第三章药物的杂质检查(2012)

1、化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析第三章 药物的杂质检查 （Purity Test of Drugs）本讲要求：1、掌握杂质限量的概念和计算，一般杂质检查方法和原理；2、熟悉药物中特殊杂质检查的方法。3、了解药物的杂质的来源、分类。化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析一、药物的杂质及其来源一、药物的杂质及其来源1 1、杂质的概念、杂质的概念： 任何影响药品纯度的物质均称为杂质。药物中的杂质是指存在于药物中无治疗作用或者影响药物的疗效和稳定性，甚至对人体健康有害的一种物质。化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析2

2、、药物的纯度、药物的纯度 是指药物的纯净程度 它反映了药物质量的优劣。 事实上，许多杂质不可能完全除掉。只要将其降低到最低限度，不妨碍药物的疗效和人体的健康，不影响药物的稳定性以及调配处理，可允许药物中有一定限量的杂质存在。 纯净的药物是相对的，不纯的药物是绝对的。化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析3 3、药用规格与试剂规格的区别、药用规格与试剂规格的区别 药物的纯度又称之为药用规格；试剂的纯度称之为试剂规格。化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析 药物的纯度（药用规格或药用纯度）主要是从保证人民用药安全、有效考虑，而化工产品及试剂纯度并

3、不考虑杂质的生理作用，仅从杂质可能引起的化学变化，在使用上所产生的影响以及它们使用的范围和目的来加以规定。所以，二者不能相互代替使用。化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析4 4、药物中杂质的主要来源、药物中杂质的主要来源 由生产中引入。如原料、中间体、副产物、残留溶剂、器皿中金属等 贮藏过程中受外界因素的影响，引起药物结构发生变化，水解、氧化、分解、聚合等。（与药物的稳定性有关）化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析5、药物中杂质的分类、药物中杂质的分类1)按来源分类：一般杂质/特殊杂质。 一般杂质一般杂质是指在自然界中分布较广泛，在多种药

4、物的生产和贮藏过程中容易引入的杂质，如氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属、砷盐、酸碱、水分等。共12项，重点是前5项。 特殊杂质特殊杂质是指在药物的生产和贮藏过程中，根据该药物的性质、生产方法和工艺条件，有可能引入的杂质。如阿司匹林中的游离水杨酸，盐酸普鲁卡因注射剂中对氨基苯甲酸，肾上腺素中的肾上腺酮等。化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析2)按其性质分类：信号杂质/有害杂质。 信号杂质本身一般无害，但其限量的多少可以反映出药物的纯度水平，如限量过大，表明药物的纯度差，因此也称为指示性杂质。氯化物、硫酸盐等就属于信号杂质。 重金属、砷盐、氰化物等，对人体有毒害，为有害杂质

5、，在质量标准中必须严格控制，以保证用药的安全。3)按其结构分类：无机杂质/有机杂质。化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析二、二、 检查项目检查项目1、有效性：针对某些药效需进行的特定项目。2、均一性：含量均一。含量均匀度系指小剂量片剂、膜剂、胶囊剂或注射用无菌粉末等制剂每片（个）含量偏离标示量的程度。3、安全性检查：进行异常毒性、热源、降压物质和无菌等项目检查。抗生素药物、粉针剂、注射液对此要求更严格。4、纯度要求：药品中允许存在的最大杂质含量。化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析三、药物中杂质的限量检查三、药物中杂质的限量检查1 1、杂

6、质限量检查、杂质限量检查 药物中所含杂质的最大允许量，叫做药物中所含杂质的最大允许量，叫做杂质限量杂质限量。药物中杂质的检查，一般不要求准确测定其含量，而只检查杂质的量是否超过一定的限量。这种杂质检查的方法叫做杂质的限量检查杂质的限量检查（Limit test）。在药品质量标准中杂质检查多数为限量检查限量检查。化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析2 2、杂质限量检查方法、杂质限量检查方法 对照法对照法（最常用的方法）:取一定量的被检杂质标准溶液和一定量供试品溶液，在相同条件下处理，比较反应结果，以确定杂质是否超过限量。 灵敏度法：灵敏度法：在供试品溶液中加入一定量的

7、试剂，在一定反应条件下，不得有正反应出现，从而判断供试品中所含杂质是否符合限度规定。 比较法比较法：供试品一定量依法检查，测定特定待检杂质的参数（吸光度等）与规定的限量比较，不得更大。化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析3 3、杂质限量的表示方法、杂质限量的表示方法 杂质限量就是指药物中所含杂质的最大允许量，是通过与一定量的杂质标准溶液进行比较来确定，杂质的最大允许量也就是杂质标准溶液的浓度（C）与体积（V）的乘积。杂质的限量通常用百分之几或百万分之几（ppm）来表示。化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析4、杂质限量的计算、杂质限量的计算

8、%100供试品量杂质最大允许量杂质限量%100供试品量标准溶液的体积标准溶液的浓度杂质限量%100SVCL化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析例题1：茶苯海明中氯化物的检查。 取本品0.30克置于200mL容量瓶中，加水50mL、氨试液3mL与10%硝酸铵溶液6mL，置于水浴上加热5分钟，加硝酸银试液25mL，摇匀，再置于水浴上加热15分钟，并时时振摇，放冷，用水稀释至刻度，摇匀，放置15min，滤过，取续滤液25mL，置于50mL比色管中，加稀硝酸10mL，用水稀释成50mL，摇匀，在暗处放置5min，依法检查，与标准氯化钠溶液（10g Cl/mL）1.5mL制成

9、的对照液比较，不得更浓。求氯化物的限量。化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析6100%10 101.5100%250.302000.04%C VLS解：化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析例题2：谷氨酸钠中重金属的检查。 取本品1.0g，加水23mL溶解后，加醋酸盐缓冲液（pH3.5）2mL，依法检查，与标准铅溶液（10g Pb/mL）所呈颜色相比较，不得更深。已知重金属限量为百万分之十，求算应取标准铅溶液多少毫升？66100%10 101.0100%10 101.0L SVCmL解：化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-3

10、0药物分析例题3：肾上腺素中酮体的检查。 取本品0.20g，置于100mL容量瓶中，加盐酸溶液（9 2000）溶解并稀释至刻度，摇匀，在310nm波长处测定吸光度不得超过0.05 。已知酮体的 为435，求酮体的限量。1%1cmE解：根据朗伯比尔定律：A=ECL有：1%140.051.15 10/100435cmACELgmL酮体化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析0.20 /100CgmL样品4100%1.15 10100%0.200.06%CLC酮体样品化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析四、一般杂质检查的原理与方法四、一般杂质检查的

11、原理与方法一般杂质检查包括：1、氯化物氯化物检查法检查法 2、硫酸盐硫酸盐检查法检查法 3、铁盐铁盐检查法检查法 4、重金属重金属检查法检查法 5、砷盐砷盐检查法检查法 6、酸碱度检查法 7、溶液颜色检查法 8、易炭化物检查法9、澄清度检查法 10、炽灼残渣检查法11、干燥失重测定法12、有机溶剂残留量测定法化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析1 1、氯化物的检查、氯化物的检查 原理： Cl- +Ag+ AgCl（稀硝酸环境下）与氯化钠标准溶液比较浊度 方法与限量：1）样品配成水溶液约25mL (溶液如为碱性，可加硝酸使成中性)+稀硝酸10mL+硝酸银试液1.0mL

12、+水至50mL摇匀, 2）与氯化钠标准溶液（10g/mL,5.0-8.0g/50mL）对照管比较。化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析1） 纳氏比色管应置于黑色背景下，自上而下观察。2） 加入稀硝酸可加速生成AgCl，浊度较好，另外还可避免碳酸银，氧化银，磷酸银沉淀的干扰，以每50mL中含稀硝酸10mL为宜。3） 温度以30-40C浊度最大，室温亦可。4） 比色前应在暗处放置5min，光照将使AgCl分解，影响比色。5） 氯化钠标准溶液用量5.0-8.0mL/50mL（10g/mL）时浊度区别最为明显。化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析

13、 注意点：1）溶液不澄清 应过滤后取续滤液检查，但纸中含有氯离子，用含硝酸的蒸馏水洗滤纸，再过滤。 2）溶液有色：使其褪色，但不影响氯离子的测定（如检查高锰酸钾中的氯离子可先用乙醇褪色）；将供试液分成两份，一份加入硝酸银反复沉淀，再在其中加入氯化钠标准溶液，配成对照液；另一份作为供试液。 3）其它阴离子的干扰 I-、Br 干扰的排除：加入一定量的酸和过氧化氢，加热煮沸，使其氧化为I2和Br2挥发后，溶液澄清后检查。利用AgI沉淀稳定，在氨溶液中不溶解，而AgBr、AgCl沉淀在氨溶液中溶解的性质，除去I- 的干扰。化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析 4）不溶于水的

14、药物： 加水使氯离子溶解后，过滤，取续滤液检查。 药物在稀乙醇或丙酮中有一定的溶解度，可加稀乙醇或丙酮溶解后检查，但对照液也应用稀乙醇或丙酮配。5）更难使氯离子溶出的药物，如有机氯杂质，可采取碱水解后检查。有的需有机破坏。化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析2 2、硫酸盐的检查、硫酸盐的检查 原理： SO4 2-+ Ba2+ BaSO4 白色（稀盐酸环境下）与标准硫酸钾溶液比较浊度 方法与限量： 样品配成水溶液约40mL (溶液如为碱性，可加盐酸使成中性)+稀盐酸2mL+25%氯化钡溶液5mL, +水至50mL摇匀,与硫酸钾标准溶液（0.1mg/mL, 1.0-5.

15、0mL/50mL）对照管比较。化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析 1） 加入稀盐酸2mL(pH约为1.1，可避免碳酸钡，磷酸钡沉淀的干扰，如大于此酸度，灵敏度下降。2） 硫酸根浓度以50mL中含0.1-0.5mg 为宜，浊度区别明显。3） 温度最佳25-30C水浴10min,温度低，浊度差。 注意点：1） 溶液不澄清应过滤后取续滤液检查，但要用含盐酸的蒸馏水洗滤纸中的硫酸盐。2） 有色溶液，处理方法同氯化物。3） 氯化钡试液浓度以25%为最佳，应充分搅匀，以免影响浊度。 化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析3 3、铁盐的检查、铁盐的检查

16、（影响药物稳定性）（影响药物稳定性）（一）（一） 硫氰酸盐法硫氰酸盐法（chpchp、uspusp采用）采用） 原理： Fe3+ + 6SCN- Fe (SCN )63- （稀盐酸环境下）与标准铁溶液比较所呈颜色（红色） 方法与限量： 样品配成水溶液约25mL +稀盐酸4mL+过硫酸铵50mg, +水至35mL +30%硫氰酸铵溶液3mL+水至50mL,摇匀,与标准铁溶液（10g/mL, 1.0-5.0mL/50mL）对照管比较。化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析 1） 标准铁溶液（用稀硫酸配硫酸铁铵FeNH4(SO4)212H2O，防止水解）浓度以50mL中含1

17、0-50g为宜，吸收度与浓度呈良好的线性关系，呈色梯度明显。 2） 酸度以50mL中含稀盐酸4mL为宜，所生成红色最深。另外稀盐酸可防止铁水解和避免弱酸盐的干扰。 3） 过硫酸铵可使供试液中的Fe2+ Fe3+；防止光线使 Fe (SCN )63-褪色,（ Fe (SCN )63-遇光敏感，易还原或分解）。另外过量的过硫酸铵还可增加配离子的稳定性，提高反应灵敏度和消除氯化物与铁盐形成配合物的干扰。化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析 3、注意点：1）某些药物（葡萄糖、糊精、硫酸镁）在检查过程中需加硝酸处理，则不加过硫酸铵，但需煮沸除氧化氮（NO、NO2），因硝酸中含

18、有亚硝酸，能与硫氰根离子作用，生成红色亚硝酰硫氰化物，影响比色。 2）色调不一致时，可加正丁醇或异戊醇提取，取醇层比色，（ Fe (SCN )63-在有机溶液中溶解度大，易于浓缩）。 3）重金属干扰的排除：某些重金属将极大地干扰测定（如汞、银、铜离子，形成络合物或沉淀）。 化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析 4）阴离子干扰的排除：氯离子、磷酸根离子、硫酸根等离子，与Fe3+ 形成无色配离子干扰检查，可适当增加酸度和增加硫氰酸铵试液的量，用正丁醇或异戊醇提取后比色。氯离子有影响，加入过量的硫氰酸铵可使氯离子干扰排除；硫酸根离子干扰较大，故不能在硫酸酸性条件下。5）环

19、状结构或不溶于水的药物需炽灼后检查。化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析（二）巯基醋酸法（二）巯基醋酸法（BPBP采用）采用） 原理： 巯基醋酸还原Fe3+Fe2+，在氨碱性条件下生成红色配离子，与一定量标准铁溶液经同法处理后产生的颜色比较。 在加巯基醋酸试液前加20%枸橼酸2mL，使其与铁离子成配离子，以免在氨碱性溶液中生成氢氧化铁沉淀。 特点：灵敏度高，但试剂较贵。化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析4 4、重金属的检查、重金属的检查（影响药物稳定性，有毒，以铅（影响药物稳定性，有毒，以铅盐为代表检查）盐为代表检查）第一法：硫代乙酰胺

20、法第一法：硫代乙酰胺法 适用于溶于水、稀酸和乙醇的药物，为最常用的方法。 原理：CH3CSNH2 + H2O CH3CONH2 + H2SH2S + Pb 2+ PbS+ 2H+（pH3.5醋酸盐缓冲液环境下）与标准铅溶液比较所呈颜色（黄色到棕黑色）化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析 1）纳氏比色管应置于白纸背景下，自上而下观察。2）标准铅溶液配法（10g/mL硝酸铅，取1-2mL,浓度以27mL溶液中含1020g的铅）为防止铅盐水解，配制时，加入5mL硝酸，应在临用前配制，使用不超过一周。3）酸度以pH3.5为宜，此时PbS完全，酸度增大，呈色变浅，酸度太大则不

21、显色。若供试品呈强酸性，则需碱化至中性，然后加入醋酸盐缓冲液。 方法与限量方法与限量： 样品+ pH3.5醋酸盐缓冲液2mL+水适量使成25mL + 硫代乙酰胺试液2mL（溶液总量为27mL）,放置2min，与标准铅盐按同法制成的对照液比较。化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析 注意点：1）供试品如有色，可采取外消色法（焦糖）,使两管颜色相似或内消色法。2）若溶液中有微量的高铁盐存在，在弱酸性溶液中将氧化硫化氢析出硫，影响比色，可加入维生素C或盐酸羟胺，使Fe3+Fe2+，Fe2+不干扰测定。3）若供试品为铁盐，可使其与盐酸络合为HFeCl62-,用乙醚除去再碱化后

22、用氰化钾掩蔽微量的铁盐，加硫化钠检查铅盐（酸性条件会破坏络合物）。化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析 4）不溶性的硫化物应作处理（加酸、碱或形成配合物），使其可溶后检查。5）配制供试品溶液时，如使用盐酸超过1.0mL，氨试液超过2mL，或加入其它试剂进行处理者，除另有规定外，对照液中应取同样同量的试剂置瓷皿中蒸干，同上进行检查。化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析第二法：炽灼破坏法第二法：炽灼破坏法 适用于含芳环、杂环，以及在水、稀酸、乙醇中难溶的药物，或能与重金属离子形成配合物的有机药物。 原理：重金属可能会与芳环、杂环形成牢固的价键

23、，需要先将供试品炽灼破坏、残渣加硝酸进一步破坏，蒸干。加盐酸转化为易溶于水的氯化物，再按第一法进行检查。 方法与限量：取炽灼后残渣，加硝酸0.5mL，蒸干，至氧化氮蒸汽除尽后（或取供试品一定量，缓缓炽灼至完全炭化，放冷，加硫酸0.5-1mL，使恰好湿润，用低温加热至硫酸除尽后，加硝酸0.5mL，蒸干，至氧化氮蒸汽除尽后，放冷，在500-600 C 炽灼至完全灰化），放冷，加盐酸2mL，置水浴上蒸干后加水15mL，滴加氨试液至对酚酞指示液显中性，再加醋酸缓冲液（pH3.5）2mL，微热溶解后，移至纳氏比色管中，加水稀释成25mL，作为样品管。化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-3

24、0药物分析步 骤 ：药 物炽 灼残 渣HNO3加 热溶 液蒸 干残 渣氯 化 物 溶 液水 浴 蒸 干氨 试 液醋 酸 盐 缓 冲 液 （ pH3.5）依 法 检 查H2OHC l化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析对照管：另取配制供试品溶液的试剂，置瓷器皿中蒸干后，加醋酸缓冲液（pH3.5）2mL和水15mL，微热溶解后，移至纳氏比色管中，加标准铅溶液一定量，再用水稀释至25mL。注意点：1）炽灼温度应控制在500-600 C，否则重金属将损失。2）炽灼的残渣用硝酸加热处理时，要蒸干氧化氮，否则亚硝酸会氧化硫化氢析出硫而影响比色。3）蒸干后加盐酸使之成为氯化物，盐

25、酸中带入重金属的机会较多，应作空白检查。化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析第三法：硫化钠法第三法：硫化钠法 适用于难溶于稀酸或在稀酸中生成沉淀，但能溶于稀碱的药物，如磺胺类、巴比妥类药物。 原理：S 2- + Pb 2+ Pb S（在碱性条件下）与标准铅溶液比较所呈颜色（黄色到棕黑色） 方法与限量： 取供试品+氢氧化钠试液5mL和水20mL使溶解+硫化钠试液5滴，与标准铅溶液同法处理后的溶液比较所呈颜色。化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析第四法：微孔滤膜法第四法：微孔滤膜法 适用于含2-5g重金属杂质的检查（纳氏比色管难以观察的）。

26、原理：同第一法 方法与限量： 标准铅斑制备：精密量取标准铅溶液一定量，用水或规定溶剂稀释成10mL + pH3.5醋酸盐缓冲液2mL与硫代乙酰胺试液1.0mL,放置10min，用50mL注射器转移至滤器中滤过（滤速为1mL/min），滤毕，取下滤膜，在滤纸上干燥即得标准铅斑。另取供试液10mL,同上操作，与标准铅盐对照液比较。化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析5 5、砷盐的检查、砷盐的检查（一）古蔡法（一）古蔡法（GutzeitGutzeit） 原理 金属锌与酸作用生成新生态的氢，与药物中微量的砷反应生成具有挥发性的砷化氢（AsH3），遇溴化汞（HgBr2）试纸，

27、产生黄色至棕色的砷斑（ As（HgBr）3 、 AsH（HgBr）2、 As2HgBr3 ），与一定量标准砷溶液所生成的标准砷斑比较。化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析 方法与限量： 于导气管C中装入醋酸铅棉花60mg（装管高度60-80mm），再于旋塞D的顶端平面上放一片溴化汞试纸，盖上旋塞E并旋紧。 标准砷斑的制备：精密量取标准砷溶液2mL，置于A瓶中，加盐酸5mL与水2mL，再加碘化钾试液5mL与酸性氯化亚锡试液5滴，在室温放置10分钟后，加锌粒2g，立即将装妥的导气管C密塞于A瓶上，并将A瓶置于25-40 C水浴中，反应45min，取出溴化汞试纸，即得。

28、样品砷斑的制备：取按个品种项下规定方法制成的供试品溶液置于A瓶中，加盐酸5mL与水2mL，照标准砷斑的制备，自“再加碘化钾试液5mL”起，依法操作。将生成的砷斑与标准砷斑比较，颜色不得更深。化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析As3+AsO33-AsO43-Zn + HClSnCl2 .KIH2AsH3HgBr2试 纸砷 斑H2S +Pb(AC)2棉 花化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析1)标准砷斑用2mL，1g/mL标准砷液相当于2g的砷，制备可得清晰的砷斑。2)反应液中加入碘化钾和氯化亚锡:能将As5+ As3+ ,碘化钾被As5+

29、氧化为碘分子又被氯化亚锡还原为碘离子，它与锌离子能形成稳定的络合物，有利于砷化氢的不断生成。碘化钾和氯化亚锡还能抑制锑化氢的生成（锑化氢也能与溴化汞试纸作用生成锑斑）。氯化亚锡又可与锌作用，在锌粒表面形成锌锡齐，起去极化作用，从而使氢气连续、均匀地发生。化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析 3）锌粒和供试品中可能含有少量硫化物，在酸性条件下产生硫化氢气体，与溴化汞的色斑，干扰试验结果，故用醋酸铅棉花吸收硫化氢。4）醋酸铅棉花的松紧程度应控制。 注意点：1）所生成的砷斑不稳定，应干燥、避光、立即比较。2）有机结合态的砷应破坏后检查（加酸或碱），但温度应低于600C。3

30、）供试品若为铁盐，能消耗碘化钾和氯化亚锡，可加酸性氯化亚锡，使高铁离子还原后检查。化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析 4）供试品（硫化物、亚硫酸盐、硫代硫酸盐）若在酸性条件下生成硫化氢或二氧化硫，与溴化汞试纸作用生成黑色硫化汞和金属汞，可先用硝酸处理，使其氧化为硫酸盐。5）锑盐含量较多时，可改用白田道夫法检查砷,其原理为氯化亚锡在盐酸酸性条件下还原为棕褐色的胶态砷，与一定量的标准砷盐比较，本法的灵敏度为20g（以As2O3计）。化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析（二）二乙基二硫代氨基甲酸银法（二）二乙基二硫代氨基甲酸银法Ag-Ag-D

31、DCDDC法）法） 原理：金属锌与酸作用产生新生态的氢，与微量砷盐反应生成具有挥发性的砷化氢，砷化氢导出后与Ag-DDC作用，生成红色胶态银，同时在相同条件下使一定量标准砷溶液呈色，用目视比色法或在510nm处测吸光度进行比较。化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析As3+AsO33-AsO43-Zn + HClSnCl2 .KIH2AsH3NAg-DDCAg红 色 胶 态AsH3+6Ag-DDC3N+As(DDC)3+6Ag+ 3N.HDDC化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析方法与限量： 取一定量的供试品溶液（或标准砷溶液5.0mL）置

32、于A瓶中，加盐酸5mL与水2mL，再加碘化钾试液5mL与酸性氯化亚锡试液5滴，在室温放置10min后，加锌粒后立即将生成的砷化氢导入盛有Ag-DDC溶液5mL的D管中，将A瓶置25-40 C水浴中，反应45min后，取出D管，添加三氯甲烷至5.0mL，混匀。将供试品溶液D管和对照品溶液D管同置白色背景上，自上而下观察比色）注意：1）加入有机碱可促进反应的进行，USP用0.5% Ag（DDC）的吡啶溶液（灵敏度高达0.5gAs/30mL），ChP2000版用0.25% Ag（DDC）的三乙胺-氯仿溶液(灵敏度略低)。 2）锑盐的干扰小。化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物

33、分析（三）白田道夫法（三）白田道夫法适用对象适用对象：含锑药物。用古蔡法检查砷时，锑盐也被还原为锑化氢，与溴化汞试纸作用产生灰色锑斑，干扰砷斑的检出。原理原理：氯化亚锡在盐酸中将砷盐还原成棕褐色的胶态砷，与一定量标准砷溶液用同法处理后的颜色比较，即可判断供试品的含砷量是否超标。2As3+3SnCl2+6HCl 2As+3SnCl4+6H+化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析（四）次磷酸法（四）次磷酸法 原理 在盐酸酸性条件下，次磷酸还原砷盐为棕色的游离砷，再与一定量的标准砷盐比较。 方法与限量：1）用于硫化物、亚硫酸盐以及含锑药物的砷盐检查，不产生干扰。2）灵敏度较

34、古蔡法低。化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析注意四种检查方法的生成物：注意四种检查方法的生成物： 古蔡法生成的是黄色至棕色的砷斑古蔡法生成的是黄色至棕色的砷斑 AgAg（DDCDDC）法生成的是红色胶态银）法生成的是红色胶态银 白田道夫法生成的是棕褐色的胶态砷白田道夫法生成的是棕褐色的胶态砷 次磷酸法生成的是棕色的游离砷次磷酸法生成的是棕色的游离砷化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析6、硫化物检查法、硫化物检查法 硫化物与盐酸作用产生硫化氢气体，遇醋酸铅试纸产生棕色的硫化铅“硫斑”，与一定量的标准硫化钠溶液在相同条件下产生的硫斑相比较。

35、 仪器同古蔡法的检砷装置，但倒气管不用装醋酸铅棉花，溴化汞试纸改成醋酸铅试纸。化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析7 7、干燥失重测定法、干燥失重测定法 指药物在规定条件下，经干燥后所失的重量，通常以百分率表示，主要用于控制药物中的水分或挥发性物质。测定方法有：（一）（一） 常压恒温干燥法常压恒温干燥法 适用于受热稳定的药物 ，可在105C干燥至恒重， 如药物含水量较多，或熔点较低，应适当降低干燥温度或先于低温下干燥失去大部分水，再提高温度。100%样品重减失的重量干燥失重化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析（二）（二） 干燥剂干燥法干燥

36、剂干燥法 适用于受热易分解或易挥发的药物， 将药物置于干燥器内，利用干燥器内的干燥剂，吸收供试品中的水分，干燥至恒重。 常用干燥剂的吸收能力：五氧化二磷 硅胶 硫酸（三）（三） 减压干燥法减压干燥法 适于受热不稳定、熔点低或难以干燥的药物。 减压条件下，水或其他挥发性物质沸点降低，大大缩短干燥时间和干燥温度。化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析（四）热分析法（四）热分析法 就是在程序升温条件下，研究物质发生了物理或化学的变化（即能量变化）；测定物质的物理化学性质与温度关系的一类仪器分析方法。 物理变化：脱水、挥发、相变（熔化、升华、沸腾等）； 化学变化：分解、氧化、

37、还原等。化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析 1 1、热重分析法（、热重分析法（TGATGA） 在程序控制温度下，测量物质的质量与温度的关系。热重分析仪主要有一个不受温度影响，灵敏度极好的微量分析天平，放在程序升温炉中，将供试品放入天平后，按一定程序升温，并以惰性气体带走挥发性成分，由于挥发性成分的失去，供试品的重量发生改变。以温度为横坐标，重量为纵坐标，可作出一条热重曲线。 特点：1）能准确、快速测定物质的质量变化和变化速度。 2）样品用量少，10mg即可测定，适用于贵重药物或易变质药物。 3）TGA可区别药物所含的是结晶水或吸附水，并可测定结晶水含量。化学与制药

38、工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析2 2、差示热分析法、差示热分析法(DTA)(DTA) 物质在加热过程中，发生物理或化学变化，同时有吸热和放热而影响温度，将样品与一种热容相似的惰性参比物质，同置于一个可控制的加热器中，利用热电偶分别连接供试品和参比物质，并按一定程序升温，测量供试品与参比物质之间的温度差（温度差=T供试品- T参比物质）随温度或时间的变化。 DTA曲线中，吸热反应产生负峰，放热反应产生正峰；物理变化常得到尖峰，而化学变化峰型较宽。化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析 特点：1） 可测定药物的熔点、根据吸热或放热峰的数目、形状、和

39、位置可对样品进行定性分析，并估计纯度2） 样品用量比TGA更少 3） 很多物质在加热过程中会挥发失重，或发生化学反应产生挥发性物质，故DTA和TGA可结合使用。化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析3 3、差示扫描量热法（、差示扫描量热法（DSCDSC） 在整个分析过程中，维持样品与参比物质的温度相同，测定维持在相同温度条件下所需的能量差。当样品发生吸热反应时，温度要下降，必须补充较参比物质更多的能量才能使其温度与参比物质相同。由于供给的能量差相当于样品发生变化时所吸收或释放的能量，记录维持平衡能量即是所需转化能量，所以， DSC较DTA更适合测量物质在物理或化学中焓

40、的变化。 DSC与DTA不同，它是以热流率（mJ/s）为纵坐标，温度或加热时间为横坐标，通常曲线的吸热反应峰向上，放热反应峰向下。化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析 特点：1）峰在温度轴的位置、形状、数目与药物的性质有关，可用于鉴别物质，检查纯度和测定相变温度。峰的面积与反应热焓有关，可估计参与反应物质的量或测定热化学参数。 2）DSC与DTA可用于低共熔杂质的分析。（药物中低共熔杂质的量增多，熔点会降低）。 3）DSC与DTA还可用于药物中无效或低效晶型的检查（不同晶型的药物，其熔点往往不同，在差热曲线熔化吸收峰的位置就不同）。 热分析法检查纯度的前提： 1）杂

41、质量要小，纯度大于98.5% 2）杂质与药物能形成低共熔混合物，并能溶解于熔化的药物 3）无固体溶液形成。化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析8、水分测定法 药物中的水分包括结合水和吸附水，主要采用费休氏法（ChP还收载甲醛法）测定。 原理：用费休试液（碘、二氧化硫、吡啶和甲醇）进行非水溶液中的氧化还原滴定，即利用碘氧化二氧化硫为三氧化硫时需要一定量的水分参加反应。根据消耗碘的量来测定水份的含量。 I2+SO2+H2O 2HI+SO3化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析F=WA B 供试品中水分的含量（）供试品中水分的含量（） 100%（

42、A B） FW 其中：A为供试品所消耗费休氏试液的体积，mL； B为空白所消耗费休氏试液的体积，mL; F为每毫升费休氏试液相当于水的重量，mg W为供试品的质量，mg。 F值在4.0mg/mL上下为宜，3.0mg/mL以下滴定不敏锐。 费休氏试剂的滴定度：化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析9、炽灼残渣检查法 定义：炽灼残渣也称硫酸盐灰分，系指药物（多为有机物）经加热灼烧至炭化，再加硫酸适量并高温炽灼至完全灰化后遗留的金属氧化物或其硫酸盐 。 方法：供试品置恒重的坩埚中，缓缓炽灼至炭化，放冷后加硫酸润湿，低温加热除尽硫酸蒸气后，于高温（700-800C）炽灼至完全

43、灰化（使有机物质破坏分解为挥发性物质逸出，非挥发性无机杂质成为硫酸盐），放冷，称重，再炽灼至恒重。化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析 注意点：1、操作及称重方法： 1）坩埚要事先恒重，精密称定，所得的残渣要恒重； 2）坩埚应斜置，防止暴沸和溅出； 3）有机药物在坩埚中加热开始时应缓缓加热，加入硫酸后也应缓缓加热，防止药物暴沸、溅出和硫酸腐蚀; 4）坩埚炽灼后要放于干燥器中冷却后称重。2、如供试品为重金属，炽灼温度应为500-600C，防止重金属逸失。3、药物的炽灼残渣限量一般为0.1%-0.2%（1g供试品不超过1-2mg）。含氟、钠药物对瓷坩埚有腐蚀，用铂坩埚。

44、化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析例：某药物炽灼残渣：在550 C炽灼至恒重的坩埚重78.5510g，加入样品后共重79.5827g，于550 C下炽灼5h，称重78.5523g，再炽灼30min，称重78.5522g，计算炽灼残渣百分率？解：%100%78.552278.5510100%79.582778.55100.12%残渣与坩埚重空坩埚重炽灼残渣供试品重化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析10、易炭化物检查法 检查药物中易被硫酸（含硫酸94.5%-95.5%，g/g）炭化或氧化而呈色的有机物质，同样与标准比色液比较，借以控制药物

45、中易炭化物的含量。检查时将一定量的供试品加入5mL的硫酸中，振摇溶解后，静置15min，与一定标准比色液比较，不得更深。化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析11、溶液颜色检查法ChP2010收载三种检查方法： 目视比色法(黄色、蓝色、红色原液) 分光光度法 色差计法化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析1、目视比色法： 取一定量的供试品，置于25mL纳氏比色管中，加水溶解至10mL，另取规定色调色号的标准比色液10mL, 置25mL纳氏比色管中,两管同置白色背景，自上而下或平视观察，供试品管所显颜色与对照品管比较，不得更深。标准比色液：由比

46、色用重铬酸钾液、硫酸铜、氯化钴液和水按规定比例配成。2、分光光度法检查有色杂质： 配制一定浓度的供试品溶液，在规定波长测定吸收度，吸收度不得过规定值。3、色差计法： 通过色差计直接测定溶液的透射三刺激值，对溶液颜色进行定量表述和分析。目视法难以判断时使用。化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析12、溶液澄清度检查法 澄清度：检查药品溶液的浑浊程度，可以反映药物溶液中微量不溶性杂质的存在情况，主要用于制备注射剂的原料药或注射剂检查。采用比浊法。 方法：室温下，用水稀释一定浓度的供试品溶液与等量的浊度标准液分别置于配对的比浊管中，浊度标准液制备5min后，在暗室内垂直同置

47、伞棚灯下，照度为1000lx，从水平方向观察比较；用以检查溶液的澄清度或其浑浊程度。除另有规定外，供试品溶解后应立即检视。化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析浊度标准储备液的制备：1.00%的硫酸肼与10%乌洛托品水溶液等容量混合摇匀，于25C避光静置24小时，即得。生成的甲醛腙在水中形成白色浑浊，以不同量的水稀释可得不同浊度的标准液。澄清澄清：供试品溶液的澄清度与所用溶剂相同，或不超过0.5号浊度标准液时为澄清。化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析13、酸碱度检查法（一）酸碱滴定法 eg：检查NaCl的酸碱度（二）指示剂法 eg：纯化水

48、法（三）pH测定法 eg：注射剂等化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析药物中的残留溶剂：指在合成原料药、辅料或制剂生产的过程中使用的，但在工艺中未能完全除去的有机溶剂。Chp中残留溶剂按有机溶剂毒性的程度，分为4类。见p129表3-4。Chp规定残留溶剂的检查方法为GC法。14、残留溶剂测定法化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析五、特殊杂质的检查原理方法五、特殊杂质的检查原理方法 特殊杂质指在该药物的生产和贮存过程中，根据药物的性质、生产方法和工艺条件，可能引入的特有杂质。 特殊杂质的检查方法，主要是根据药物和杂质在理化性质和生理作用的差

49、异来进行。 方法：（一）物理法 （二）化学法 （三）旋光法 （四）分光光度法 （五）色谱法化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析（一）物理法1、臭味和挥发性的差异利用药物中存在的杂质具有特殊臭味，可以从臭味判断该杂质的存在。（如乙醇中杂醇油的检查）检查挥发性药物中的不挥发物，利用药物在室温或加热挥发后，残留残渣，于一定温度烘至恒重，其重量不得超过规定，借以控制不挥发性杂质。2、颜色的差异某些药物无色，而其分解变色产物有色，或在生产过程中引入了有色物质，可通过检查供试品溶液的颜色来控制有色杂质的量。（如磺胺嘧啶中氧化产物偶氮苯的检查：取本品2.0g，加NaOH试液10m

50、L溶解，加水稀释至25mL，溶液应澄清无色，如显色，与黄色3号比色液比较，不得更深。）化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析(C6H10O5)xH2O+H+(C6H10O5)yH+，H2OC12H22O62C6H12O6（ 淀 粉 ）（ 糊 精 ）（ 麦 芽 糖 ）（ 葡 萄 糖 ）3、溶解行为的差异 有的药物可溶于水、有机溶剂或酸、碱中，而其杂质不溶；反之，杂质可溶而药物不溶。如：葡萄糖中检查糊精，用醇中不溶物控制。化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析4、旋光性的差异 测定比旋度（或旋光度）可以用来区别不同的药物，检查杂质；也可以用来测定

51、药物含量。 如：硫酸阿托品中检查莨菪碱。硫酸阿托品为消旋体，无旋光性，而莨菪碱为左旋体。Chp规定测定供试品溶液（50mg/ml）的旋光度不得超过-0.40，以控制莨菪碱的量。化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析5、对光吸收性质的差异 由于药物和杂质的结构不同，因而对光吸收的性质往往有差异，分光光度法灵敏度高，简便，仪器已较普及，因此在药物杂质检查中应用日益广泛。化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析（1）紫外分光光度法 根据药物与杂质结构中紫外吸收光谱的差异，进行杂质检查。1）杂质在某一波长有最大吸收，而药物在此波长无吸收，通过控制供试品

52、溶液在杂质特征吸收波长处的吸收度来控制杂质的量。Eg：检肾上腺素中肾上腺酮(310nm处有吸收)2）杂质与药物紫外吸收光谱重叠，但可改变药物在某两个波长处的吸收度比值来控制杂质的量。（2）比色法（3）红外分光光度法 主要用于检查药物中低效或无效晶型。 化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析（4）原子吸收分光光度法 原子吸收分光光度法利用药物中所含待测元素灯发出的特征谱线通过供试品蒸汽时，被蒸汽中待测元素的基态原子所吸收，通过测定辐射光强度的减弱程度，可以求出供试药物中待测元素的含量。 优缺点：1）专属性强，主要用于金属离子的测定。2）方法准确，取样量少，可分析ng级到

53、pg级的金属元素，速度快。 3）应用范围广，目前可测70种原子。4）一种灯只能测一种元素，价贵。化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析 含量测定方法：1）标准曲线法：在仪器推荐的浓度范围内，制备含待测元素的标准溶液至少3份，浓度依次增加，并分别加入供试品溶液配制中的相应试剂。除另有规定外，一般用去离子水制成水溶液。 测定时，先将去离子水喷入火焰，调读数为0，再将最浓的标准溶液喷入火焰，调读数为满标度；然后依次喷入标准溶液，取每一浓度3次读数的平均值，与相应浓度作标准曲线。按规定制备样品溶液，使待测元素的估计浓度在标准曲线浓度范围内，将供试品喷入火焰，取3次读数的平均值

54、，从标准曲线上查得相应的浓度，计算元素的含量。化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析 杂质检查法：取供试品制备供试溶液；另取等量的供试品，加入限度量的待测元素溶液，制成对照溶液，并将对照溶液喷入火焰，调节仪器使具有合适的读数（a）;在相同条件下喷入供试品溶液，读数为（b）,b值要小于（a-b）。化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析6、吸附和分配性质的差异薄层色谱法：薄层色谱法：最常用于特殊杂质限量检验的一种方法。、灵敏度法： 在一定供试品及检查条件下，不允许有杂质斑存在 。化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析、杂

55、质对照品法根据杂质限量，取一定浓度已知杂质的对照品溶液和供试品溶液，分别点加在同一硅胶（或其它吸附剂）薄层板上，展开和定位后检查，供试品中所含杂质的斑点，不得超过相应的杂质对照斑点。如：枸橼酸乙胺嗪中检查N-甲基哌嗪。 特点：能较为理想地定量和定性，但首先须确认杂质为何物且制备该杂质的对照品。化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析、对照药物法： 当无适合的杂质对照品时，尤其是供试品显示的杂质斑点颜色与主成分斑点颜色有差异，难以判断限量时，可以用于供试品相同的药物作为对照品，此对照药物中所含待检查的杂质需要符合限量要求，且稳定性好。 供试品如显杂质斑点，不得多于对照品药

56、物中杂质斑点数，颜色也不得更深。化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析、高低浓度对比法： 当杂质的结构不能确定，或无杂质的对照品，同时杂质斑点颜色与主成分斑点颜色相同或相近时，可以采用此法。方法：将供试品溶液按限量要求稀释至一定浓度作为对照品溶液，与供试品溶液分别点加于同一薄层板上，展开后，定位，供试品溶液所显杂质斑点不得深于对照溶液所显主斑点颜色。特点：1）当杂质结构不能确定或无杂质的对照品时，可采用此法。2）较简便，易于普及。3）要求杂质与对照品的显色灵敏度应相同或相似。化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析（2）高效液相色谱法、面积归一

57、化法、不加校正因子的主成分自身对照法、加校正因子的主成分自身对照法、内标加校正因子法、外标法化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析 、峰面积归一化法 测量各杂质峰的面积和色谱图上除溶剂峰以外的各色谱峰面积，计算杂质峰面积占总峰面积的百分率。特点：1）不需对照品，简便易行。2）记录图谱的时间应为主峰保留时间的几倍。3）通常只能粗略考察供试品的杂质量，除另有规定外，一般不宜用于微量杂质的检查。化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析不加校正因子不加校正因子主成分自身对照法主成分自身对照法 将供试溶液稀释成一定浓度，作为对照液。分别取供试品溶液和对照品溶液进样，将供试品溶液中各杂质峰面积及其总和，与对照液主成分峰面积比较，以控制供试品中杂质的量。特点：1）简单方便，无须对照品。2）适用于杂质与主成分峰面积相差悬殊时的杂质检查 3）忽略了各杂质与主成分的响应值，可能不同。化学与制药工程学院化学与制药工程学院 2022-4-30药物分析加校正因子的主成分自身对照法加校正