土壤中分解尿素的细菌的分离与计数学案

1、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 班级 姓名 知识梳理 一、筛选菌株1 尿素是一种重要的氮肥，农作物 _（能，不能）直接吸收利用，而是首先通过土壤中的细菌将尿素分解为 ，这是因为细菌能合成 。2 科学家能从热泉中把耐热细菌筛选出来原理是 。思考1本课题使用的培养基配方中，为微生物的生长提供碳源的是 ，提供氮源的是 ，琼脂的作用是 。思考2本课题使用的培养基对微生物 （具有，不具有）选择作用。如果具有，其选择机制是 。二、统计菌落数目1在统计菌落数目时，常用来统计样品中活菌数目的方法是 。除此之外， 也是测定微生物数量的常用方法。2采用稀释涂布平板法统计菌落数目时，培养基表面生长的一个菌落，来源

2、于 。通过统计 ，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在 的平板进行计数。思考3从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数的计算方法是 。思考4利用稀释涂布平板法成功统计菌落数目的关键是 。3统计的菌落数比活菌的实际数目 。这是因为当两个或多个细胞在一起时，平板上观察到的只是 菌落。因此，统计结果一般用 来表示。三、设置对照设置对照的主要目的是 。思考5请设计本实验的对照实验组： 。四、实验设计1 实验设计的内容包括实验方案、材料用具、实施步骤和时间安排等。2 根据图示27填写以下实验流程：3 土壤微生物主要分布在距地表 cm的近中性土壤中，约 为细菌。4 分离不同

3、的微生物采用不同的稀释度，其原因是 ，其目的是保证获得 的平板。细菌稀释度为 ，放线菌稀释度为 ，真菌稀释度为 。5 培养不同微生物往往需要不同培养温度。细菌一般在 培养12d，放线菌一般在 培养57d，霉菌一般在 的温度下培养34d。6 在菌落计数时，每隔 h统计一次菌落数目。选取 时的记录作为结果，以防止因 而导致遗漏菌落的数目。7菌落的特征包括 等方面。思考6土壤微生物种类最多、数量最大的原因是什么？ 。8 实验过程1）取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要 。2）应在火焰旁称取土壤 g。将称好的土样倒入盛有 mL无菌水的 中，塞好棉塞。3）在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在 旁

4、进行。4）实验时要对 作好标记。注明 等。5）为了提高效率，在操作时更加有条不紊，应当 。思考7在研究未知微生物时务必规范操作，以防被 感染，实验后一定要洗手。五、结果分析与评价1对分离的菌种作进一步的鉴定，还需要借助 的方法。2在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的 将尿素分解成了 。氨会使培养基的碱性 ，PH 。因此，我们可以通过检测培养基 变化来判断该化学反应是否发生。3在以 为唯一氮源的培养基中加入 指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变 ，说明该细菌能够 。思考8测定饮水中大肠杆菌数量的方法是将一定体积的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到 培养基上培养，大肠杆菌菌落呈现 ，通

5、过记数得出水样中大肠杆菌的数量。你认为在该实验中至少应取 个水样。跟踪练习1PCR技术要求使用耐高温的DNA聚合酶，这种酶要能忍受93左右的高温。如果请你来寻找这种耐高温的酶，你会去哪里寻找( )A土壤中 B海水中 C热泉中 D冷库中2下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是 ( )AKH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、葡萄糖、尿素、琼脂、水BKH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、葡萄糖、琼脂、水CKH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、尿素、琼脂、水DKH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、牛肉膏、蛋白

6、胨、琼脂、水； 3.某同学在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌落数的平均值为234，那么每克样品中的菌落数是(涂布平板时所用稀释液的体积为0.1mL)( )A2.34×108 B2.34×109 C234 D23.44.在做分离分解尿素的细菌实验时，A同学从对应106培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。A同学的结果产生原因可能有( ) 由于土样不同 由于培养基污染 由于操作失误 没有设置对照A B C D5.关于土壤取样的叙述错误的是( )A土壤取样，应选取肥沃、湿润的土壤 B先铲去表层土3cm左右，再取样C取样用的小铁铲和信封在使用前不用

7、灭菌 D应在火焰旁称取土壤6.下列关于从土壤中分离细菌的操作步骤中，正确的是( ) 土壤取样 称取10g土壤取出加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中 吸取0.1mL进行平板涂布 依次稀释至101、102、103、104、105、106、107稀释度A B C D7.下列关于测定土壤中细菌数量的叙述，正确的是( )A一般选用103107倍的稀液分别涂布B测定放线菌的数量，一般选用103、lO 4和105倍稀释C测定真菌的数量，一般选用103、104和105倍稀释D当第一次测量某种细菌的数量，可以将101107倍的稀释液分别涂布到平板上培养8.下列关于微生物的培养叙述错误的是( )A细菌一般在3037

8、的温度下培养12 dB放线菌一般在2528的温度下培养57 dC霉菌一般在2528的温度下培养34 dD不同种类的微生物，一般需要相同的培养温度和培养时间9.下列操作需要在火焰旁进行的一组是( ) 土壤取样 称取土壤 稀释土壤溶液 涂布平板 微生物的培养A B C D10.下列可以鉴定出分解尿素的细菌的方法是 ( )A以尿素为唯一氮源的培养基中加人酚红指示剂B以尿素为唯一氮源的培养基中加入斐林试剂C以尿素为唯一氮源的培养基中加入苏丹试剂D以尿素为唯一氮源的培养基中加入双缩脲试剂11.土壤取样时最好选择哪种环境中的土壤做分离细菌的实验( )A街道旁 B花盆中 C农田中 D菜园里12在做本课题实验

9、时，甲同学筛选出的菌落与其他同学不同，并且他在设计实验时并没有设置对照。思考下列问题： (1)你认为出现甲同学这种结果的原因可能是什么?(2)要帮助甲同学排除可能影响实验结果的因素，需要设置 ，实验方案有两种：一种方案是可以由其他同学用与甲同学 进行实验，如果结果与甲同学一致，则证明甲同学 ，如果结果不同，则证明甲同学存在操作 或 的配制有问题。另一种方案是将甲同学配制的培养基在不加 的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到 。13某同学在做微生物实验时，不小心把圆褐固氮菌和酵母菌混在一起。该同学设计下面的实验，分离得到纯度较高的圆褐固氮菌和酵母菌。(1)实验原理：圆褐固氮菌是自生

10、固氮菌，能在无氮培养条件下生长繁殖而酵母菌则不能；青霉素不影响酵母菌等真菌的生长繁殖，而会抑制圆褐固氮菌的生长繁殖。(2)材料用具：(略) (3)实验步骤：制备两种培养基，将两种培养基各自分成两份，依次标号A、a和B、b。 ，并在25 条件下培养 天。分别从A、B培养基的菌落中挑取生长良好的菌并分别接种到a、b培养基中，适宜条件下培养34天。(4)请问答本实验中，配制的分离用的培养基成分特点：A、a是 培养基，B、b是 培养基，根据上述原理配制的培养基属于_培养基。根据所需目的配制上述培养基时除营养要协调外还应注意 。实验步骤中第步的目的是 。圆褐固氮菌与酵母菌在结构上的主要差异为 。青霉素抑

11、制圆褐固氮菌等细菌的生长繁殖，其作用机理是破坏或抑制其细胞壁的形成。请据此推测不影响酵母菌等真菌生长繁殖的原因是 。14.有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出高效降解原油的菌株。回答问题：（1）在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以 为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于 培养基。（2）纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即 和 。（3）为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力 。（4）通常情况下，在微生物培养过程中实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、 和 。无菌技术要求实验操作应在酒精灯 附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。 参 考 答 案1C 2A 3B 4A 5C 6C 7B 8D 9D 10A 11D12(1)可能的原因有两种：一是由于土样不同，二是由于培养基污染或操作失误。 (2) 对照实验 一样的土样