凝胶贴剂适宜性简化-杭州

1、 中国中医科学院中药研究所中国中医科学院中药研究所刘淑芝刘淑芝中药凝胶膏剂共性技术适宜性研究中药凝胶膏剂共性技术适宜性研究中国中医科学院中药研究所汇报提纲汇报提纲v一、简述一、简述v二、共性技术的适宜性二、共性技术的适宜性v三、生产过程的适宜性三、生产过程的适宜性v四、评价方法的适宜性四、评价方法的适宜性v五、技术推广情况五、技术推广情况中国中医科学院中药研究所v 一、简述一、简述中国中医科学院中药研究所1中药经皮给药制剂研究概况、特点、存在问题、发展趋势。2中药经皮给药依托剂型：中药巴布剂、中药贴剂、中药橡胶膏剂、软膏剂、水凝胶、喷剂等。3中药经皮给药要解决的关键问题：生物相容性、药物相容性

2、、质量可控与均一性、设备的适宜性、评价方法等。1课题支持基本情况中国中医科学院中药研究所v 概况概况v经皮给药系统TTS(Transdermal Therapeutical System,TTS) 研究是目前药学界研究的热点。据世界卫生组织预测，2030年内，有30以上的药物将改成经皮给药制剂，因此经皮给药制剂国内外发展空间广阔，市场容量巨大。由于中药所含成分复杂，而复方用药仍然是中药主要形式，如何在保持中医复方用药特色的前提下，研究中药新型经皮给药系统,是中药制剂研究的艰巨而又迫切的任务。因此运用现代技术和材料科学发展的最新成果研究和开发中药新型经皮给药系统，开展现代技术对传统中药的适应性和

3、可行性，质控标准和评价方法研究，解决严重制约中药经皮给药发展的瓶颈技术难题，传承中医药优势与特色，实现中药经皮产品打入国际主流市场，具有重要意义。中国中医科学院中药研究所v 中药经皮给药制剂依托的剂型中药经皮给药制剂依托的剂型v 中药橡胶膏剂：目前市场流通的主流剂型v 中药黑膏药：属于传统保留剂型，有些老字号产品仍然具有市场。v 各种性质的软膏类v 中药喷雾剂、酊剂、气雾剂v 中药凝胶贴剂（巴布剂）：处于研发与产业化形成阶段v 中药贴剂：基质辅料国产化研发（国外药用基质成熟）中国中医科学院中药研究所v 要解决的关键问题要解决的关键问题：v 橡胶膏的刺激性、过敏性，生物相容性。v 黑膏药的环境、

4、重金属、使用不便、污染衣物v 压敏胶的基质、载药量，药物的相容性问题。v 巴布剂的粘弹性、标准化、产业化问题v 经皮促渗方法和技术问题中国中医科学院中药研究所v 关键技术：关键技术：v橡胶膏橡胶膏：依据天然橡胶为基础的橡皮膏的结构特点，进行聚合和改构研究，对新型橡胶膏基质性能进行评价和结构优化，同时对中药橡胶膏的关键技术工艺及设备进行系统研究，北京化工大学张军营教授已经进行了SIS热熔压敏胶在橡胶膏中的开发和ESIS热熔压敏胶的试验工作。v中药贴剂中药贴剂：从压敏胶的改性方面进行有成效的研究，并向产业化推广。v中药巴布剂：中药巴布剂：基于复合型通用辅料及成型技术，解决目前存在的粘性不足问题、规

5、范制剂标准问题，产业化问题。（重点介绍）v经皮促渗方法问题经皮促渗方法问题：化学促渗、物理促渗、中药挥发油促渗、载体促渗中国中医科学院中药研究所课题支持课题支持v 国家国家“863863计划、计划、”“”“十一五十一五”支撑计划项支撑计划项目目 v “国家重大新药创制国家重大新药创制”- -综合性中药新药开综合性中药新药开发技术大平台发技术大平台v “国家重大新药创制国家重大新药创制”- -生产过程控制技术生产过程控制技术平台平台 中国中医科学院中药研究所 总体目标总体目标v以萸连巴布剂为模型药，以萸连巴布剂为模型药，完成中药凝完成中药凝胶膏剂（巴布剂）的适宜性研究。胶膏剂（巴布剂）的适宜性研

6、究。v建立与完善中药巴布剂技术参数并形建立与完善中药巴布剂技术参数并形成共性技术。成共性技术。v建立中药巴布剂综合评价体系。建立中药巴布剂综合评价体系。中国中医科学院中药研究所研究内容研究内容v 1 1、文献资料的调研、文献资料的调研v 2 2、模型药分析方法研究、模型药分析方法研究v 3 3、模型药、模型药萸连巴布剂的提取、精制工艺研究萸连巴布剂的提取、精制工艺研究v 4 4、基质辅料的适宜性研究基质辅料的适宜性研究v 5 5、制备工艺关键技术的适宜性研究制备工艺关键技术的适宜性研究v 6 6、影响因素研究、影响因素研究v 7 7、综合评价体系的适宜性综合评价体系的适宜性v 8 8、中试验证

7、、中试验证中国中医科学院中药研究所二、共性技术的适宜性中国中医科学院中药研究所 （一）模型药的提取与精制工艺研究（一）模型药的提取与精制工艺研究v 1 1、文献调研：、文献调研：查阅文献二百余篇，发表“中药巴布剂的研究思路与方法”和“中药提取工艺综述”两篇综述文章。v 2 2、萸连处方药预选：、萸连处方药预选：v 萸连处方由吴茱萸、黄连、木香组成。确定黄连药材的产地为四川绵阳，盐酸小檗碱的含量为：7.19%，巴马丁的含量为：1.89%，符合药典规定。确定贵州产吴茱萸，其吴茱萸碱、次碱总含量1.741%。符合药典标准。中国中医科学院中药研究所 表表1 不同来源黄连药材有效成分含量不同来源黄连药材

8、有效成分含量样品盐酸巴马汀含量%盐酸小檗碱含量%含量和% 黄连药材四川11.444.125.56黄连药材黄连药材四川绵阳四川绵阳21.897.199.08黄连药材 四川雅安31.657.288.93中国中医科学院中药研究所表表2不同产地吴茱萸中吴茱萸碱和吴茱萸次碱含量比较不同产地吴茱萸中吴茱萸碱和吴茱萸次碱含量比较产地药材名称吴茱萸碱含量（）吴茱萸次碱含量（）碱和次碱之和（）广西吴茱萸0.1120.1100.222四川吴茱萸0.466浙江小花吴茱萸0.0970.0590.156湖南小花吴茱萸0.2450.1440.389江西（樟树）中花吴茱萸0.1620.1000.262湖北（阳新）中花吴茱萸

9、0.1720.1070.280湖南（新晃）中花吴茱萸0.3050.1330.438贵州贵州吴茱萸吴茱萸1.2711.2710.4430.4431.7141.714中国中医科学院中药研究所v 3、提取方法的选择、提取方法的选择 ：单因素比较：单因素比较：分提与合提的比较，选择分提。v 4、提取条件的选择（正交设计）、提取条件的选择（正交设计）v 黄连醇提条件的优选黄连醇提条件的优选:用70%乙醇、提取3次，每次1.5小时。（正交设计） v 吴茱萸、木香提取条件的优选：吴茱萸、木香提取条件的优选： 提取挥发油后80%乙醇，提取3次，每次1.5小时。（正交设计） 中国中医科学院中药研究所v 5 5、

10、不同纯化方法的药效学比较、不同纯化方法的药效学比较v 离心纯化：水提液离心v 酸沉淀纯化： 70%乙醇提取，回收乙醇，加沸水溶解，搅拌过滤，滤液加HCL调PH1-2，过滤，浓缩、干燥得。 v 大孔树脂吸附纯化v 三种纯化方法制备巴布膏样品，与原口服给药途径平行设组，以对实验性大鼠胃溃疡的影响为指标，进行药效学比较.为工艺选择提供依据。v 结论结论：选择吴茱萸、木香提油后80%乙醇提取，黄连选择醇提水溶后酸沉的工艺方法。中国中医科学院中药研究所1 基质辅料的适宜性研究234结果 制备技术的适宜性研究影响因素的研究（二）（二）关键技术的适宜性研究中国中医科学院中药研究所1、基质辅料的适宜性研究、基

11、质辅料的适宜性研究 辅料配方优化辅料配方优化 主要基质辅料的作用主要基质辅料的作用 验证试验验证试验中国中医科学院中药研究所 基质辅料配方优化基质辅料配方优化v 配方选择配方选择：以三种配方为基础，包括：本课题已获得的专利基质配方；用于新药研制的优选基质配方；新调制配方。最后确定了用于本课题研究的主体配方。v 对基质配方的整合对基质配方的整合：确定最佳配方，并对新型辅料的作用、不同功能辅料的选择、工艺的优化进行了实验研究。中国中医科学院中药研究所v 巴布剂基质配方的优化：拟对基质处方中的赋形剂、保湿剂、溶剂的加入量进行考察。实验采用正交实验设计进行实验，以感官指标和初粘力综合指标对制备的巴布剂

12、基质进行评价。v 确定最佳工艺。即赋形剂比例为确定最佳工艺。即赋形剂比例为1：4：1.5，保湿剂用，保湿剂用量为量为45g，溶剂用量，溶剂用量40g。中国中医科学院中药研究所主要辅料对基质的贡献主要辅料对基质的贡献v 效应面优化法效应面优化法（Response-surface Design）包括了试验设计、建模、检验模型合适性、因子效应的评估、考察以及寻求因子最佳操作条件。其试验设计中包含了因子分析、中心点和星点三部分设计内容。v 效应面优化法兼顾考虑了因素与效应之间线性或非线性关系，采用多元高次回归函数模型作为估计的工具，将多因素试验中因素与效应指标的相互关系进行曲线拟合，并依此对函数的效应

13、面和等高线图进行分析，研究因素与效应值之间，因素之间的相互关系，并迅速找到各因素的最佳组合区域各因素的最佳组合区域。 中国中医科学院中药研究所v 主要影响因素的考察主要影响因素的考察：v 黏性剂的作用：粘性剂的品种、加入条件、加入量的选择；v 骨架材料的作用：品种、加入条件、加入量的选择；v 交联剂的作用；v检测方法检测方法v 初黏力：采用滚球平面停止法滚球平面停止法，滚球从斜面上滚下，经过水平放置的巴布膏表面，测定滚球在巴布膏膏面的滚动距离，判定巴布膏的黏性大小。滚球直径1.82 cm，重量24.86 g，滚动距离越小，黏性越大。每个样品测定10次，以平均值计算。中国中医科学院中药研究所实验

14、方法与结果实验方法与结果v 多元线性回归： Y = 13.392 - 0.847X1 + 2.500X2 - 0.830X3 R2 = 0.661v 二次多项式回归模型： Y = 24.135 - 4.186X1 - 4.796X2 - 4.160X3 - 0.333X1X2 + 0.300X1X3 + 1X2X3 + 0.362X12 + 21.479X22 + 0.291X32 R2 = 0.977，Adj-R2 = 0.947v 简化模型及其方差分析表简化模型及其方差分析表v Y = 24.244 - 4.414X1 + 2.500X2 - 4.205X3 + 0.300X1X3 + 0

15、.395X12 + 0.309X32 中国中医科学院中药研究所项目B0B1B2B3B13B11B33估计值24.244- 4.4142.500- 4.2050.3000.3950.309标准差1.1590.7251.4170.5430.0530.1140.064t20.914-6.0921.764-7.7395.6813.4484.807P0.0000.0000.1080.0000.0000.0060.001R2 = 0.970，Adj-R2 = 0.952简化处理后的二项式各系数及其显著性检验表简化处理后的二项式各系数及其显著性检验表中国中医科学院中药研究所方差来源方差和自由度均方差FP模型

16、64.997610.83353.9530.0001残差2.008100.201总误差67.00516R2=0.970，Adj-R2=0.952拟合模型方差分析表拟合模型方差分析表中国中医科学院中药研究所v 由上表方差分析可以看出，F回归=53.953，P=0.0001，表明模型高度显著；模型的调整确定系数（Adj R-Squared）Adj-R2=0.952，说明该模型能解释95.2%响应值的变化，该模型的拟合程度良好，实验误差小，用该模型可以对巴布剂处方进行分析和预测。从上面简化后各系数的显著性检验看，模型一次项X1、X3；交互项X1X3；二次项X12、X32（P0.01）都具有极显著性，一

17、次项X2（P=0.108）有一定的影响，但无显著性。其他项对结果影响不大。v 通过对结果的分析可以看出，黏性剂通过对结果的分析可以看出，黏性剂P和骨架材料和骨架材料C的用量对滚球的用量对滚球的滚动距离具有明显的影响。二者用量的增加能够显著增加巴布的滚动距离具有明显的影响。二者用量的增加能够显著增加巴布剂的黏性，使得滚球距离的减小。剂的黏性，使得滚球距离的减小。中国中医科学院中药研究所 模型三因素趋势图 中国中医科学院中药研究所粘性剂粘性剂P和交联剂对滚球距离的影响等高线图及三维曲面图和交联剂对滚球距离的影响等高线图及三维曲面图v粘性剂增加，交联剂减少，滚球距离减小。中国中医科学院中药研究所粘性

18、剂粘性剂P和骨架材料和骨架材料C对滚球距离的影响等高线图及三维曲面图对滚球距离的影响等高线图及三维曲面图随着粘性剂用量与骨架材料用量的增加，滚球滚动的距离明显减小。中国中医科学院中药研究所骨架材料骨架材料C和交联剂对滚球距离的影响等高线图及三维曲面图和交联剂对滚球距离的影响等高线图及三维曲面图随着骨架材料用量的增加和交联剂用量的减少，滚球滚动的距离明显减小。中国中医科学院中药研究所v 上图显示：交联剂的影响不显著，尚未达到能够显著影响巴布膏黏性的用量水平。交联剂使用的目的，是使其与黏性剂粘性剂P和骨架材料C产生交联，增强巴布剂基质的粘弹性。过量的交联剂会急剧的增加基质的内聚力，而使得基质黏性的

19、消失。交联剂的加入在不影响粘性的情况下，增强了膏体的内聚力是最佳的。v 结果结果：综合以上分析，在三维曲面上选取表面黏性较大的处方组合区域，确定了最佳用量。将其数值带入上述模型，得预测值为：Y = 5.82 cm。中国中医科学院中药研究所验证试验结果表验证试验结果表编号滚动距离（cm）实验均值预测值偏差15.65.565.820.2625.635.5中国中医科学院中药研究所2 2、制备工艺的适宜性研究、制备工艺的适宜性研究基质成型工艺研究v 基质成胶条件基质成胶条件A：通过成型工艺条件的选择，调整辅料添加顺序，高分子材料复配，达到成胶条件，并完成巴布剂成型过程。制成膏体可以贴敷，不沾皮肤。v

20、基质成胶条件基质成胶条件B：基质辅料中加入适量交联剂，使高分子材料形成网状结构，膏体内聚力强，不烂膏，选择交联剂的加入方式和适宜的量。中国中医科学院中药研究所v制剂成型工艺研究v 中药用于临床多以复方的形式，中药外用贴膏剂又以大复方居多，药味多成分复杂，提取方法各异。中药浸膏、中药外用药中挥发性成分等对成型的影响十分重要。因此，基质成型后，制剂的成型也不容忽视。中国中医科学院中药研究所3、影响因素的研究影响因素的研究 交联剂的影响交联剂的影响v 研究表明，交联剂的加入对巴布剂基质的涂展性涂展性、黏性黏性以及基质基质的状态的状态有比较大的影响，交联剂的用量越大，交联的速度越快，基质的表面黏性越小

21、。实验选用5种常用的交联剂氯化钙、硫酸锌、氯化铝、甘氨酸铝和复合铝盐，交联剂用量根据品种不同采用常用量，以初粘力和感官指标综合评价，选择适合本基质处方的交联剂。中国中医科学院中药研究所v 膏体流变学特性对工艺参数的影响膏体流变学特性对工艺参数的影响v 对于巴布剂基质特性的研究，目前多涉及到膏体表面的物理性状的描述。而对于其膏体在受到外力作用、温度变化等情况下的内在变化较少研究。本实验采用高粘度流变仪，测定了巴布剂基质的一些流变学性质及工艺条件对膏体流变学特性的影响， 用以指导工艺参数的确定。中国中医科学院中药研究所v 初步结论初步结论：巴布剂粘弹性及模量受温度影响非常大，即常温时交联度越大，样

22、品强度越大；因此，对于巴布剂来说，在50以上时巴布剂基质的流动性最好，适宜于混合搅拌和涂布。涂布中需要保持50以下温度。v 从实验结果也可以看出，样品的温度逐渐升高，可以看出样品的粘弹性及模量的变化情况；温度上升到80后开始降温，样品的粘弹性和模量逐渐恢复。样品的粘弹性和储能模量可以恢复至原来水平。中国中医科学院中药研究所 剪切应力测试101102103104PaGG101001,00010,000100,000Pa剪 切 应 力 RheoplusAnton Paar GmbHShear stress sweep 2PP25-SN8954; d=1 mmG储能模量G损耗模量Shear stre

23、ss sweep 3PP25-SN8954; d=1 mmG储能模量G损耗模量Shear stress sweep 4PP25-SN8954; d=1 mmG储能模量G损耗模量1101001,00010,000Pa 101001,00010,000Pas 0204060801001/s剪 切 速 率 .RheoplusAnton Paar GmbHFlow curve 1PP25-SN8954; d=1 mm剪切应力粘度Flow curve 2PP25-SN8954; d=1 mm剪切应力粘度Flow curve 3PP25-SN8954; d=1 mm剪切应力粘度剪切速率的扫描测试-1-0.

24、500.511.522.533.544.55% 100101Pas| *|01002003004005006007008009001,000sTime tRheoplusAnton Paar GmbHBase plus Medicine(Creep) 2PP25; d=1 mmStrain|*|Complex ViscosityBase (Creep) 4PP25; d=1 mmStrain|*|Complex Viscosity100200300400500600700800900Pas| *|05001,0001,5002,0002,5003,0003,5004,0004,5005,000

25、5,5006,000PaGG203040506070C温 度 TRheoplusAnton Paar GmbHTemperature sweep 1PP25-SN8954; d=1 mm|*|复数粘度G储能模量G损耗模量Temperature sweep 2PP25-SN8954; d=1 mm|*|复数粘度G储能模量G损耗模量剪切力消失后的恢复温度扫描测试中国中医科学院中药研究所 温度降低后的恢复05001,0001,5002,0002,5003,0003,5004,0005,000PaGG050100150200250300350400450500550600700Pas| *|20304

26、050607080CTemperature TG, G = f ( T )Anton Paar GmbHBase plus Medicine (Temperature) 1PP25; d=1 mmGStorage ModulusGLoss Modulus|*|Complex Viscosity.温度升高对样品的粘弹性等物理特性并没有产生破坏性，温度降低，样品的性能能够随之恢复。中国中医科学院中药研究所结果与讨论结果与讨论 巴布剂具有复杂的流变学特性。在剪切速率、剪切应力、温度变化下样品的粘弹性、流动性变化明显，这对于巴布剂的生产、使用具有明显的意义。巴布剂制备中需要良好的流动性能，以利于各种材

27、料及药物的混合均匀，这个在增强剪切、升高温度下可以实现；在巴布剂的储藏、使用中所需要的粘弹性能，随着剪切的结束、温度的降低，结构逐渐成型，满足使用的要求。巴布剂流变学的测试结果，为巴布剂的生产与质量控制、使用提供了条件与参数依据。中国中医科学院中药研究所3、结果、结果v 经过一系列实验研究，确定了v 1.确定了主模型药-萸连巴布剂的提取、纯化工艺；v 2.确定了成型工艺条件和具体工艺参数；v 3.对主要基质材料在配方中的作用进行了研究和进一步的优化。v 4.完善了巴布剂技术平台，使该技术对各种药物具广泛的共溶性，可满足经皮给药的临床应用要求，具有粘弹性好，载药量大，刺激性、过敏性小，保湿、透气

28、、抗老化的特点，并且可反复揭贴，解决了长期以来中药巴布剂粘性差、生产周期长，制剂工艺条件不易控制的关键问题。中国中医科学院中药研究所 三、生产过程的适宜性中国中医科学院中药研究所v 1、中试量、中试量：首先对主模型药萸连巴布膏进行三批中试验证试验，每批5000-10000帖的考察。v 2、工艺参数、工艺参数：将实验室优化的技术参数应用到中试生产中，包括：提取与纯化工艺参数属于中药一般性工艺，与其它制剂的要求相当，不另行规定；浸膏浓缩中要求相对密度，归到浸膏参数项下；中药浸膏入药参数：浸膏浓度：相对密度1.25-1.35（50测），浸膏细度：需过100目以上筛，挥发油可最后直接加或环糊精包合物入

29、药。中国中医科学院中药研究所 四、评价系统的适宜性四、评价系统的适宜性中国中医科学院中药研究所安全性安全性中国中医科学院中药研究所1 1、建立分析方法、建立分析方法v 建立了黄连中盐酸巴马汀、盐酸小檗碱的HPLC含量测定。v 建立了吴茱萸碱、次碱HPLC含量测定方法。v 建立了能在一次进样中同时完成样品中吴茱萸碱、吴茱萸次碱、巴马汀和小檗碱四个成分含量测定的HPLC分析方法，并进行了方法学研究。结果表明，方法可行，满足定量分析要求，且简单、快捷，大大减少了分析工作量。并用于体内外的透皮吸收的含量测定中国中医科学院中药研究所2 2、透皮吸收效果评价、透皮吸收效果评价v接收液含量测定方法学研究（H

30、PLC）v释放度释放度v释放度与透皮实验研究释放度与透皮实验研究中国中医科学院中药研究所萸连巴布剂释放度评价萸连巴布剂释放度评价v 采用改良的Franz扩散池装置，以萸连巴布膏中的吴茱萸碱、吴茱萸次碱、巴马汀、小檗碱4种成分为指标，以PEG-乙醇%-蒸馏水(1:3:6)为接收液，以小鼠皮肤为屏障，分别在0.5h、1、2、4、8、14、24小时时取样，测定接收液中四种指标成分的含量，计算累积释放量Q，绘制其Q-T1/2曲线，考察其体外释放行为；平行6个样品，从结果来看6份样品中4种指标成分吴茱萸碱、吴茱萸次碱、巴马汀、小檗碱24小时的累积释放量和时间的平方根均有显著的线性相关关系，符合Higuc

31、hi方程。v释放度结果：24小时累积释放百分率分别为：44.00%，65.54%，59.00%，44.70%。 中国中医科学院中药研究所 吴茱萸碱、吴茱萸次碱、巴马汀、小檗碱的平均释放度曲线（吴茱萸碱、吴茱萸次碱、巴马汀、小檗碱的平均释放度曲线（n=6） 吴茱萸碱、吴茱萸次碱、巴马汀、小檗碱四种成分释放度曲线吴茱萸碱、吴茱萸次碱、巴马汀、小檗碱四种成分释放度曲线 （n=6）中国中医科学院中药研究所 四种成分释放度四种成分释放度Q-T曲线图曲线图中国中医科学院中药研究所 四种成分释放度四种成分释放度Q-T1/2拟合曲线图拟合曲线图中国中医科学院中药研究所体外透皮吸收研究体外透皮吸收研究v本实验条

32、件同释放度，以萸连巴布膏中的吴茱萸碱、吴茱萸次碱、巴马汀、小檗碱4种成分为指标，取已经制备好的萸连巴布膏小贴，以PEG-乙醇%-蒸馏水为接收液。将半透膜换成鼠皮。v分别在0.5h、1、2、4、8、14、24小时时取样，取样时倾出全部接收液，然后再注入新鲜的接收液，测定接收液中四种指标成分的含量，计算累积透皮量Q，绘制其Q-T曲线。v吴茱萸碱、吴茱萸次碱、巴马汀、小檗碱4中指标成分的体外经皮渗透过程均符合零级过程。24小时累积透皮百分率分别为：10.97%，21.36%，11.18%，5.63%。v 中国中医科学院中药研究所 吴茱萸碱、吴茱萸次碱、巴马汀、小檗碱的平均透皮曲线（吴茱萸碱、吴茱萸次

33、碱、巴马汀、小檗碱的平均透皮曲线（n=6）中国中医科学院中药研究所 四种成分四种成分Q-T体外累积透皮曲线图体外累积透皮曲线图中国中医科学院中药研究所体内药动学研究体内药动学研究-黄连中有效成分黄连中有效成分v目的：观察单次经皮给萸连巴布剂后兔体内的血药浓度，通过计算确定药代动力学参数，评价该制剂体内经皮渗透行为。v指标成分：盐酸巴马汀、盐酸小檗碱。盐酸巴马汀、盐酸小檗碱。v方法：取家兔家兔6 6只只，于给药前24h兔子背部脱毛1015cm，给药前取0h的血，按12g生药/kg 经皮给药，取萸连巴布剂膏均匀涂于兔脱毛区域，敷上塑料薄膜再用透明胶带环绕固定8h，给药后给药后1h1h、2h2h、4

34、h4h、8h8h、12h12h、24h24h、48h48h取血取血。在兔耳缘静脉处沿静脉划开一小口将血滴于肝素化试管中，3000 r/min 离心15min 。取血浆1ml于-20冰箱保存待用。v Waters系列高效液相色谱高效液相色谱仪系统，2487型双波长紫外检测器，Waters 1515-717自动进样系统， 进行一系列方法学研究进行一系列方法学研究。中国中医科学院中药研究所v 结论结论v 1，家兔经皮给药萸连巴布剂后，血浆中巴马汀、小檗碱的药-时曲 线符合一室模型。v 2，巴马汀和小檗碱药动学参数初步表明，滞后时间短、吸收速率快, 达峰时间短，药物经皮吸收迅速，可以较快发挥药效作用。

35、v 3，萸连巴布剂经皮给药8h，巴马汀和小檗碱的消除半衰期710h，平均驻留时间1315h，根据巴布剂经皮给药作用特点，延长给药时间，可维持较长时间的有效血药浓度，从而发挥长效作用。中国中医科学院中药研究所参数单位数值AKeKaLag timet1/2（ke）t1/2（ka）T（peak）C（max）AUCCL/F（s）V/F(c)ng/ml1/h1/hhhh hng/ml（ng/ml）*hg/kg/h/(ng/ml)g/kg/(ng/ml)153.89145.310.1120.0402.3932.9620.2770.5786.8422.2251.2121.1443.31642.49074.2

36、0832.8901097.85735.050.0170.0120.1450.074巴马汀主要药代动力学参数（巴马汀主要药代动力学参数（ xs）中国中医科学院中药研究所v 萸连巴布剂给药后巴马汀药-时曲线（n=6）中国中医科学院中药研究所参数单位数值AKeKaLag timet1/2（ke）t1/2（ka）T（peak）C（max）AUCCL/F（s）V/F(c)ng/ml1/h1/hhhh hng/ml（ng/ml）*hg/kg/h/(ng/ml)g/kg/(ng/ml)1096.7621381.8080.1090.0854.71687.1960.7690.2309.9136.8201.015

37、1.0722.9112.259541.869367.3419120.7267227.4190.00250.00220.02580.0159小檗碱主要药代动力学参数（xs） 中国中医科学院中药研究所v 萸连巴布剂给药后小檗碱药-时曲线（n=6） 中国中医科学院中药研究所药动学试验研究药动学试验研究- -吴茱萸碱、次碱吴茱萸碱、次碱 建立了同时测定血浆中吴茱萸碱、吴茱萸次碱HPLC方法。 通过方法学论证,吴茱萸碱和吴茱萸次碱最低检测浓度分别为5ng/ml、15ng/ml、(S/N=3)(S/N=3) 。中国中医科学院中药研究所方方 法法v 取巴布剂膏1g（含吴茱萸碱：6.19mg/g膏，20.63

38、mg/kg，吴茱萸次碱：4.66 mg/g,15.53mg/kg，涂于大鼠背部去毛部位，面积约为25平方厘米，取0h、1h、4h、8h、12h、24h的大鼠血2ml分离血浆（每个时间点3只），按“样品处理方法”处理后，进样 。中国中医科学院中药研究所结果结果：巴布膏大鼠经皮给药后，血中吴茱萸碱、吴茱萸次碱的药时数据经3p97软件拟合后，符合一级吸收的一室开放模型。 巴布剂膏中吴茱萸碱的含量比吴茱萸次碱高，但是给药后的C（max）、AUC值后者较高，说明吴茱萸次碱的经皮吸收比吴茱萸碱好。与体外透皮实验结果一致。中国中医科学院中药研究所吴茱萸碱的药动学参数吴茱萸碱的药动学参数参数参数单位单位数据数

39、据AKeKaLag timeT1/2（ka）T1/2（ke）T（peak）C（max）AUCCL/F（s） V/F（c）g/ml1/h1/hhhhhg/ml（g/ml）*hmg/kg/h/（g/ml）(mg/kg）/（g/ml）0.8685370.1143440.2240041.8499223.0943556.0619436.1321600.2108943.7184908.27486472.368111中国中医科学院中药研究所吴茱萸次碱的药动学参数吴茱萸次碱的药动学参数参数参数单位单位数据数据AKeKaLag timeT1/2（ka）T1/2（ke）T（peak）C（max）AUCCL/F（s

40、） V/F（c）g/ml1/h1/hhhhhg/ml（g/ml）*hmg/kg/h/（g/ml）(mg/kg）/（g/ml）1.218887 0.118484 0.2195921.3534733.1565275.8501126.1023140.2723474.7366234.600324 38.826397中国中医科学院中药研究所吴茱萸碱和吴茱萸次碱药吴茱萸碱和吴茱萸次碱药- -时曲线时曲线 n=5n=500.050.10.150.20.250.30.350.40.450.50510152025t/h/gmL-1中国中医科学院中药研究所3、药效学评价抑制胃溃疡抑制胃溃疡 实验以胃溃疡面积、胃溃

41、疡抑制率为指标，萸连片药粉为阳性药，考察萸连巴布膏对大鼠实验性胃溃疡的抑制作用对大鼠实验性胃溃疡的抑制作用。抗炎消肿抗炎消肿 实验采用致炎剂交叉菜致炎的大鼠足爪肿胀模型大鼠足爪肿胀模型，以市售扶他林为阳性药，考察萸连巴布膏的抗炎消肿作用。 镇痛抗炎镇痛抗炎 实验以小鼠扭体次数以小鼠扭体次数，吸光度为指标，以阿司匹林肠溶片为抗炎阳性药，元胡止痛片为镇痛抗炎阳性药，通过小鼠扭体和通透性实验，考察萸连巴布膏的抗痛、镇炎作用。 中国中医科学院中药研究所组别剂量g生药/kg溃疡指数溃疡发生率%溃疡抑制百分率%赋形剂对照-3.02.1690萸连口服组1.52.252.2263.625.0胃康灵1.32.2

42、72.2083.324.2外用大剂量12.02.52.077016.7中剂量6.03.02.26700小剂量3.03.332.4672.70萸连巴布膏对实验性大鼠胃溃疡的的影响萸连巴布膏对实验性大鼠胃溃疡的的影响中国中医科学院中药研究所组别剂量（g生药/kg）胃蛋白酶排出量（活性单位/h）PH值胃液体积(ml)赋形剂对照-44.7819.892.70.911.56.2萸连口服组1.568.9920.64*4.22.1*11.94.2胃康灵1.368.5822.854.61.8*9.43.5外用大剂量12.069.7022.13*4.11.715.24.4中剂量6.094.8836.03*2.4

43、0.618.26.0*小剂量3.064.3219.702.61.212.35.1萸连巴布膏对实验性大鼠胃溃疡胃液的影响萸连巴布膏对实验性大鼠胃溃疡胃液的影响中国中医科学院中药研究所组别剂量（g生药/kg）吸光度（A）扭体次数抑制率（%）赋形剂-0.4060.05230.06.4-元胡止痛组13.2（片）-13.19.0*56.33阿司匹林组0.250.2590.022*-口服连萸组3.00.3320.05721.610.2*28.0外用1.5g生药/kg1.50.3720.11422.08.0*26.673.0g生药/kg3.00.3470.14110.210.666.16.0g生药/kg6.

44、00.2980.095*15.512.7*48.3312.0g生药/kg12.00.2650.099*14.69.3*51.48萸连巴布膏对小鼠抗炎镇痛作用的影响萸连巴布膏对小鼠抗炎镇痛作用的影响（XSD ,n=10）中国中医科学院中药研究所组别剂量g/kg肿胀度（ml）0.5h1h2h4h6h对照组0.1180.0640.1890.0590.1970.0780.2590.0780.2620.074口服萸连粉2.10.0530.058*0.0720.086*0.2050.0600.2050.0870.2680.068扶他林组50.10800630.1040.054*0.1370.0910.13

45、90.091*0.1410.075*大剂量120.1330.0830.1510.0380.1570.0500.2520.0970.2420.128中剂量60.0760.0680.0820.048*0.0860.069*0.1390.038*0.1430.076*小剂量30.0700.0610.1100.082*0.0950.070*0.1620.094*0.1500.086抗炎消肿实验结果抗炎消肿实验结果中国中医科学院中药研究所组别剂量g/kg抑 制 率（%）0.5h1h2h4h6h对照组-10.4515.2818.0723.4923.04口服萸连粉2.158.6959.449.4823.15

46、1.60扶他林组548.8956.5249.8357.3258.38大剂量128.046.9924.277.445.42中剂量646.6962.8764.3155.2450.06小剂量341.7645.3357.7841.7443.53萸连巴布膏对角叉菜胶致大鼠足趾肿胀抑制率的影响萸连巴布膏对角叉菜胶致大鼠足趾肿胀抑制率的影响中国中医科学院中药研究所v结论结论v 药效学实验研究结果表明，萸连巴布膏具有明显的抑制胃溃疡，镇痛抗炎和消肿的作用，证明萸连巴布膏具有与口服给药相同的药理作用。中国中医科学院中药研究所 4 4、安全性评价、安全性评价主要内容: 过敏性实验 刺激性实验中国中医科学院中药研究

47、所刺激性实验刺激性实验v 观察外用药萸连巴布剂对家兔完整皮肤及破损皮肤所产生的局部刺激反应及其程度，为临床的安全用药提供科学依据。本试验采用萸连巴布剂给家兔完整皮肤和破损皮肤单次和多次给药，剂量为710cm2/只/次。以行为活动、外观特征、体重、水肿及红斑为指标，进行实验研究。v 结果显示，结果显示，单次给药，完整皮肤和破损皮肤组均未出现红斑、水肿等刺激反应，平均积分值为0；连续给药，完整皮肤组动物及破损皮肤组均未见红斑或水肿，平均积分值均为0； 说明，萸连巴布剂对家兔完整皮肤、破损皮肤均无刺激性。中国中医科学院中药研究所过敏性实验过敏性实验v 观察萸连巴布剂是否会导致豚鼠皮肤出现过敏反应，为

48、临床安全用药提供依据。以一般指标（笼旁观察、豚鼠体重测量）、2，4-二硝基致敏的红斑、水肿为指标，结果给药后，豚鼠的体重增长与对照组比较无明显差异，一般观察指标无明显异常，皮肤未出现过敏反应。而阳性对照药2,4二硝基氯代苯明显引起豚鼠皮肤过敏反应。v 实验证明实验证明：萸连巴布剂不会引起豚鼠皮肤的过敏反应结果给药后，豚鼠的体重增长与对照组比较无明显差异，一般观察指标无明显异常，皮肤未出现过敏反应。而阳性对照药2,4二硝基氯代苯明显引起豚鼠皮肤过敏反应。萸连巴布剂不会引起豚鼠皮肤的过敏反应。中国中医科学院中药研究所5 5、质量评价、质量评价 主要内容主要内容v 药材标准的制定v 薄层鉴别v HP

49、LC 法测定萸连巴布膏的含量中国中医科学院中药研究所药材标准药材标准：黄连黄连v 测定湖南、四川、云南三个产地的黄连药材中盐酸巴马汀和盐酸小檗碱的含量。v 暂定黄连药材中盐酸巴马汀和盐酸小檗碱的含量总和不得少于4.0%。中国中医科学院中药研究所吴茱萸吴茱萸v 对湖南、四川两个产地吴茱萸中吴茱萸碱和吴茱萸次碱含量测定，结果均符合药典规定。v 参照药典标准，暂定吴茱萸药材中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量总和不得少于0.15%。中国中医科学院中药研究所1黄连的鉴别3木香的鉴别2吴茱萸的鉴别薄层鉴别中国中医科学院中药研究所v 黄连：参考2005版中国药典一部方法。结果供试品与对照药材相应的位置上，显相同颜

50、色的斑点，阴性无干扰。黄连的鉴别图谱1，2 ，3 供试品 4：黄连对照药材 5 黄连空白中国中医科学院中药研究所v吴茱萸：参考2005版中国药典方法。结果供试品与对照药材相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰。吴茱萸的鉴别图谱1，2 ，3 供试品 4：吴茱萸对照药材 5 吴茱萸空白中国中医科学院中药研究所v 木香：参照药典的方法，未取得较好的结果。后改用甲苯-乙酸乙酯-冰醋酸 (10：1：0.1)为展开剂展开,预饱和30分钟。结果供试品色谱在与对照药材相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰。木香的鉴别图谱1，2 ，3 供试品 4：木香对照药材 5 木香空白中国中医科学院中药研究所萸连巴

51、布膏的含量测定方法研究v 供试品溶液的制备v 方法学考察v 萸连巴布膏含量限度的制定中国中医科学院中药研究所样品名称标准曲线线性范围（g）R吴茱萸碱Y=2E+06x-2368.50.01088-0.5440.9997吴茱萸次碱Y=2E+06x-5808.10.0088-0.440.9998盐酸巴马汀Y=2E+06x-323140.0288-1.440.9993盐酸小檗碱Y=2E+06x-299180.2896-4.480.9999回归方程与线性范围中国中医科学院中药研究所中国中医科学院中药研究所v精密度试验 吴茱萸碱、吴茱萸次碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱的RSD分别为1.66%、1.86%、1.

52、30%、1.54%，均符合精密度实验的要求，说明该方法的精密度良好。v重复性试验 吴茱萸碱、吴茱萸次碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱的RSD分别为0.77%、0.75%、1.72%、1.22%，均符合重复性实验的要求，说明该方法的重复性良好。v稳定性试验 吴茱萸碱、吴茱萸次碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱RSD分别为0.67%、1.5%、1.64%、1.80%，说明吴茱萸碱、吴茱萸次碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱在24小时的稳定性良好。中国中医科学院中药研究所v空白试验空白试验v 按照药品成品质量标准草案【制法】项下方法，制备阴性样品，按照含量测定项下条件测定。结果表明复方萸连巴布膏的阴性样品，在吴茱萸碱、吴茱萸次碱、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱相应的位置未出现色谱峰，表明阴性样品无干扰。中国中医科学院中药研究所 回收率回收率v 取已知含量的萸连巴布剂，分别加入吴茱萸碱、吴茱萸次碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱对照品，按上述色谱条件进行测定，计算回收率。v 结果吴茱萸碱、吴茱萸次碱、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱的平均回收率分别：101.8%、97.0%、97.8%、101.3%，