生化实验报告

1、 果蔬营养含量的测定学院：农学院专业：植物保护班级：植保1001姓名：XXX学号：XXXXXXX同组人：XXX摘要： 果蔬中含有大量的营养物质，如蛋白质，还原糖，维生素C含量等等，通过对其进行营养测定，可以了解到这些营养物质的含量。3,5-二硝基水杨酸(DNS)比色法是还原糖测定的一种常用方法。该方法具有简便、快速、灵敏度高等特点。秦永惠等1采用 2 ,6-D二氯靛酚钠动力学分光光度法测定了西红柿及草莓中的抗坏血酸 ,提出用 2 ,6-D二氯靛酚钠作氧化剂 ,与抗坏血酸混合 ,在固定时间间隔于 611 nm 处测得吸光度 A 值的变化(A/t)与维生素 C含量成线性关系. 线性范围为 0 mg

2、/L12 mg/L ,在样品处理时采用偏磷酸作为提取剂 ,以减缓 Vc 被氧化的速度. 该法灵敏度高 ,操作简便 ,试剂易得 ,容易推广。本文介绍了用这几种方法分别对青椒、马铃薯的维生素C、还原糖以及淀粉酶活力进行了实验，得出了相关数据。关键词：淀粉酶活力 还原糖 维生素C原理：淀粉酶的活力大小和产生的还原糖的量成正比。用比色法测定还原糖（麦芽糖）的量，以单位重量样品在一定时间内生成的麦芽糖的量表示酶活力。由于两种淀粉酶特性不同，-淀粉酶不耐酸，在pH3.6以下迅速钝化，-淀粉酶不耐热，在7015min钝化。根据它们的这种特性，在测定活力时钝化其中之一，就可测出另一种淀粉酶的活力。在非钝化条件

3、下测定淀粉酶总活力。淀粉酶水解淀粉产物遇碘呈现不同的颜色、温度、pH或激活剂，抑制剂对淀粉酶活性影响程度不同，故可由酶反应产物遇碘呈现的颜色判断上述诸因素对酶活性影响。在温度低和较高时，淀粉酶活性丧失，而在40左右酶活性很高。过酸或过碱环境使酶失活，在pH5.6（接近中性）淀粉酶活性较高。酶抑制剂使酶活性降低甚至丧失，酶激活剂使酶活性升高。 天然维生素C分还原型和脱氧化型两种，还原型抗坏血酸在中性和微酸性的条件下能把蓝色染料2 ,6-D二氯靛酚钠（2.6-D)还原成无色化合物，而本身氯化脱氢抗坏血酸。2，6-D钠盐溶于水，其碱性或中性水溶液呈蓝色，在酸性溶液呈桃红色，这个变化为滴定种点。 DN

4、S法测定原理为3，5二硝基水杨酸与多糖水解产物还原糖共热后生成棕红色的氨基化合物(3一氨基-5-硝基水杨酸)，在一定的范围内，还原糖的含量和反应液颜色成比例关系，利用比色法可测定多糖的含量。DNS比色法中色素等还原性物质可与DNS显色剂显色，采用水解前测定值校正水解后测定值的方法，简便、有效地排除了色素等杂质的干扰。 一 材料与方法1.1 材料与仪器萌发的小麦种子；标准麦芽糖溶液，3,5-二硝基水杨酸；硫酸铜溶液、氯化钠溶液、硫酸钠溶液、淀粉溶液、碘液、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液电子天平、离心机、离心管、研钵、容量瓶50ml*1 100ml*2、恒温水浴、刻度试管、刻度吸管、分光光度计、冰箱1.

5、2 方法淀粉酶活力的测定1麦芽糖标准曲线的测定绘制标准曲线，麦芽糖含量（mg）横坐标，光密度纵坐标2淀粉酶液的制备称2g萌发的小麦种子于研钵，加少量石英砂和2ml蒸馏水研磨匀浆，转移至离心管中，用6ml蒸馏水分次将残渣洗入离心管，提取液在室温下静置提取15-20分钟，每隔数分钟搅动1次，充分提取。在4000rmin转速下离心10分钟。将上清液倒入50ml容量瓶定容，摇匀，即为淀粉酶原液，用于-淀粉酶活力测定。吸取上述淀粉酶原液2ml放入50ml容量瓶，定容，为淀粉酶稀释液用于淀粉酶总活力的测定。3酶活力的测定6支试管，编号，按表添加将试管混匀，分别取2ml，放入25ml刻度试管中，再加入2ml

6、DNS试剂混匀，置沸水浴中加热5min，取出冷却，用蒸馏水稀释至25ml混匀，在分光光度计540nm处进行比色，测定光密度，记录测定结果。二 结果和分析实验结果-淀粉酶活性=（A-A）*样品稀释倍数*定容体积（样品重*c）根据麦芽糖理想曲线A0=0.584mg A=0.896mg-淀粉酶活性=(0.896-0.584)*8*50(2*1)=62.4mg(g·5min)总淀粉酶活力比色后数据为B0=0.0022 B2=0.109 B3=0.112 B=（B2+ B3）2=0. 1105根据麦芽糖理想曲线B0=0.076mgB=0.356mg（+）淀粉酶活性=（0.356-0.076）*

7、8*50*25(2*1)=1400 mg(g·5min)淀粉酶活性淀粉酶活性=（+）淀粉酶活性-淀粉酶活性淀粉酶活性=1400-62.4=1337.6 mg(g·5min)讨论在温度低和较高时，淀粉酶活性丧失，而在40左右酶活性很高。过酸或过碱环境使酶失活，在pH5.6（接近中性）淀粉酶活性较高。酶抑制剂使酶活性降低甚至丧失，酶激活剂使酶活性升高。一 材料与方法2.1 材料与仪器青椒，抗坏血酸，2，6-D钠盐，草酸。烧杯、刀子、离心管、移液管（10ml）、研钵、容量瓶50ml*2、微量滴定管（15ml）、三角瓶（100ml）*32.2 方法2.2.1精确称取抗坏血酸50ml

8、，用2%草酸溶解，小心移至容量瓶中，并加入草酸定容，用2，6-D钠盐溶液标定。2.2.2称取并切碎青椒样品2g，放在研体中加2%草酸少许研体中在50ml容量瓶中用草酸定容，过滤备用。2.2.3取滤液10ml于三角瓶中，用2，6-D滴定至桃红色15s内不消失为止，重复三次。再吸取2%草酸溶液10ml，为空白试验。二 结果和分析实验结果VC含量W=100*（V1-V2）A*b/B*a式中W：100g样品中含的抗坏血酸毫克数 V1：滴定样品用滴定液ml数 V2：滴定对照用滴定液ml数 A：1ml染料溶液相当的抗坏血酸毫克数，AB:滴定时吸取的样品溶液毫升数b：样品液稀释毫升数 a：样品的克数编号V1

9、123V0.200.021.220.081.260.101.42W1%=3.57% W2%=3.43% W3%=3.92%W(平均数)=3.64%一 材料与方法2.1 材料与仪25ml刻度试管、离心管或漏斗、三角瓶、容量瓶、刻度吸管、离心机、分光光度计等。 青椒、1mg/ml葡萄糖标准液、3，5二硝基水杨酸 3.2 方法1、葡萄糖标准曲线的制作 以吸光度为纵坐标，葡萄糖毫克数为横坐标绘制标准曲线。 2、样品中还原糖的提取 准确称取0.5g食用面粉青椒，先以少量蒸馏水研磨至匀浆，然后加25ml蒸馏水定容，搅匀，置于 50恒温水浴中保温10min，然后离心管中，于4000r/min下离心10min

10、，将离心的上清液作为还原糖待测。3、 显色和比色取四支试管，编号，按表分别加入待测液和显色剂。管号还原糖待测液（ml）蒸馏水（ml）DNS(ml)01.01.511.01.521.01.531.01.5将各管摇匀，在沸水浴中准确加热5min，冷却至室温，用蒸馏水定容至25ml，混匀，在分光光度计540nm上进行比色。用0号管调零，测出13号管的光密度值。二 结果和分析实验结果还原糖（%）=查曲线所得葡萄糖毫克数*提取液体积/测定时取用体积*样品毫克数管号0123分光密度值0.0000.2520.2400.234平均值：0.242查曲线所得葡萄糖毫克数：0.394还原糖%=1.97%3 讨论：

11、通过这些实验可以简单地测定出果蔬中的还原糖、维生素C、还原酶含量。每种食物所富含的营养物质含量都不相同，所以我们要合理的搭配膳食，充分保证人体对每种营养成分的摄入量。每个人对于每种营养成分的要求也都不同，我们的膳食要做到因人而异。所以如何制定合理的健康膳食就至关重要，健康膳食必须要求营养素种类齐全，数量充足，比例适当，饮食中所提供的营养素与机体的需要两者能保持平衡。这样才能让身体保持健康。【参 考 文 献】【1】 王镜岩，朱圣庚，徐长法 生物化学 高等教育出版社，2002【2】 高继国，郭春绒 普通生物化学教程实验指导 化学工业出版社，2009 【3】 蒋立科，郭春绒 生物化学过程工程学实践指导【M】 北京：科学出版社，2009.4【4】 蒋立科，罗曼 生物化学实验设计与实践【M】 北