常用pH缓冲液配置方法及注意事项

1、常用pH缓冲液配置方法及注意事项常用pH缓冲溶液的配制和pH值也溶液名称配制方法pH值1氯化钾-盐酸13.0ml0.2mol/LHCl与25.0ml0.2mol/LKCl混合均匀后，加水稀释至100ml1.72氨基乙酸-盐酸在500ml水中溶解氨基乙酸150g,加480ml浓盐酸，再加水稀释至1L2.33一氯乙酸-氢氧化钠在200ml水中溶解2g一氯乙酸后，力口40gNaOH,溶解完全后再加水稀释至1L2.84邻苯二甲酸氢钾-盐酸把25.0ml0.2mol/L的邻苯二甲酸氢钾溶液与6.0ml0.1mol/LHCl混合均匀，加水稀释至100ml3.65邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钠把25.0ml0.2

2、mol/L的邻苯二甲酸氢钾溶液与17.5ml0.1mol/LNaOH混合均匀，加水稀释至100ml4.86六亚甲基四胺-盐酸在200ml水中溶解六亚甲基四胺40g，加浓HCl10ml,再加水稀释至1L5.47璘酸二氢钾-氢氧化钠把25.0ml0.2mol/L的磷酸二氢钾与23.6ml0.1mol/LNaOH混合均匀，加水稀释至100ml6.88硼酸-氯化钾-氢氧化钠把25.0ml0.2mol/L的硼酸-氯化钾与4.0ml0.1mol/LNaOH混合均匀，加水稀释至100ml8.09氯化镂-氨水把0.1mol/L氯化镂与0.1mol/L氨水以2:1比例混合均匀9.110硼酸-氯化钾-氢氧化钠把2

3、5.0ml0.2mol/L的硼酸-氯化钾与43.9ml0.1mol/LNaOH混合均匀，加水稀释至100ml10.011氨基乙酸-氯化钠-氢氧化钠把49.0ml0.1mol/L氨基乙酸-氯化钠与51.0ml0.1mol/LNaOH混合均匀11.612璘酸氢二钠-氢氧化钠才巴50.0ml0.05mol/LNa2HPO与26.9ml0.1mol/LNaOH混合均匀，加水稀释至100ml12.013氯化钾-氢氧化钠把25.0ml0.2mol/LKCl与66.0ml0.2mol/LNaO混合均匀，加水稀释至100mlH13.0、常用溶液的配制（一）溶液配制注意事项1 .药品要有较好的质量试剂分为优级纯

4、（保证试齐LGuaranteedreagent）G.R.）、分析试剂(Antalyticalreagent,A.R.)化学纯(Chemicalpure,C.P.)和实验试剂(Laboratoryreagent,L.R.)等等。工业用的化学试剂，杂质较多，只在个别情况下应用，如配洗液用的硫酸、配干燥剂的氯化钙等。2 .药品称量要精确。3 .配制试剂用水应用新鲜的去离子水或双蒸僭水，比电阻值在50万欧姆以上，pH在5.57.0之间才可应用，在组织培养等特殊用途时应注意此项要求，配制一般化验用溶液只要求用双蒸僭水或去离子水。4 .配好后的溶液，应立即除菌处理(如高压灭菌、抽滤或加抑菌物质)，以防杂菌

5、生长。(二)0.067(1/15)Mol/L磷酸缓冲液1. 1/15Mol/L磷酸二氢钾溶液的配制：称取磷酸二氢钾(KHPO,A.R.)9.08g,用蒸僭水溶解后，倾入1000ml容量瓶内，再稀释至刻度(1000ml)。2. 1/15Mol/L磷酸二氢钠溶液的配制：称取无水磷酸氢二钠(NaHPO,A.R.)9.47g(或者NaHPO。2H2O11.87g)用蒸储水溶解后，放入1000ml容量瓶内，再加蒸储水稀释至刻度(1000ml)。3,按附表的比例，配制成不同pH值的缓冲溶液附表1磷酸盐缓冲液配制法(单位：毫升)PH1/15Mol/LNa2HPO1/15Mol/LKH2POPH1/15Mol

6、/LNa2HPO1/15Mol/LKH2PO5.88.092.07.166.623.45.99.990.17.272.028.06.012.287.87.376.823.26.115.384.77.380.819.26.218.681.47.584.115.96.322.477.67.687.013.06.426.773.37.789.410.66.531.868.27.891.58.56.637.562.57.993.26.86.743.556.58.894.75.36.849.650.48.195.84.26.955.444.68.297.03.07.061.138.98.498.02.0

7、(三)0.15Mol/LPB液附表20.15Mol/LPB液配制法PH0.15Mol/LNa2HPO(ml)0.15Mol/LNaH2PO(ml)6.426.573.56.637.562.56.849.051.07.061.039.07.272.028.07.481.019.07.687.013.0NaHPO2H2O分子量=175.050.15Mol/L溶液含26.7g/LoNaHPO.12HO分子量=358.220.15Mol/L溶液含53.7g/L。NaHPO-H2O分子量=138.000.15Mol/L溶液含20.7g/LoNaHPO-2HO分子量=156.030.15Mol/L溶液含2

8、3.4g/L。（四）0.2Mol/LPB缓冲液附表30.2mol/LPB缓冲液配制法PH0.2Mol/LNa2HPO(ml)0.2Mol/LNaH2PQ(ml)5.88.092.06.012.387.76.218.581.56.426.573.56.637.562.56.849.051.07.061.039.07.272.028.07.481.019.07.687.013.07.891.58.58.094.75.30.2Mol/LNa?HPO2H2O溶液35.61g/LNaHPO.12H2O溶液含71.64g/L0.2Mol/LNaH2PO-H2O溶液含27.60g/LNaHPO-2H2O溶液

9、含31.21g/L欲配0.1Mol/LPB缓冲液则在0.2Mol/LPB缓冲液的基础上加H2O稀释1倍即可。欲配制PBS：!时，则在溶液中加0.85%的NaCl溶液即可。（五）无钙镁离子磷酸缓冲盐水（PBS（0.15Mol/LPH7.2）NaCl8.0gKCl0.2gNaHPO1.15g（如为NaHPO12H2Q则为2.89g）KHPO0.2g将上述试剂依次溶于1000ml去离子水中，完全溶解后）115c高压灭菌10min15min）存在4C冰箱中备用。此液可用于配制和稀释细胞分散剂以及洗涤细胞培养物。（六）硼酸盐缓冲液（Boratesalinebuffer）1 .硼酸（H3BO）0.2Mol

10、/L硼酸：硼酸12.37g加水至1000ml。2 .硼砂（NaBQ）0.05Mol/L硼砂：硼砂19.07g加水至1000ml。附表4不同pH的0.2Mol/L硼酸缓冲液配制法pH）.05Mol/L硼砂（ml）0.2Mol/L硼酸（ml）PH0.05Mol/L硼砂（ml）0.2Mol/L硼酸（ml）7.41.09.08.23.56.57.61.58.58.44.55.57.82.08.08.76.04.03.03.07.09.08.02.0（七）巴比妥缓冲液1. pH8.2离子强度0.05Mol/L巴比妥缓冲液巴比妥钠47.6g蒸储水3000ml1.17NHCl55.0ml（1.17NHCl=

11、193ml浓HCl加1807ml蒸储水）将4.76g巴比妥钠溶于3000ml蒸储水。加1.17NHCl55ml。用HCl调节pH到8.2，并加蒸C水至4265ml2. pH8.40.06Mol/L巴比妥缓冲液巴比妥1.84g巴比妥钠10.30g加蒸储水至1000.00ml3. pH8.60.06Mol/L巴比妥缓冲液巴比妥1.66g巴比妥钠12.76g加蒸储水1000.00ml（八）0.2Mol/L醋酸盐缓冲液见表附表5附表50.2Mol/L醋酸盐缓冲液配制法PH0.2Mol/LTris(ml)0.1Mol/LHCl(ml)PH0.2Mol/LTris(ml)0.1Mol/LHCl(ml)23

12、c37c23c37c9.108.952558.067.902527.58.928.76257.57.967.822530.08.758.602510.57.877.732532.58.628.482512.57.777.632535.08.508.372515.57.667.522537.58.408.272517.57.547.402540.08.328.182520.07.367.222542.5（九）三羟甲基甲烷一盐酸缓冲液（TrisHCl缓冲液）不同pH,0.05Mol/L25ml0.2Mol/L三羟甲基氨基甲烷加xml0.1NHCl,加水稀释至100ml（见下表）附表6TrisHCl

13、缓冲液配制法PH0.2Mol/LTris(ml)0.1NHCl(ml)PH0.2Mol/LTris(ml)0.1NHCl(ml)23c37c23c37c9.108.962558.057.902527.58.928.78257.57.967.822530.08.748.602510.07.877.732532.58.628.482512.57.777.632535.08.508.372515.07.667.522537.58.408.272517.57.547.402540.08.328.182520.07.367.222542.58.238.102522.57.207.052545.08.14

14、8.002525.025三羟甲基氨基甲烷（Tris）分子量=121.140.2Mol/L三羟甲基氨基甲烷：Tris24.23g,加水至1000ml。0.1NHC1:取HCl8.6ml）加水至1000ml。（十）0.5Mol/LpH9.5碳酸盐缓冲液NaHCO3.70gNaCO0.60g溶于600.00ml蒸储水中即得。不用时塞紧瓶塞，以免吸收空气中二氧化碳使PH下降。最好小量配制。（H一）甘油磷酸缓冲液1 .配制pH8.0磷酸缓冲液0.1Mol/LNa2HPO94.50ml0.1NNaAPO5.50ml混合即可2 .9份甘油与1份pH8.0磷酸缓冲液混合，即为甘油磷酸缓冲液。用途：用于免疫荧光

15、试验。（十二）Hanks液1 .贮存液NaCl80.00gKCl4.00gNaHPO12H2O1.52gKHPO0.60g葡萄糖4.00g0.4%酚红液50.00ml双储水加至100.00ml115c高压灭菌15min,冰冻保存。2 .工作液贮存液1份双储水9份115c高压灭菌15min。临用时用灭菌的5.6%NaHCO调pH值至7.2左右（溶液呈橙红色）。（十三）紊（钠）氏试剂（Nesslersreagent）配方1:氯化汞6.0g碘化钾12.4g20%NaOH30ml加蒸储水至100ml配方2:碘化汞11.5g碘化钾8g蒸夕留水50ml（完全溶解后）过滤，力口20%NaOH50ml用途：检

16、测溶液中氨离子。（十四）阿氏（Alsevers）液葡萄糖2.05g柠檬酸钠0.80g氯化钠0.42g蒸储水100ml溶解后，以10%宁檬酸调节pH至6.1,过滤，分装，10磅10min灭菌，4c保存。（十五）青、链霉素混合液（简称S.P.液或双抗液）青霉素（40万U）5支链霉素（200万g）1支分别溶于100ml灭菌无离子水中或共同溶于200ml灭菌无离子水中，混合后分装小瓶，置-10=20c冰箱保存备用（1万单位pg/ml）。临用时，按1%勺量加入营养液或其他溶液中，最后浓度是青霉素100U/ml,链霉素100ug/ml。（十六）洗液（清洁液）配方1:重铭酸钾150g蒸储水300ml浓硫酸3000ml将重铭酸钾加入蒸僭水中，使之自然溶解或水浴溶解，亦可在大地堪中加热溶解，然后慢慢加入浓硫酸，边加边搅拌，见发热过剧