前列腺上皮内瘤中微血管密度、DNA倍体、免疫表型与其生物学特

1、前列腺上皮内瘤中微血管密度、DNA倍体、免疫表型与其生物学特性的关系         11-01-07 11:04:00     编辑：studa20           作者：侯惠莲，张学斌，李旭，张冠军，王鸿雁，邓元，王敏 【摘要】  目的 探讨微血管密度(MVD)、DNA倍体、免疫表型与前列腺上皮内瘤(PIN)及其生物学特性的关系。方法 应用

2、免疫组织化学SP法和计算机图像分析技术，对24例前列腺增生症(BPH)、23例低级别上皮内瘤(LGPIN)、26例前列腺癌(PC)伴发高级别上皮内瘤(HGPIN)的石蜡包埋标本进行CD34、34E12、P63、P504s表达的检测，定量测定其MVD和细胞核DNA倍体。结果 不同级别的PIN中MVD和DNA平均倍体均明显高于BPH组，但明显低于PC组(P<0.01)，且随PIN级别的增高，DNA倍体的异多倍体数及MVD值随之升高(P<0.01)。DNA倍体与MVD呈正相关关系。34El2和P63在BPH和LGPIN腺体周围的基底细胞呈连续阳性，在HGPIN中呈断续阳性，在PC中呈阴性

3、。P504s在HGPIN中呈灶状阳性，在PC中呈强阳性，在BPH和LGPIN中呈阴性。结论 DNA倍体、MVD与PIN密切相关，是反映其生物学特性的重要参考指标；免疫表型进一步证实PIN特别是HGPIN是PC的癌前病变。 【关键词】  前列腺上皮内瘤；前列腺癌；微血管密度；DNA倍体；免疫组织化学ABSTRACT: Objective  To study microvascular density (MVD), DNA ploidy and immunophenotype in prostatic intraepithelial neoplasia (PIN) as wel

4、l as their relationship with its biological properties. Methods  We studied paraffinembedded specimens from 24 cases of benign prostatic hyperplasia (BPH), 23 cases of lowgrade prostatic intraepithelial neoplasia (LGPIN), and 26 cases of prostatic carcinoma (PC) with highgrade prostatic intraep

5、ithelial neoplasia (HGPIN). Image analysis was used to measure the DNA average ploidy and MVD, and after that the expressions of 34El2, P63, P504s and CD34 were detected by immunohistochemistry SP. Results  DNA ploidy and MVD in PIN were higher than those in BPH, but lower than in PC, and corre

6、lation was detected among different grades of PIN. MVD had a positive correlation with DNA aneuploidy in different grades of PIN (P<0.01), and there was a significant positive correlation between expression of DNA ploidy and MVD. Acini of PC were completely negative for both basal cell markers (3

7、4E12 and p63), but were positively different in the BPH and among different grades of PIN, which were in contrast to the results for the acini cells of revealed varying degrees of expression of P504s in the PC and HGPIN, and acini of BPH and LGPIN were negative. Conclusion  MVD and DNA ploidy w

8、ere correlated to the biological properties of PIN, and thus were important parameters. HGPIN is a precancerous change of prostatic carcinoma by expression of MVD and DNA ploidy and these immunophenotypes.KEY WORDS: prostatic intraepithelial neoplsia (PIN); prostatic carcinoma (PC); microvascular de

9、nsity (MVD); DNA ploidy; immunohistochemistry前列腺上皮内瘤(prostatic intraepithelial neoplasia, PIN)是一种较常见的病理现象，具有发展为浸润癌的潜能。85%的前列腺癌(prostatic carcinoma, PC)中可以找到PIN的存在。作为前列腺癌的癌前病变，PIN已成为近年来研究的热点，但目前尚缺乏反映其生物学特性的指标。研究认为，肿瘤微血管密度(microvascular density, MVD)是反映恶性肿瘤生物学行为的重要参数1，细胞核DNA倍体是反映肿瘤细胞增殖能力的重要生物学定量指标2，前列

10、腺基底细胞特异性标记物P63、34E12与前列腺癌特异性标记抗体P504s联合应用是鉴别前列腺肿瘤良恶性的最佳指标3。本研究应用免疫组织化学SP法和计算机图像分析技术，对24例前列腺增生症(benign prostatic hyperplasia, BPH)、23例低级别上皮内瘤(lowgrade prostatic intraepithelial neoplasia, LGPIN)、26例PC伴高级别上皮内瘤(highgrade prostatic intraepithelial neoplasia, HGPIN)的石蜡包埋标本进行CD34、P63、34E12和P504s表达的检测，并定量测

11、定其中MVD和细胞核DNA倍体，探讨其与PIN发生、发展及癌变的关系。1  材料与方法1.1  研究对象收集我院1995年2月2005年1月间临床病理资料完整的经尿道前列腺切除或电切标本73例。其中PC伴发HGPIN 26例，在同一例该标本中，选取癌组织作为PC组，癌旁组织作为HGPIN组，患者年龄4893岁，平均(68.73±8.99)岁；同期收检BPH伴发LGPIN(LGPIN组)23例，年龄6081岁，平均(68.35±6.53)岁；BPH 24例，作为对照组，年龄6085岁，平均(70.67±6.51)岁。1.2  主要试剂及

12、仪器CMIAS真彩色病理图像分析系统购自北航图像中心与空军总医院医学图像研发中心。免疫组织化学所用一抗(鼠抗人单克隆抗体CD34和兔抗人单克隆抗体34E12、P63、P504s)及其试剂盒购自Dako公司；Fulgen染色所用的Schiff试剂购自上海化学试剂厂。1.3  方法 组织均经100mL/L甲醛溶液固定，常规石蜡包埋，5m厚连续切片，HE染色复查。1.3.1  CD34、34E12、P63和P504s表达的检测 采用免疫组织化学SP法。步骤如下：标本切片脱蜡、水洗，抗原修复，滴加羊血清封闭，滴加一抗，PBS洗片；滴加二抗(室温孵育)，DAB显色

13、，苏木精复染，中性树胶封片。工作液浓度分别为180、170、170、130。TBS代替一抗作空白对照，用标本中间质大血管和已知前列腺癌及其正常组织作阳性对照。1.3.2  MVD和细胞核DNA倍体的检测 以CD34阳性标记的单个细胞和内皮细胞簇作为一个血管标记(图1A)，先在低倍镜(×100)下观察，再在高倍镜(×200)下选择微血管数量最多的5个视野，计数MVD，求其平均值作为测定标本的MVD值。采用Fulgen法染组织的细胞核后，在CMIAS真彩色病理图像分析系统下进行DNA倍体测定。每例测定间质淋巴细胞(参照细胞)50个，前列腺上皮细胞(分析细胞)50个，校正因子1.1。1.3.3  DNA倍体的判定标准 2C及近2C：1.82.5C