o.05(22J。f/h图3多剂量13服乌拉地尔供试品和参比品达稳态后的均值药.时曲线一供试品;-一参比品Fig3Mean plasma concenlxation-time curve of urapidil after mulfiple-dose of two preparations orally一test;一reference2.4体外释放度实验本试验采用中国药典2000年版二部溶出度测定方法第一法(转篮法进行操作。取乌拉地尔缓释126Ch/n Pharm J,2005Januar

28、y,V01.40No.2胶囊供试制剂6粒(批号991102,置不锈钢转篮中,以水为释放介质,在(37±0.5,50rmin。条件下,分别于1,2,4,6,8,10,12h取样,用高效液相色谱法测定,流动相是乙腈一0.05molL。1KH2P04溶液一三乙胺.冰醋酸(20:80:0.1:0.1,流速:1mLwin,检测波长270nln,线性范围为1.010ttgn1L-。,A =0.0644c+0.0084,r=0.9999。由标准曲线法计算药物浓度,并算出其累积释放百分率。结果在12 h平均累积释放86.33%。同法测定乌拉地尔缓释胶囊参比制剂的体外释放,结果在12h平均累积释放87

29、.35%。经t检验证实两制剂的12h平均累积释放百分率无差异(P>0.05。2.5体内外相关性评价采用Wangner.Nelson法计算乌拉地尔缓释胶囊的体内吸收分数,乌拉地尔缓释胶囊的累积释放分数与吸收分数见表7。表7乌拉地尔缓释胶囊的累积释放分数与吸收分数Tab7ft and疋of umpidil sustained-release capsule 时间/h供试制剂参比制剂累积释放分数体内吸收分数累积释放分数体内吸收分数(,I(,a(,I(,丑21.4934.7360.7675.0986.339.4526.4384.2583.5796.9720.66352l61.8578.6487.

30、359.0125.6782.3785.6797.35将乌拉地尔缓释胶囊的体外累积释放百分数(.对体内吸收分数(.厂a回归,得供试制剂与参比制剂的体外释药与体内吸收相关性方程分别为试=1.41×一18.11,r=0.9699。/a参比=1.37×一17.79,r=0.9759。对相关系数r进行t检验,P <0.05,具有显著的相关性。3讨论对单剂量及多剂量口服两种制剂后乌拉地尔的Auc咿。,Cmax进行方差分析并以双单侧t检验进行生物等效性评价,双单侧t检验t1>1.717,t2> 1.717,乌拉地尔缓释胶囊供试制剂AUC的90%可信限均落在参比制剂的80

31、%一125%范围内,c一均落在参比制剂的70%143%范围内,结果表明,两种制剂生物等效。目前许多文章仍采用方差分析和双单侧t检验对一进行生物等效性评价,但由于一及其对数均不满足正态分布,不应采用方差分析和双单侧t检验进行生物等效性评价,本试验采用非参数检验法对单剂量及多剂量口服两种制剂后乌拉地尔的f一进行秩和检验,结果表明,两种制剂间无差异(P>0.05。万方数据复方双黄连与黄芩提取物中黄芩苷代谢的比较研究狄斌1,冯年平2*,刘文英1(1.中国药科大学药物分析教研室,江苏南京210009;2.上海中医药大学,上海201203摘要:目的比较复方双黄连剂和黄芩单味药材提取物中黄芩苷在大鼠体

32、内代谢的差异。方法运用高效液相色谱法和液质联用技术检测黄芩苷的代谢产物种类和数量,并测定水解后黄芩苷元的量。结果从给药后的大鼠尿样中,发现并初步鉴定了几个主要代谢产物的化学结构,测定了黄芩苷元的量。结论黄芩提取物和复方双黄连剂中黄芩苷在尿样里的主要相同代谢物为5,6,7-三羟基黄酮60葡萄糖醛酸苷一7.0一葡萄糖醛酸苷,5,6,7.三羟基黄酮一6.0.葡萄糖一7.0一葡萄糖醛酸苷,5,7一三羟基.6_甲氧基黄酮.7.O.葡萄糖醛酸苷,5,6,7-三羟基黄酮.6-0一葡萄糖醛酸苷以及黄芩苷元,黄芩单方灌胃给药后黄芩苷的肾清除速度低于复方双黄连,复方中其他药味促进了黄芩苷的代谢。关键词:黄苓苷;复

33、方双黄连;黄芩提取物;代谢中图分类号:R969文献标识码:A文章编号:10012494(200502012704Study on metabolism differences of baicalin in compound Shuanghuanglian and Huangqin extract in ratsDI Binl,FENG Nianping;”,LIU Wenyin91(1.Department of Pharmaceutical Analysis,China Pharmaceutical University,Nanjing 210009,China;2.喇University

34、of Traditional Chinense Medicine,Shanghai201203,Ch/naABSTRACT:OBJECTIVE To compare the metabolism of baiealin in Huangqin extract with that in compound Shuanghuanglian granule inrats.METHODS Urinesamples were collected after administration of the two preparations.The number and struetaresof baiealin

35、 metabolites were analyzed by HPLCMSn.The accumulationamount of baiealein was determined.RFcsULTS The n1ajor metabolites were found in rat urineafter oral administration and their chemical stmetmes were identified埘n谢1y.CONCLUSION The n甸or same metabolites of baicalin in Huangqin extract and compound Shuanghuanglian were baicalin-6一Opglueopyranuronoside-7一O-pglucopyranuronoside,baiealin-6-Oglucoside-7OlB-glueopyranuronoside and6-Omethyl-baiealin-7一O-/3-glucopyranuronoside.baicalin一6-O-/3-glueopyranuronoside and baicalein.The renal clearance o