生物的素测试剂盒操作流程

1、实用标准文案维生素 B7 （生物素）检测试剂盒实验操作流程一、实验前准备工作1 、灭菌（在做实验前，至少提前两个小时以上灭菌）实验器材名称规格数量黄色吸头20-200ul200个蓝色吸头100-1000ul200个带塞可离心试管50ml至少是当次检测样品数量离心管1.5-2.0ml100个注射器至少比当次检测样品数量多2 个如果有一次性无菌注射器则不需要灭菌注射器没有枪头盒时用其他器皿装枪头一起灭菌（如烧杯， 灭菌时放入枪头后用报纸把烧杯口封起来），同时带两把小镊子，做实验时取枪头用。2 、配制溶液（1 ）准备 10mlHCL溶液： 1.0mol/l（ 2 ）配制氢氧化钠溶液： 1mol/l

2、a）称取 0.4 g 氢氧化钠精彩文档实用标准文案b ）用 10 ml双蒸水或去离子水充分溶解注：用带橡胶塞的玻璃瓶储存。3 、实验过程中需要的其他设备及器材：无菌工作台酶标仪 (540nm或 630nm)37 黑暗条件下的培养箱95 水浴锅（实验前需要提前加热到95 ）振荡器pH 测量仪或pH 试纸双蒸水0.2um无菌滤膜酒精棉二、样品处理1 、称取 1g 奶粉样品至一个50ml无菌试管中，加入40ml无菌水摇匀，用HCL 或 NaOH调整 pH 值到 8.0 /- 0.2 ，充分混匀；2 、在 95 水浴中提取30 分钟，期间所有样品试管需每隔5 分钟振荡一次，并一直保持试管塞紧闭3 、迅

3、速冷却至室温（即把样品试管放进水里，保证试管塞紧闭）精彩文档实用标准文案从下面这一步开始需要在无菌工作台进行4 、分别取1ml 样品用 0.2um无菌滤膜过滤至1.5 2.0ml 无菌试管中5 、根据样品中生物素含量用试剂盒中提供的无菌水进一步稀释样品，稀释后的样品即可用于检测。样品稀释倍数计算如下：例如：固体样品标注浓度为80ug/100g用该浓度除以标准2计算：80g ÷ 0.24g 333 结果为稀释倍数大约为300 1 ：300稀释稀释步骤：a) 1 ： 9 （ 100ul 样品提取溶液 900ul 试剂盒中的无菌水） ，b) 1：9 （100ul a液 900ul试剂盒中的

4、无菌水） ，c) 1 ：2 （ 200ul b 液 400ul 试剂盒中的无菌水）注：每一步稀释都需要充分混匀后再做下一步稀释，提取稀释液需立即使用。三、检测过程1 、配制标准品装有无菌水的瓶子：推开蓝色帽，沿着玻璃边缘垂直向上拉开，丢弃。标准品必须在试验之前新鲜制备。打开生物素标准品瓶，取出盖子。丢掉盖子和红色塞子加入 x ml无菌水，至标准品瓶中。充分溶解标准品，即配成标准品浓缩液。精彩文档实用标准文案注： x 详见质控报告和标准品包装标签，每一批次所加体积会略有不同，无菌水必须是取自试剂盒中提供的。取 6 个无菌管（ 1.5 2.0ml ）并按照下列表格准备标准品溶液。标准曲线 *无菌水

5、标准浓缩液总体积g/100g(ml)lll空白： 09000900标准品 1： 0.089001001000标准品 2： 0.24350150500标准品 3： 0.40250250500标准品 4： 0.56150350500标准品 5： 0.7250450500注：配制每一个标准品，都是取标准浓缩液进行稀释。2 、制备生物素培养基注：培养基必须在试验之前新鲜制备。打开瓶盖用镊子从干燥剂中取出培养基，丢掉干燥剂。加入 10ml 无菌水（必须取自试剂盒中）至生物素培养基中。盖好培养基瓶，充分摇匀。在 95 水浴中加热至少5 分钟，期间振荡至少2 次，保证瓶子封闭。迅速冷却至室温（低于30 ）。

6、使用 0.2 m 无菌滤纸过滤培养基至15ml无菌离心管中。3 、检测过程取出当次实验需要数量的 微孔板条， 并固定在板上， 未使用的微孔板条立即放回原来的箔袋中，并与干燥剂一起重新封好，储存在2-8 条件下。用移液枪取150 l 生物素培养基至微孔中精彩文档实用标准文案用移液枪取150 l 标准品或样品至指定的微孔中用粘合箔盖住微孔条或微孔：用手或压舌板将粘合箔平压，使其充分封闭微孔板条。注意： 保证粘合箔和微孔的封闭性，特别注意微孔的边缘部分。在 37 黑暗条件下（可用孵育器）孵育44 48 小时。注： 37 孵育不能超过 48小时。以两次平行、两个样品为例，取两条微孔板条，每孔加样如下:

7、150ul生物素培养基 +150ul无菌水150ul生物素培养基 +150ul无菌水150ul生物素培养基 +150ul标准品1150ul生物素培养基 +150ul标准品 1150ul生物素培养基 +150ul标准品2150ul生物素培养基 +150ul标准品 2150ul生物素培养基 +150ul标准品3150ul生物素培养基 +150ul标准品 3150ul生物素培养基 +150ul标准品4150ul生物素培养基 +150ul标准品 4150ul生物素培养基 +150ul标准品5150ul生物素培养基 +150ul标准品 5150ul生物素培养基 +150ul样品 1（稀释后）150ul生

8、物素培养基 +150ul样品 1（稀释后）150ul生物素培养基 +150ul样品 2（稀释后）150ul生物素培养基 +150ul样品 2（稀释后）4 、读取数据再次向下挤压粘合箔，将微孔板向上放置在桌面上，在桌面上来回振荡，使微生物溶解在培养基中从对角开始小心揭去粘合箔，从左边开始进行；微孔液体表面有泡沫时可以用移液枪头去除用酶标仪630nm （或 540nm ）条件下读取浑浊度四、结果计算精彩文档实用标准文案推荐在计算结果时使用专业计算软件。并使用4 参数计算公式进行结果计算。判断检测结果有效：OD 空白值< OD标准 1OD 标准 5> 0.6 OD从标准曲线上读取的浓度×稀释倍数样品中生物素含量（g/100ml）样品总量g （ ml ）（g/100g）注：稀释倍数为样品处理过程中所计算的整数倍，不包括提取过程中的40 倍，这个倍数已经在曲线中考虑进去。例如：样品重量：1 g样品提取稀释倍数：1： 40 （不需要被考虑进去）其它稀释倍数：1： 300 （必须考虑）从标准曲线中读取浓度值：0.24 g /100 g （ml ）0.24×300 / 1 = 128g / 100 g（ml ）五、实验注意事项1 、试剂盒应存放在2 8