白酒中邻苯二甲酸酯类的测定

1、白酒中邻苯二甲酸酯类的测定白酒中邻苯二甲酸酯类的测定一、邻苯二甲酸酯类一、邻苯二甲酸酯类特性分析特性分析 n邻苯二甲酸酯类邻苯二甲酸酯类化合物化合物（PAEsPAEs），是指从邻苯二甲酸二甲基酯到十），是指从邻苯二甲酸二甲基酯到十三烷基酯，共三烷基酯，共2020多种化合物。多种化合物。n是目前最常用的是目前最常用的增塑剂增塑剂，主要，主要 用于聚氯乙烯材料，令聚氯乙烯用于聚氯乙烯材料，令聚氯乙烯 由硬塑胶变为有弹性的塑胶。由硬塑胶变为有弹性的塑胶。n其具有种类多、难以降解、生物富其具有种类多、难以降解、生物富 集性强的特点集性强的特点, , 具有雌激素样作用，具有雌激素样作用， 是是全球环境污

2、染最为严重物质之一全球环境污染最为严重物质之一。PAEs性质性质v邻苯二甲酸酯的一般化学结构是由一个刚性平面邻苯二甲酸酯的一般化学结构是由一个刚性平面芳烃和两个可塑的非线性脂肪侧链组成芳烃和两个可塑的非线性脂肪侧链组成, ,常温下呈常温下呈无色油状粘稠液体。一般难溶于水无色油状粘稠液体。一般难溶于水, ,易溶于有机溶易溶于有机溶剂剂, ,属中等极性物质。属中等极性物质。v该类化合物的液态温度范围相当宽该类化合物的液态温度范围相当宽, , 具有非常大具有非常大的流动性和较小的挥发性和水溶性的流动性和较小的挥发性和水溶性, ,这些理化性质这些理化性质决定了决定了PAEsPAEs的行为特点。的行为特

3、点。几种重点关注的几种重点关注的PAEs性质性质DMP:沸点282。与乙醇、乙醚混溶，溶于苯、丙酮等多种有机溶剂20水中溶解度小于0.1g/L。logP=1.56。DEP：沸点350。与乙醇、乙醚混溶，溶于丙酮、苯等有机溶剂，20水中溶解度1g/L。logP=3.3。DBP：沸点340。水溶性及挥发性都很低，但易溶于乙醇、乙醚、丙酮和苯等有机溶剂也能与大多数烃类互溶。 logP=4.72。 DIBP：沸点327。在水中溶解度0.05g/L（25）。logP=4.11。 DEHP：沸点386。不溶于水，溶于大多数有机溶剂和烃类。 logP=7.19。 PAEs特性总结与分析思路特性总结与分析思路

4、v PAEs具有较高的沸点，对光热稳定。大部分PAEs具有亲脂性，易溶于非极性溶剂。其中DMP、DEP等有一定的亲水性。v 适合用液液萃取、固相萃取等方式进行净化、富集，但须照顾到具有一定亲水性的组分DMP、DEP、DMEP、DEEP。二、二、白酒中白酒中PAEsPAEs的检测方法的检测方法概述概述1 1、方法和标准、方法和标准v 试剂盒法试剂盒法v 气相色谱法气相色谱法(GC)(GC)、气质联用法（气质联用法（GC-MSGC-MS）。）。v 液相色谱法液相色谱法(LC(LC），液质联用法（），液质联用法（L LC-MSC-MS/MS/MS）。）。 GB/T 21911-2008 GB/T 2

5、1911-2008 食品中邻苯二甲酸酯的测定食品中邻苯二甲酸酯的测定 2 2、试剂盒法、试剂盒法v 基于ELISA原理 v 针对邻苯二甲酸酯一类全部物质的试剂盒 v 专门针对DBP的试剂盒 v 检测限多在0.05ppm1ppm之间v 多达数十种应用分析应用分析v最为关注的就是DBP。由于DBP限量低，其余两种成分限量要求高，还可能有其他没有限量要求的组分存在。因此，试剂盒筛查发现有检出的，并不能确认合格与否。v专门针对DBP检测的试剂盒，存在同类物质的交叉反应，特别是作为异构体的DIBP，交叉反应率较高，多数试剂盒都在30%上，存在较高的误判可能。3 3、气相色谱检测方法、气相色谱检测方法 气

6、相色谱法：气相色谱法使用FID检测器，可以对邻苯二甲酸类物质进行检测。但是受灵敏度的限制，对于酒类中的微量DBP不能满足检测要求。若采用浓缩富集、以及使用大体积进样的方式虽可提高灵敏度，但考虑到塑化剂类物质在各种试剂乃至器具中都存在本底值，浓缩富集可能加剧这种影响，实际操作中应当慎用。三、三、白酒中白酒中PAEsPAEs气质联用检测方法气质联用检测方法1、方法原理v 白酒中的PAEs以正己烷提取，使用HP-5MS石英毛细管柱，经气相色谱分离后，使用带EI源的单四极杆质谱仪，选择离子模式（SIM）监测，以各组分保留时间和特征离子的丰度比定性，外标法定量。2 2、试剂、材料、仪器、试剂、材料、仪器

7、v 正己烷（色谱纯或重蒸分析纯）、氯化钠；正己烷（色谱纯或重蒸分析纯）、氯化钠；v 具塞玻璃离心管、玻璃胶头滴管、涡旋混合器、水浴锅；具塞玻璃离心管、玻璃胶头滴管、涡旋混合器、水浴锅；v 1616种邻苯二甲酸酯类化合物标样，正己烷稀释至浓度为种邻苯二甲酸酯类化合物标样，正己烷稀释至浓度为0.020.02、0.050.05、0.10.1、0.20.2、0.50.5、1.0g/mL1.0g/mL的标准系列溶液的标准系列溶液待用；待用；v 气相色谱气相色谱- -质谱联用仪，具有电子轰击电离源。质谱联用仪，具有电子轰击电离源。3 3、白酒样品的处理、白酒样品的处理3.1 3.1 标准方法标准方法称取白

8、酒样品称取白酒样品5.00g5.00g（精确至（精确至1mg1mg）于）于10mL10mL具塞玻璃离心管具塞玻璃离心管中，加入中，加入2.00mL2.00mL正己烷，振荡正己烷，振荡1 min1 min，再加适量氯化钠，静，再加适量氯化钠，静置或离心分层；置或离心分层；取上层正己烷进取上层正己烷进GC-MSGC-MS分析。分析。问题：问题： 部分组分，如部分组分，如DMPDMP、DEPDEP、DMEPDMEP、DEEPDEEP等，回收率差，仅等，回收率差，仅为为30%60%。3.2 3.2 改进的方法改进的方法方法一方法一 称取白酒样品称取白酒样品2.00g2.00g（精确至（精确至1mg1m

9、g）于）于10mL10mL具塞玻璃离心管具塞玻璃离心管中，置于中，置于9595水浴中水浴中3030分钟，驱除乙醇；分钟，驱除乙醇； 离心管取出冷至室温，补加水至离心管取出冷至室温，补加水至2mL2mL，加入，加入5.00mL5.00mL正己烷正己烷，涡旋提取，涡旋提取2min2min，再加，再加1g1g氯化钠，振摇氯化钠，振摇0.5min0.5min，静置或离，静置或离心分层；心分层； 取上层正己烷进取上层正己烷进GC-MSGC-MS分析。分析。方法二方法二 称取白酒样品称取白酒样品2.00g2.00g（精确至（精确至0.1mg0.1mg）于）于10mL10mL具塞玻璃离心具塞玻璃离心管中；管

10、中； 加入加入4.00mL4.00mL正己烷，涡旋提取正己烷，涡旋提取2min2min，再加，再加1g1g氯化钠，振摇氯化钠，振摇0.5min0.5min，静置或离心分层；，静置或离心分层； 用玻璃滴管将上层正己烷相转移至另一用玻璃滴管将上层正己烷相转移至另一10mL10mL刻度管中，再刻度管中，再依次用依次用3mL3mL、2mL2mL正己烷萃取正己烷萃取2 2次，合并三次萃取液，正己次，合并三次萃取液，正己烷定容至烷定容至10mL10mL，摇匀后进，摇匀后进GC-MSGC-MS分析。分析。4 4、仪器操作参数、仪器操作参数v 进样口：温度进样口：温度250250，进样量，进样量1 1不分流进

11、样；不分流进样；v 柱温程序：初始温度柱温程序：初始温度6060，保持，保持1min1min，以，以20/min20/min升温至升温至220220，保持，保持1 min1 min，再以，再以5/min5/min升温至升温至280280，保持，保持4 4 minmin；v 传输线温度：传输线温度：280280；v 载气：氦气载气：氦气( (纯度纯度99.99999.999），流速），流速1mL/min1mL/min；v 色谱柱：色谱柱：HP-5MSHP-5MS石英毛细管柱石英毛细管柱30m30m0.25mm0.25mm0.25m0.25mv 离子源为离子源为EIEI模式，质谱调谐参数根据仪器的

12、特点进行调整，模式，质谱调谐参数根据仪器的特点进行调整，确保充分满足方法的检出限要求。确保充分满足方法的检出限要求。v 各组分监测离子附后。各组分监测离子附后。标准品色谱图标准品色谱图 5 5、阳性样品定性验证、阳性样品定性验证v 试样待测液与标准品的选择离子色谱峰在相同保留时间处偏差不超过0.5%，并且对应质谱碎片离子的质荷比与标准品一致，其丰度对与标准品相比应符合：v 相对丰度50%时，允许10%偏差；v 相对丰度20%50%时，允许15%偏差；v 相对丰度10%20%时，允许20%偏差；v 相对丰度10%，允许50%偏差，此时可定性确证目标分析物。6 6、检出限、线性范围、检出限、线性范

13、围v检出限 按照GB/T 21911-2008，白酒属于不含油脂的样品，检出限为0.05mg/kg。可通过空白值分析、标准添加确定是否满足。改进的处理方法均可满足0.05mg/kg的检出限。v线性范围 0.02g/mL1g/mL。四、关键控制点四、关键控制点1 1、玻璃器皿的洗涤、玻璃器皿的洗涤 所用玻璃器皿洗净后，用重蒸水洗三次，丙酮中浸泡所用玻璃器皿洗净后，用重蒸水洗三次，丙酮中浸泡1h1h，在，在200200下烘烤下烘烤2h2h，冷却至室温备用。全部器皿单独存，冷却至室温备用。全部器皿单独存放，避免误用。另外，接触过标准品的玻璃器皿应单独洗放，避免误用。另外，接触过标准品的玻璃器皿应单独

14、洗涤，防止交叉污染涤，防止交叉污染。2 2、其他可能导致污染的因素、其他可能导致污染的因素v 标样的储存、配置标准系列的过程v 蒸馏水洗瓶v 滴管的胶头v 试剂瓶的内盖v 气相色谱自动进样器针、洗针液和废液瓶v 气相色谱系统，进样隔垫v3 3、试剂、器具的选择与评价、试剂、器具的选择与评价v 正己烷、水：PAEs背景低，含量稳定；v 杜绝使用塑料材质的器具；v 所有的器具和试剂应经过严格的评价；v 来自不同瓶的试剂均需做空白试验试剂评价结果试剂评价结果RT: 10.20 - 19.03111213141516171819Time (min)050100050100050100050100Rel

15、ative Abundance05010005010011.6818.5510.7912.6118.4116.4114.1017.5713.0715.6814.9411.6810.7818.5514.2812.03 12.5014.9013.2516.4015.7317.8917.1311.6710.7918.5512.0314.2812.6314.9116.4213.1817.7315.3918.5511.6810.7917.7012.4517.2812.8216.0714.9213.5818.5510.7911.6812.7818.4816.4018.0613.0114.4215.2911

16、.6810.8018.5611.2211.9616.4017.8916.0712.5613.7117.1114.99NL:2.39E5TIC MS HUANJIWANNL:1.87E8TIC MS shiyoumi-30-60NL:1.55E7TIC MS shiyoumi-chongzhengNL:1.09E7TIC MS yisuanyizhiNL:8.87E4TIC MS zhengjiwan2NL:5.53E4TIC MS zhengjiwan-nongcanji3环己烷环己烷石油醚石油醚重蒸石油醚重蒸石油醚乙酸乙酯乙酸乙酯色谱级正己烷色谱级正己烷农残级正己烷农残级正己烷在溶剂中存在的

17、邻苯酯类主要有三种，邻苯二甲酸二异丁酯在溶剂中存在的邻苯酯类主要有三种，邻苯二甲酸二异丁酯（DIBP）、邻苯二甲酸二丁酯、邻苯二甲酸二丁酯（DBP）、）、邻苯二甲酸二（邻苯二甲酸二（2- -乙基）己酯乙基）己酯（DEHP）。）。实验时应严格控制，注意选取空白值实验时应严格控制，注意选取空白值低的溶剂。低的溶剂。4 4、质控措施、质控措施v空白试验：每批测定时，须带至少一个空白试样，除不加样品外，其空白试验：每批测定时，须带至少一个空白试样，除不加样品外，其他操作同样品处理步骤一致，考察背景空白影响。他操作同样品处理步骤一致，考察背景空白影响。v质控样：使用质控样。没有质控样可采用加标回收，在阴

18、性样品中加质控样：使用质控样。没有质控样可采用加标回收，在阴性样品中加入入乙醇乙醇配制的标样溶液，按相同方法处理后，计算回收率。加标水平应配制的标样溶液，按相同方法处理后，计算回收率。加标水平应包含检出限、两倍检出限和十倍检出限。对于结果存有疑问需确证的样包含检出限、两倍检出限和十倍检出限。对于结果存有疑问需确证的样品，还应做样品加标。品，还应做样品加标。v在仪器运行高含量的标样或样品后，应进行空白溶剂分析，验证仪器在仪器运行高含量的标样或样品后，应进行空白溶剂分析，验证仪器的交叉污染水平。的交叉污染水平。v在样品分析过程中，按照一定频次加入质控样，验证测试系统的稳定在样品分析过程中，按照一定

19、频次加入质控样，验证测试系统的稳定性。性。五、检验结果的分析五、检验结果的分析1 1、结果定性、结果定性 在相同条件下，试样和标样选择离子色谱峰的相同保留在相同条件下，试样和标样选择离子色谱峰的相同保留时间偏差不超过时间偏差不超过0.5%0.5%，对应质谱碎片离子的质荷比一致，对应质谱碎片离子的质荷比一致，其丰度比与标准品的偏差符合要求，可定性确证目标物。其丰度比与标准品的偏差符合要求，可定性确证目标物。 保留时间和离子丰度比超出但接近定性的正常偏差范围保留时间和离子丰度比超出但接近定性的正常偏差范围怎么办？怎么办？问题分析问题分析v 保留时间的偏差是否基质差异导致？多次进样偏差是单向性还是随机性的？再加标确认v 同一化合物，各碎片离子质量色谱图中的保留时间、峰形是否一致？v 每个组分色谱峰采集的数据点数是否满足定量要求？15个点以上方可准确定量。v 所用仪器定性离子丰度比的RSD是多少？ 3%二、二、白酒中白酒中PAEsPAEs的检测方法的检测方法概述概述1 1、方法和标准、方法和标准v 试剂盒法试剂盒法v 气相色谱法气相色谱法(GC)(GC)、气质联用法（气质联用法（GC-MSGC-MS）。）。v 液相色谱法液相色谱法(LC(LC），液质联用法（），液质联用法（L LC-MSC-MS/MS/MS）。）。 GB