生物工程概论复习题

1、、选择题第二章基因工程复习题1. 限制性核酸内切酶是由细菌产生的，其生理意义是（ D）A 修复自身的遗传缺陷C 强化自身的核酸代谢B 促进自身的基因重组D 提高自身的防御能力2. 生物工程的上游技术是（ A 基因工程及分离工程 C 基因工程及细胞工程D）B 基因工程及发酵工程D 基因工程及蛋白质工程3. 基因工程操作的三大基本元件是:（I 供体 II 受体 III 载体 IV 抗体 V 配体 ） （A）A. I + II + III B. I + III + IV C. II + III + IVD. II + IV + V4. 多聚接头（Polylinker ）指的是（A）A. 含有多种限制

2、性内切酶识别及切割顺序的人工DNA 片段B. 含有多种复制起始区的人工DNA 片段C. 含有多种SD 顺序的人工DNA 片段D. 含有多种启动基因的人工DNA 片段5. 下列五个DNA 片段中含有回文结构的是（D）A. GAAACTGCTTTGACB. GAAACTGGAAACTGC. GAAACTGGTCAAAGD. GAAACTGCAGTTTC6. 若将含有5' 末端4 碱基突出的外源DNA 片段插入到含有3' 末端 4 碱基突出的载体质粒上，又必须保证连接区域的碱基对数目既不增加也不减少，则需用的工具酶是（D）I T 4 -DNA 聚合酶 II Klenow III T

3、4 -DNA 连接酶 IV 碱性磷酸单酯酶A. III B. I + IIIC. II + IIID. I + II + IIIA. 下列有关连接反应的叙述，错误的是（A）A. 连接反应的最佳温度为37 B. 连接反应缓冲体系的甘油浓度应低于10%C. 连接反应缓冲体系的ATP 浓度不能高于1mMD. 连接酶通常应过量2-5 倍8. T4-DNA 连接酶是通过形成磷酸二酯键将两段DNA 片段连接在一起，其底物的关键基团是（D）A. 2' -OH和 5'- PB. 2' -OH和 3' -PC. 3' -OH和 5'- PD. 5' -OH

4、和 3' -P9. 载体的功能是（I 运送外源基因高效进入受体细胞II 为外源基因提供复制能力III 为外源基因提供整合能力） （ D）A. IB. I + IIIC. II + IIID. I + II + III10. 克隆菌扩增的目的是（I 增殖外源基因拷贝II 表达标记基因III 表达外源基因） （D）A. I + IIB. I + IIIC. II + IIID. I + II + III11. 下列各组用于外源基因表达的受体细胞及其特点的对应关系中，错误的是（C）B. 枯草杆菌分泌机制健全D. 酵母菌表达产物具有真核性A. 大肠杆菌繁殖迅速C. 链霉菌遗传稳定12.考斯质粒

5、（cosmid）是一种（B）A. 天然质粒载体B.由入-DNA的cos区与一质粒重组而成的载体C. 具有溶原性质的载体D. 能在受体细胞内复制并包装的载体13. 某一重组DNA （ 6.2 kb ） 的载体部分有两个SmaI 酶切位点。用SmaI 酶切后凝胶电泳上出现四条长度不同的带子，其长度总和与已知数据吻合，该重组分子插入片段上的SmaI 酶切位点共有（D）A.4 个B. 3 个C. 2 个D. 至少 2 个14. 外源基因在大肠杆菌中以融合蛋白的形式表达的优点是（I 融合基因能稳定扩增II融合蛋白能抗蛋白酶的降解III 表达产物易于亲和层析分离） （ D）A.IIIB. I + IIC.

6、 I + IIID. II + III15. 提高重组率的方法包括（I 加大外源DNA 与载体的分子之比II 载体分子除磷III 连接酶过量IV 延长连接反应时间） （ A）A. I + IIB. I + II + III C. I + III + IV D. II + III + IV16. 识别基因序列不同，但酶切后产生的粘性末端相同的一类酶为（ B）A. 同工酶B. 同尾酶C. 同裂酶D. 同位酶17. pBR322 质粒作为基因克隆载体应有下列何种调控元件（ ABD ）A.AmPr 和 Tet r B.ori 复制子C.LacZ 标记 D. 多克隆位点18. 入噬菌体外包装目的基因片段

7、的大小应为（D ）A.小于入噬菌体 DNA勺50% B. 小于噬菌体 DNA勺75%C.大于入噬菌体 DNA勺105% D. 为入噬菌体 DNA的75%- 105%19. DNA连接酶的功能是（AB ）A. 恢复3 -OH 与 5 -P 之间的磷酸二酯键B. 恢复缺口C. 恢复裂口D.可使平末端与粘性末端连接20. PUC质粒作为基因克隆载体应有下列何种调控元件（A B C D ）A.AmPrB.ori 复制子C.LacZ 标记D. 多克隆位点21. 下列属于获取目的基因的方法的是（ D ）利用mRNAE转录形成从基因组文库中提取从受体细胞中提取利用PCR技术利用DNA专录人工合成A. B.

8、C. D. 22. 的质粒分子带有一个抗菌素抗性基因，该抗性基因在基因工程中的主要作用是BA.提高受体细胞在自然环境中的耐药性B.有利于对目的基因是否导入进行检测C.增加质粒分子的分子量D.便于与外源基因连接23. 有关基因工程的叙述正确的是DA.限制酶只在获得目的基因时才用B.重组质粒的形成是在细胞内完成的C.质粒都可作为运载体D.蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料24. 哪项不是基因表达载体的组成部分（ B ）A. 启动子B.终止密码C. 标记基因D.目的基因25. 下列哪项不是将目的基因导入植物细胞的方法（ B ）A 基因枪法B显微注射法C. 农杆菌转化法D 花粉管通道法26. 以下说

9、法正确的是（ C ）A、所有的限制酶只能识别一种特定的核甘酸序列以 质粒是基因工程中唯一的运载体C运载体必须具备的条件之一是：具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接D基因控制的性状都能在后代表现出来27. 不属于质粒被选为基因运载体的理由是（D ）A能复制以有多个限制酶切点C具有标记基因D它是环状DNA28. 有关基因工程的叙述中，错误的是（A ）A、DNAd1接酶将黏性末端的碱基对连接起来8、 限制性内切酶用于目的基因的获得C目的基因须由运载体导入受体细胞D、人工合成目的基因不用限制性内切酶29. 有关基因工程的叙述正确的是（ D ）A、限制酶只在获得目的基因时才用以重组质粒的形成在细胞内完

10、成C质粒都可作为运载体D蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料30. 基因工程是在 DNA分子水平上进行设计施工的。在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是（ C ）A人工合成目的基因以目的基因与运载体结合C将目的基因导入受体细胞D目的基因的检测和表达31. 下列获取目的基因的方法中需要模板链是（B ）A. 从基因文库中获取目的基因B.利用PCRa术扩增目的基因C. 反转录法D.通过DN蛤成仪利用化学方法人工合成32. 下列有关基因工程的叙述中，错误的是ACA、DNA1接酶将粘性末端的碱基对连接起来日基因探针是指用放射性同位素或荧光分子等标记的DN肪子C基因治疗主要是对有缺陷的进行修复

11、D蛋白质中氨基酸序列可为合成目的基因提供资料二、是非判断题1 .DNA连接酶是一种能催化二条 DNA链之间形成磷酸二酯键的酶，因此该酶既可修复基因序列中的缺口，也可修复裂口。（ X ）2 .质粒提取后，在琼脂糖电泳出现一条带时说明质粒提取纯度高，当为三条带时为纯度不高。（X ）3、入噬菌体的插入型载体只有一个单一限制酶切点，替换型载体有2个成对的限制性酶切点。（，）4、原核细胞和真核细胞转录的mRN的具有与rRNA结合的SD序列，以利于进行有效的转录。（X ）5、cDNA文库是包含有细胞中所有 mRNA因此该文库能包含细胞所有的遗传信息。（X ）1 .基因工程可改变生物或其分子的遗传物质（，）

12、2 .通过限制性核酸内切酶和DNA连接酶等作用，在体外将不同来源的DNA片断重新组合成新的DNA分子（重组DNA）。（V ）3 .基因的“剪刀”是限制性内切酶（，）4 .基因的“针线”是DNA连接酶（V ）5 .基因的“运输工具” 是载体（，）6 .基因的“剪刀”是 DNA连接酶（X ）7 .基因的“针线”是限制性内切酶（X ）8 .将目的基因与载体连接过程是由限制性内切酶来完成。（X ）9 .将目的基因与载体连接过程是由DNA连接酶来完成。（，）10 .通过基因工程菌可生产胰岛素、人生长激素、干扰素等蛋白质药物。（，）三、填空题1、 在LacI标记基因插入外源基因，经 IPTG诱导，在X-g

13、al培养基中显白 色，为 阳性 克隆,未插入基因的克隆显蓝 色,为 阴性克隆。2、理想的质粒克隆载体应具备以下基本条件，如能自主复制、一种或多种限制酶的酶切位点、筛选标记、分子量小易拷贝。3、点突变的基因系列在碱基替换中，若为一个喋吟换成另一个喋吟或一个喀咤换成另一个喀咤者称转换,若一个喋吟换成一个嘴咤或一个喀咤换成一个喋吟者称换。4、基因表达的四大表达系统分别为大肠杆菌、酵母菌、哺乳动物细胞、昆虫细胞。5、基因与载体的平末端连接方法有哪些T4连接酶连接法。末端核甘酸转移酶加同聚物尾巴再用 DNA!接酶进行连接；化学合成衔接物后连接DN6子。5、目的基因与载体连接方式有哪些1） 粘性末端连接；

14、2）平头末端连接；3） 人工接头法；4）同源多聚尾连接法6、如何利用抗性标记基因筛选阳性克隆？抗性标记筛选；抗性基因插入失活筛选；LacZ基因失活筛选。7、核酸操作的基本技术有哪些核酸提取与纯化核酸的检测与保存核酸的凝胶电泳 核酸分子杂交8、基因工程所需的基本条件1、用于核酸操作的工具酶；2、用于基因克隆的载体；3、用于基因转移的受体菌或细胞。9、Klenow酶在 有dNTP 情况下，呈现 DN咪合酶活性，在 没有dNTP 情况下呈现 外切酶活性。10、利用PCRa术扩增目的基因 概念：PCR全称为 聚合酶链式反应 ，是一项 在生物 体外 复制特定DNA片段的核酸合成四一原理:"DN

15、Am制条件：已知基因的核甘酸序列 四种脱氧核甘酸 一对引物 、DNAM合酶.前提条件:方式：以 指数方式扩增，即 2n- (n为扩增循环的次数)结果使目而基因的片段在短时间内成百万而所增11. PC叱术扩增过程a、DNA变性(90 C -95 C):双链 DNA板在热作用下，氢键断裂,形成单链DNAb、复性(55 C -60 C):系统温度降低，引物与DNA莫板结合，形成局部 双链 。c、延伸(70 C -75 C)：在Taq酶的作用下，从 引物的5'端一 3'端延伸，合成与模板互 补的 DNAB1。DNA的四种核酸的碱基分别是：胸腺喀咤、胞喀咤、腺喋吟和鸟瞟吟。25.在基因工

16、程中应用的酶类统称为工具酶。四、名词解释1 .同尾酶 某些限制性内切酶识别的碱基顺序不同，但酶切后产生同样粘性末端的两种酶2 .柯斯(C0S)质粒 带有入噬菌体的 CO四点和整个pBR322的DNAB序的大肠杆菌质粒。3 .SD序列 为mRN/在细菌核糖体上产生有效结合和转译的特殊序列。4 .质粒不亲和性：在没有选择压力的情况下，两种不同质粒不能够在同一宿主细胞系中稳定地共存的现象。5 .CDNA文库：是指某生物某一发育时期所转录形成的cDNA片段与某种载体连接而成的克隆的集合。6 .穿梭质粒载体：指一类由人工构建的具有两种不同复制起点的选择标记，因而可在两种不同宿主细胞中存活和复制的质粒载体

17、。7 .基因(gene)具有特定功能的 DNA片段，这些片段有的编码蛋白质，有的编码rRNA tRNA,有的则是与复制、转录调控有关的DNA序列。8 .基因重组：由于不同DNA链的断裂和连接而产生 DNA片段的交换和重新组合，形成新DNA 分子的过程。9 .基因工程又叫做基因拼接技术或DNA重组技术。是在生物体外，通过对DNA子进行人工“剪切”和“拼接”，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞内进行无性繁殖，使重组基因在受体细胞内表达，产生出人类所需要的新的生物类型和生物产品10 .目的基因(objective gene) :又叫靶基因(target gene),是指根据基因工程的目

18、的 ，设 计的所需要的某些 DN6子片段，它含有一种或几种遗传信息的全套密码(code)11 . 基因表达基因表达（gene expression）是指细胞在生命过程中，把储存在DNA顺序中遗传信息经过转录和翻译 , 转变成具有生物活性的蛋白质分子. 生物体内的各种功能蛋白质和酶都是同相应的结构基因编码的.12 . 双功能抗体将识别效应细胞的抗体和识别靶细胞的抗体联结在一起, 制成双功能性抗体, 称为双特异性抗体 . 如由识别肿瘤抗原的抗体和识别细胞毒性免疫效应细胞（ CTL 细胞 , NK 细胞 , LAK 细胞 ）表面分子的抗体（ CD3 抗体或 CD16 抗体 ）制成的双特异性抗体, 有

19、利于免疫效应细胞发挥抗肿瘤作用.五 问答题1. 真核细胞基因组中的基因常有内含子存在，能否在原核细胞中表达？能，为什么？不能，为什么？不能，因为原核细胞缺乏对真核基因中内含子的剪接功能和转录后加工系统。原核生物必须有相应的原核 RNA聚合酶可识别原核细胞的启动子,以催化RNA勺合成。基因表达是以操纵子为单位，操纵子由数个相关的结构基因和调控功能的部位组成的。因此在构建原核表达载体时必须有1 个强的原核启动子及其两侧的调控序列。2. 质粒单酶切点的基因连接如何降低本底和防止自我环化和提高连接效率？目的基因片断与载体由相同的单一限制性核酸内切酶（如EcoRI） 消化酶切后, 两者的两端均具有相同的

20、粘性末端, 称为单酶切点的粘性末端, 又称全同源性粘性末端 高背景载体经单一限制性核酸内切酶切割后, 载体分子易于自我环化, 既不利于目的基因的重组连接, 大大降低阳性克隆效率, 又可使非重组性载体造成高背景。为了防止载体的自我环化，通常用碱性磷酸酶去除载体粘性末端的5' -P以抑制DNA勺自我环化。在连接反应中,具有5' -P,的目的基因DNM断可有效地与去磷酸化质粒DNA载体通过粘性末端发生互补连接，尽管产生的重组 DNA子于连接点含有两个缺口的开环分子，尽管在转化时其转化效率高于线性低于闭和环, 但转化大肠杆菌后, 在菌体内其缺口可获得修复。 双向插入经单一限制核酸内切酶

21、（如 EcoRI） 切割的目的基因和载体, 因二者的粘性末端是相同的 , 因此在连接反应中, 目的基因可发生双向插入, 载体对目的基因表达是有方向的, 而目的基因可双向与之相连, 这种连接若以克隆目的基因片段为目的没有影响, 若以表达为目的 , 我们就要对插入的片段进行方向鉴定, 因目的基因由起始密码子向终止密码子方向表达是定向转录的, 一旦启动子与目的基因编码顺序方向相反就不能正确转录目的基因的mRNA若构建表达DNA重组体选用双酶切切割目的基因和载体，可使目的基因与载体的连接发生定向连接重组, 以便定向克隆。3. 将外源性DNA克隆到-LacZ区段的插入型噬菌体上后，如何筛选重组噬菌体？3

22、-半乳糖甘酶失活的插入型载体，在其基因组中含有一个大肠杆菌的lacZ区段，此区段编码有3 -半乳糖甘酶基因lacZ ,在诱导物IPTG （异丙基硫代半乳糖甘）存在下，3-半乳糖昔酶能作用 X-gal（5-澳-4-氯3- 口引味-3 -D-半乳糖甘）形成蓝色化合物（5-澳-4-氯靛 蓝） 。这样由这种载体感染的大肠杆菌lac- 指示菌（lac 基因缺陷菌），涂布在补加有IPTG和X-gal的培养基平板上，会形成蓝色的噬斑，但若在 lacZ区段上插入外源 DNA片段，就 会阻断3 -半乳糖甘酶基因lacZ的编码序列，这种入重组体感染的lac-指示菌由于不能合成3 -半乳糖甘酶，只能形成无色的噬菌斑

23、，相反未发生外源基因插入则出现蓝色噬菌斑， 以利筛选。4. 基因与载体的平末端连接方法有哪些？简要或图示说明均可。（1）T,DNAl接酶法连接平末端DNA分子的方法有2种，一种是直接用T4连接酶连接，另一种是先用末端核甘酸转移酶给平末端 DNA分子加上同聚物尾巴之后再用DNA!接酶进彳T连接。T4DNA连接酶同一般的大肠杆菌 DNA连接酶不同。T4DNA连接酶除了能够封闭具有 3' -OH和5' -P末端 的双链DNA勺缺口之外，在存在AT可口加入高浓度酶的条件下,它还能够连接具有完全配对碱 基的平末端DNA分子，但其连接效率比粘性端要低的多。（ 2） 同聚物加尾法运用末端核甘

24、酰转移酶，能够将核甘酸（通过脱氧核甘三磷酸前体）加到DN酚子单链延伸 末端的3 -OH 基因上 , 它并不需要模板链的存在, 它一个一个加上核苷酸, 构成由核苷酸组成的尾巴, 长度可达100 个核苷酸。5. 如何从所克隆到基因重组体中鉴定目的基因的存在和正确性？根据插入基因的遗传性状进行筛选只有当已知需克隆基因所编码蛋白质的功能, 且该蛋白质又为细菌的生命活动所必需时，即可用该方法筛选。如：已知蛋白质中的亮氨酸（Leu）为Leu营养缺陷菌所必需，当外源目的基因可表达亮氨酸, 将该基因的重组子转入Leu 缺陷菌中, 在不含亮氨酸的基本培养基平板中, 只有重组子表达的亮氨酸才能被Leu 缺陷菌所利

25、用而能生长繁殖, 形成菌落。 因而能生长的细菌集落，均为阳性的重组子克隆，而无该重组子的Leu 缺陷菌在不含亮氨酸的平板上则不能生长，不能形成菌落。根据重组子的结构特征筛选（1） . 重组子大小鉴别筛选重组子中因装有一段较大分子量的外源基因DNA, 因此其分子量明显比原载体大得多,因此可从平板上挑取菌落分别提取重组载体（如质粒重组子）和原载体（质粒），无需用限制性内切酶消化，直接进行凝胶电泳，携带外源性目的基因的重组子质粒因分子量大，电泳迁移率较小，其电泳条带在后，而原载体质粒因分子量较小，电泳迁移率较大，其电泳条带在前。 通过比较可初步判断重组子中是否插入外源基因片段。本方法适用于插入片段较

26、大的重组子的初步筛选。（2） . 酶切鉴定对于筛选出的具有重组子的菌株，应经小量培养后，再分别提取原载体或重组体载体（重组质粒或重组噬菌体DNA） ，根据已知重组时外源基因两端的酶切位点，分别用相应的两种内切酶进行酶解，经琼脂糖电泳后，原载体因无外源性目的基因，切开后变成线性，电泳呈一条带， 若载体上有外源性目的基因插入，切开后电泳出现两条带：一条为载体质粒线性条带，一条为释放出的插入基因片断的小分子条带，这样就可以看出载体中是否有插入的目的基因片断，以及由DNA marker 条带对比分析可得知插入基因片段的大小（3） . 目的基因序列测定6. 基因工程诞生的理论基础是什么？是现代分子生物学

27、领域理论上的三大发现和技术上的三大发明。理论上的三大发现：证实了 DNA遗传物质揭示了 DNA子的双螺旋结构模型和半保留复制机理遗传密码的破译和遗传信息传递方式的确定 技术上的三大发明：限制核酸内切酶的发现与 DN砌割DNA连接酶的发现与DNA片段的连接基因工程载体的研究与应用7. 如何有效地提高外源基因的表达效率？提高启动子强度缩短启动子同克隆基因间距离高效的翻译起始序列高效的转录终止区提高质粒拷贝数及稳定性用以下方法提高翻译水平：调整 SD序列与AUG司的距离用点突变的方法改变某些碱基增加mRNA勺稳定性的减轻细胞的代谢负荷：诱导表达表达载体的诱导复制提高表达蛋白的稳定性，防止其降解：克隆

28、一段原核序列，表达融合蛋白采用某种突变菌株表达分泌蛋白质8. 大肠杆菌作为基因工程受体菌的优缺点是什么？优点：大肠杆菌培养方便、操作简单、成本低廉，基础生物学、分子遗传学等方面的背景知识清楚，对其基因表达调控的分子机理也比较了解，而且历经二十年的基因工程实践，大肠杆菌已发展成为一种安全的基因工程实验体系，有多种适用的寄主菌株和载体系列，大肠杆菌易于进行工业化批量生产。缺点：在通常情况下，细菌的RNA聚合酶不能识别真核的启动子；许多真核基因的蛋白质产物需要经过翻译后的加工修饰，如正确的折叠和组装，而细菌中通常并没有这样的修饰机制， 从而可能导致真核基因在大肠杆菌中的翻译产物无法产生有活性的蛋白；

29、外源真核基因所表达的蛋白质分子往往能够被细菌的蛋白酶识别，并被当做“异已分子”降解掉。9. 什么是a -互补筛选？质粒载体具有3 -半乳糖甘酶基因（lacZ）,当外源DNA插入到它的lacZ,可造成表达 后的3 -半乳糖甘酶失活，利用这一点就可以通过大肠杆菌转化子菌落在添加有X-gal-IPTG培养基中的颜色变化鉴别出重组子和非重组子。有些大肠杆菌上带有lac Z 基因的部分编码序列， 质粒载体中含有别一部分编码序列，当质粒转入载体后，可形成具有酶活性的蛋白质。这种lac Z基因上缺失了一部分编码序列的突变体与带有这一部分编码序列的突变体之间实 现互补的现象叫a互补。10. 真核细胞基因结构和

30、原核细胞的有何相同点和不同点？1）相同点：都是由能够编码蛋白质的编码区和具有调控作用的非编码区组成。2）不同点：原核细胞基因的编码区是连续的，真核细胞基因的编码区是间隔的，不连续的。11. 基因克隆常用的载体必须具备的基本条件？1 .具有独立复制能力2 .具备多个限制酶的识别位点（多克隆位点）3 .具有遗传表型或筛选标记4 .有足够的容量以容纳外源DNM段5 .可导入受体细胞。复习题 2 基因重组与基因工程一、 A 型题1 .实验室内常用的连接外源性DNA 和载体 DNA 的酶是：（A ）A . DNA连接酶 B . DNA聚合酶IC. DNA聚合酶IID. DNA聚合酶出 E.反转录酶2 .

31、用来鉴定DNA 的技术是：（B ）A Northern 印迹B Southern 印迹C Western 印迹D.亲和层析E.离子交换层析3 .下列那项不是重组DNA 技术中常用的工具酶：（D ）A .限制性核酸内切酶 B. DNA连接酶C. DNA聚合酶ID. RNA聚合酶E.反转录酶4 .关于限制性核酸内切酶的叙述，下列哪项是错误的？（ E ）A.限制性核酸内切酶分为三类，用于基因工程的为n酶B 限制性核酸内切酶切割后可产生粘性末端或平端C.识别的核甘酸序列个数可以是6个或8个D. 识别的序列一般具有回文结构E.识别的DN A为单链5 .关于基因工程的叙述，下列哪项是错误的？（ B ）A

32、基因工程也称基因克隆B 只有质粒DNA 可作为载体C.重组体DNA转化或转染宿主细胞D 需获得目的基因E 需对重组DN A 进行纯化、筛选6 .有关质粒的叙述，下列哪项是错误的？（E ）A 小型环状双链DNA 分子B.可小到23Kb大到数百个 KbC 能在宿主细胞中独立自主地进行复制D 常含有耐药基因E 只有一种限制性核酸内切酶切口7下列哪项不是重组DN A 的连接方式？（C ）A.粘性末端与粘性末端的连接B.平端与平端的连接C. 粘性末端与平端的连接D 人工接头连接E 同聚物加尾连接8 DNA 克隆不包括下列哪项步骤？（E ）A 选择一个适合的载体B 限制性核酸内切酶在特异位点裂解质粒和目的

33、基因C.用连接酶连接载体 DNA和目的DNA ,形成重组体D 用载体的相应抗生素抗性筛选含重组体的细菌E.重组体用融合法导入细胞9 基因重组是指DNA 分子的：（A ）A.共价连接B.氢键连接C.离子键连接D.交换 E.退火10 在分子生物学中，重组DNA 又称为：（D ）A.酶工程B.蛋白质工程C.细胞工程D.基因工程 E.DNA工程11 基因工程中，不常用到的酶是（E ）A 限制性核酸内切酶B DNA 聚合酶C DNA 连接酶D 逆转录酶E DNA 解酶12 能识别DNA 的特异序列，并在识别位点或其周围切割双链DNA 的一类酶称为：（ B ）A. DNA内切酶B.限制性内切核酸酶C.非限

34、制性内切核酸酶D.限制性外切核酸酶E.非限制性外切核酸酶13 cDNA 是指：（A ）A.在体外经反转录合成的与RNA 互补的DNAB 在体外经反转录合成的与DNA 互补的DNAC.在体外经反转录合成的与RNA 互补的RNAD 在体内经反转录合成的与RNA 互补的RNAE.在体内经反转录合成的与RNA 互补的DNA14质粒的分子结构是：（A )A ,环状双链 DNA B.环状单链 DNA C.环状单链 RNAD,线状双链 DNA E.线状单链 DNA14 聚合酶链式反应常常缩写为：（E ）A PRCB PERC PDR D BCRE PCR15 用于PCR 反应的酶是：（E ）A . DNA连

35、接酶 B.碱性磷酸酶C.逆转录酶D 限制性内切核酸E Taq DNA 聚合酶16 基因工程中使目的基因与载体拼接的酶是：（C ）A DNA 聚合酶B RNA 聚合酶C DNA 连接酶D. RNA连接酶 E.限制性核酸内切酶18. a互补筛选属于：（C ）A.抗药性标志筛选B.酶联免疫筛选C.标志补救筛选D.原位杂交筛选 E.免疫化学筛选19确切地讲，cDNA 文库包含：（E ）A 一个物种的全部基因信息B 一个物种的全部RNA 信息C 一个生物体组织或细胞的全部基因信息D 一个生物体组织或细胞的全部RNA 信息E 一个生物体组织或细胞所表达mRNA 信息20下烈 描述最能确切表达质粒DNA 作

36、为克隆载体特性的是：（ D ）A.小型环状双链 DNA分子B.携带有某些耐药基因C.在细胞分裂时恒定地传递给子代细胞D.具有自我复制能力E.获得目的基因21.基因工程中常用限制性内切酶H的识另序列，正确的说法是：（E ）1 . 聚胞苷酸B.聚腺甘酸C.6 或 8个任意核苷酸D.4 或 6 个任意核苷酸E 具有回文结构22基因工程的基本过程不包含：（E ）A.DNA 重组体的形成及转化B.限制酶的切割C.载体及目的基因的分离D.重组体的筛选与鉴定E.重组体的序列分析23 .有关理想质粒载体的特征，正确的是：（B ）A. 其复制受宿主控制B.含有多种限制性内切酶的单一切点C.含有同一限制酶的多个切

37、点D 为线性单链DNAE.不含耐药基因24 .下列那个物质一般不用作基因工程的载体：（C ）A.噬菌体B 质粒C.大肠杆菌基因组D 反转录病毒DNAE.人工酵母染色体25 .基因工程的操作程序可简单的概括为：（E ）A.将重组体导入宿主细胞并筛选B 限制酶的应用C.将载体和目的基因接合成重组体D 目的基因和载体的分离提纯与鉴定E.分、切、接、转、筛26 .基因表达的多级调控不包括：（A ）A DNA 复制B 转录起始C.转录后加工D. 翻译起始E. 翻译后加工27.下列基因工程中的目的基因的来源，最不常用的是：（C ）A. 人工合成DNAB 从mRNA 合成 cDNAC. 从真核生物染色体DN

38、A 中直接分离D 从基因文库中获取E.从细菌基因组DNA中直接分离28 . n型限制性内切酶是：（ B ）A.有内切酶和甲基化酶活性B.仅有内切酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供C.有外切酶和甲基化酶活性D 限制性识别非甲基化的核苷酸序列E.仅有外切酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供29 .基因工程操作应用的许多载体质粒都有抗生素的抗性基因，这是为了便于：（D ）A 外源基因插入质粒B.宿主菌的生物繁殖C.质粒的转化D 带有目的基因的宿主菌的筛选E.目的基因的表达30 .有关目的基因与载体连接的叙述错误的是：（E ）A. 可以同一限制酶切割产生粘性末端连接B.平末端切口可采用 崖接法”C.

39、平末端切口可直接连接D 均需DNA 连接酶参与E.不同限制型内切酶切割不能连接B.酶切，转化，连接，筛选，验证 D.验证，酶切，连接，筛选，转化1 基因工程的单元操作顺序是（AA.酶切，连接，转化，筛选，验证C.连接，转化，筛选，验证，酶切E.酶切，连接，筛选，转化，验证2下列五个DNA 片段中含有回文结构的是(A. GAAACTGCTTTGACC. GAAACTGGTCAAAGE. GAAACTGCAGAAAGD、 E ）GAAACTGGAAACTGGAAACTGCAGTTTC3 T 4 -DNA 连接酶是通过形成磷酸二酯键将两段DNA 片段连接在一起，其底物的关键基D )A . 2'

40、; -OH 和 5' -PC . 3' -OH 和 2' -PE . 5' -OH 和 3' -P4噬菌体l-DNA 体外包装的上下限是天然l-DNA 长度的（B . 2' -OH 和 3' -PD . 3' -OH 和 5' -PD )25 - 50 %75 - 100 %50 - 100 %D. 75 - 105 %100 - 125 %8分子杂交的化学原理是形成（E ）A.共价键C . 疏水键键E.氢键9促红细胞生长素（EPO ）基因能在大肠杆菌中表达，但却不能用大肠杆菌的基因工程菌生产人的促红细胞生长素，这是因为（

41、E ）A.人的促红细胞生长素对大肠杆菌有毒性作用B.人的促红细胞生长素基因在大肠杆菌中极不稳定C .大肠杆菌内毒素与人的促红细胞生长素特异性结合并使其灭活D.人的促红细胞生长素对大肠杆菌蛋白水解酶极为敏感E .大肠杆菌不能使人的促红细胞生长素糖基化10鸟枪法克隆目的基因的战略适用于（A ）A.原核细菌B.酵母菌C . 丝状真菌D . 植物E.人类11. cDNA第一链合成所需的引物是（ D ）Poly A Poly GTE.发夹结构12. cDNA法获得目的基因的优点是（ BA.成功率高C .操作简便泌E.能纠正密码子的偏爱性13人工合成DNA 的单元操作包括（EI 去保护II 偶联 III

42、封端 IV 氧化A. I + IIB. II + IVC. I + II + IIID, II + III + IV二、 B 型题A.抗药性筛选D 免疫学方法B.分子杂交筛选E 体外翻译C1 用于鉴定质粒是否转化的一般方法是：B . Poly C D . Poly)B.不含内含子D.表达产物可以分)E. I + II + III + IVRNA 反转录( A )2用于鉴定转化子细胞是否含有目的基因的常用方法是：（ B ）3利用目的基因表达产物的特异性抗体来筛选含有目的基因的转化子细胞价方法是：A.限制性核酸内切酶 B. DNA连接酶 C.反转录酶D. Taq DNA聚合酶E.碱性磷酸酶4 .识

43、别DNA 回文结构并对其双链进行切割的是：（A ）5 .用于PCR 反应的酶是：（ D ）6 .将目的基因与载体进行拼接的酶是：（B ）A.转染 B.转化 C.感染 D.转导 E.转位7以质粒为载体，细菌为宿主的导入方式是：（ B ）8以噬菌体为载体，细菌为宿主的导入方式是：（ D ）9以病毒为载体，哺乳动物细胞为宿主的导入方式是：（C ）A.94 B.85C.50D.72E.10010 .PCR 变性温度一般为：（A）11 .PCR 退火温度一般为：（C ）12 .PCR 延伸温度一般为：（D）A分 B切 C接 D转 E筛13获取目的基因属于基因工程中的步骤是（A ）14 .DNA 连接酶用

44、于基因工程中的步骤是（C ）15 .DNA 重组子转化宿主细胞的步骤是（D ）16 .限制性内切酶切割目的基因和载体的步骤是（B ）17 .对含有DNA 重组体的宿主细胞进行筛选的步骤是（E ）C 型题A、含有该生物的全部基因B 、含有该生物的结构基因C、两者都是D、两者都不是1、基因组文库（2、 cDNA 文库（A、需要逆转录酶C、两者都是A ）B ）B 、需要限制性内切酶D 、两者都不是3、建立 cDNA 文库 （ C ）4、建立基因组文库（B ）A、连接酶B、逆转录酶5、建立cDNA 文库需要（C6、建立基因组文库需要（四、 X 型题C、两者都是D、两者都不是）A ）1.可用于基因工程载

45、体的DNA 分子有：（ BDE ）A.染色体DNA D,噬菌体DNAB.病毒DNAE.质粒DNAC.细菌DNA2.重组DNA技术的基本过程包括：（ACDEA .目的基因的获取D.目的基因与载体的连接B. PCR反应C.克隆载体的构建E.重组体分子导入受体菌3.基因克隆又称为:A . D.4组成 A .D.重组DNARNA克隆（AC ）B,重组 RNAE.蛋白质复制C. DNA克隆PCR反应体系的物质包括：（BD ）RNA引物DNA模板5 .对于重组体的筛选, A .免疫化学法D .补救标志筛选6 .对于重组体的筛选, A.免疫化学法D .补救标志筛选B . Taq DNA聚合酶E. ddNTP

46、属于直接选择法的是：B.原位杂交法C. RNA聚合酶BCD )C. Southern 印迹E.抗药性标志筛选 属于非直接选择法的是：7.限制性核酸内切酶切割A . 5 '粘性末端D,单链缺口B.原位杂交法E.酶联免疫筛选DNA时可产生：B. 3'粘性末端E.粘性末端(AE )C. Southern 印迹ABCE )C.平末端8.基因工程中目的基因的来源有：（ABCDEA .化学合成D.基因组文库B. PCR合成)C. cDNA文库E.组织细胞中染色体 DNA直接提取9.基因工程中外源性基因又称为：（ABDA.目的基因D . target DNAB.目的 DNAE.外源RNA)C

47、.目的RNA10.重组DNA技术中常用的工具酶有：（ABCDEA .限制性核酸内切酶B. DNA聚合酶ID.反转录酶E.末端转移酶)C. DNA连接酶11 .作为基因工程的载体必须具备的条件是:A.能独立自主复制B.易转化D.具有限制性内切核酸酶的位点 五、填空题C.E.（ABCD ）易检测（含有抗药性基因等） 易提取获得1.基因工程的一个理想的载体必须具备的条件有至少有一个复制起点点、具备转化的功能、遗传标记基因、具有较高的装载能力2 .基因工程常用的载体 DNA分子有3 . 一个完整的DNA克隆过程应包括与载体的拼接、重组体导入 4 .目的基因获取的途径或来源有 、和.的获取、筛选与鉴定出

48、O的选择与构建、5 .基因工程过程中重组体直接筛选法的方式有6 .当细胞与细胞或细菌通过菌毛相互接触时， 菌）转移到另一细胞（细菌），这种类型的7 .重组DNA技术中常用的工具酶有、 O就可以从一个细胞（细DNA转移称为作用。8.Klenow没的活性有:5'3'聚合酶活性；3'5'外切酶活性9.人工化学合成 DNA新形成的核甘酸的合成方向是-OH; 3 ' 末端是-OH35，产成的 DNA5 '末端是10.进彳T PCR扩增DNA 时，反应体系应加入模板 DNA , Taq酶、一对引物、 d NTP和缓冲5.现代生物工程主要包括基因工程,酶工程,

49、 细胞 工程, 发酵 工程。6 .使DNA的结构分析问题从根本上得到了解决的两项关键性工程技术分别是DNA分子的体外切割与连接技术和 DNA分子的核酸序列分析技术。7 .基因工程的工具酶主要有限制性核酸内切酶和DNA连接酶。8 .基因克隆载体主要有质粒、噬菌体、病毒三大类。9 .基因克隆载体应具备的条件是有克隆位点（外源DNA看入点），能携带外源 DNAS入受体细胞， 能自主复制；具有选择标记，便于重组体的筛选和鉴定;10 .将外源性重组 DNA导入受体细胞的途径有转化（或转染）、杂交、转导、细胞融合、显微注射等方式。11 .目的基因导入受体细胞成功的关键是：选用合适的克隆载体、选用合适的受体

50、细胞、选用合适的基因转移方法。12 .基因克隆受体细胞有原核细胞和真核细胞。13 .克隆基因的进一步鉴定常采用限制性内切酶分析、分子杂交、PCRT增、DNA侧序等方法。18.限制性酶的发现标志着 DNAt组时代的开始。（V ）19.1982年世界上第一个基因重组药物一一人胰岛素在美国问世产生了巨大的社会效益和经济效益。（V ）20 .根据基因操作的目的不同，可以将基因治疗分为基因置换治疗和基因增强治疗。（V ）21 .根据治疗对象不同可将基因治疗分为性细胞基因治疗和体细胞基因治疗。（V ）22.1982年世界上第一个基因重组药物一一人干扰素在美国问世产生了巨大的社会效益和经济效益。（X ）23

51、 .根据基因操作的目的不同，可以将基因治疗分为性细胞基因治疗和体细胞基因治疗。 （X ）24 .单克隆抗体技术是动物细胞工程技术。（,）25 .用同一种限制酶切割含有目的基因的外源DN府口载体DNA产生的DNA片段的粘性末端是相同的（V ）26 .用同一种限制酶切割含有目的基因的外源DN府口载体DNA产生不同的DNM段的粘性末端（X ）27 .基因工程、细胞工程、发酵工程和酶工程它们之间是相互关联和交叉渗透（V ）六、名词解释1 .回文结构（palindrome）2 .目的 DNA （target DNA）3 . -S卜（alpha complementatlon ）4 .基因组 DNA 文库

52、（genomic DNA library ）5 .cDNA 文库（cDNA library ）6 .DNA 克隆（DNA cloning七、简答题1 .什么叫基因克隆？简述基因克隆的步骤。2 .限制性内切核酸酶有哪些特点？3 .简述重组DNA技术中获取目的基因的途径。4 .已知有一 mRNA分子，你怎样才能使它翻译出相应的蛋白质？简述其过程。5 .作为基因工程的载体必须具备哪些条件？八、论述题1 .简述a互补筛选重组体质粒细菌的原理。2 .基因工程中重组体筛选的方法有哪些？1 .何谓基因工程？简述人类基因组计划在医药方面的意义和应用。答：基因工程一一在体外将不同生物的基因（ DNA和载体（质粒、噬菌体、病毒）DNA连接， 构成遗传物质的新组合（重组DNA ,然后转入微生物或细胞内（寄主细胞进行克隆），使转入的基因在宿主细胞内表达产生所需要的蛋白质而能持续稳定地繁殖，并通过工程化为人类提供有用产品和服务的技术。人类基因组计划在医药方面的意义有基因治疗、基因制药、基因芯片；基因工程在医药科学中的应用：（ 1 ）发现疾病基因（ 2）发展生物制药蛋白质