流感病毒的分离鉴定二ppt课件

1、实验十实验十流感病毒的分别鉴定二流感病毒的分别鉴定二1、血细胞凝集实验、血细胞凝集实验2、血细胞凝集抑制实验、血细胞凝集抑制实验 目的：熟习病毒血凝、血凝抑制实验的方法及其运用。目的：熟习病毒血凝、血凝抑制实验的方法及其运用。 原理：流感病毒颗粒外表有血凝素原理：流感病毒颗粒外表有血凝素,具有使鸡、豚鼠具有使鸡、豚鼠等血细胞凝集的才干。把一定浓度的鸡红细胞加到待等血细胞凝集的才干。把一定浓度的鸡红细胞加到待检的鸡胚尿囊液或羊水中，如出现血细胞凝集景象，检的鸡胚尿囊液或羊水中，如出现血细胞凝集景象，即表示有病毒存在；如血凝阳性，那么可进一步用血即表示有病毒存在；如血凝阳性，那么可进一步用血凝抑制

2、实验进展病毒鉴定，流感病毒的血凝性，可被凝抑制实验进展病毒鉴定，流感病毒的血凝性，可被免疫血清中的特异性抗体所抑制，使其失去凝集作用，免疫血清中的特异性抗体所抑制，使其失去凝集作用，借此可用知抗体鉴定未知病毒及病毒的型、亚型。借此可用知抗体鉴定未知病毒及病毒的型、亚型。 实验资料实验资料 (1)接种流感病毒的鸡胚。接种流感病毒的鸡胚。 (2)质量分数为质量分数为05的鸡红细胞悬液。的鸡红细胞悬液。 (3)流感病毒型与亚型免疫血清。流感病毒型与亚型免疫血清。 (4)碘酒，酒精消毒棉球。碘酒，酒精消毒棉球。 (5)灭菌的镊子、剪刀。灭菌的镊子、剪刀。 (6)无菌小试管，毛细滴管，吸管。无菌小试管，

3、毛细滴管，吸管。 (7)生理盐水。生理盐水。 (8)试管、试管架。试管、试管架。 实验方法：实验方法： 1、血细胞凝集实验、血细胞凝集实验 (1)收获尿囊液：鸡胚孵育收获尿囊液：鸡胚孵育3d后后,放放4度冰箱过夜度冰箱过夜,次次日取出鸡胚日取出鸡胚,消毒气室端卵壳消毒气室端卵壳,用小镊子在无大血管用小镊子在无大血管处撕破卵膜处撕破卵膜,以无菌毛细管汲取尿囊液以无菌毛细管汲取尿囊液,放入无菌试放入无菌试管中。管中。 (2)取尿囊液取尿囊液01mL,作作1：10稀释。稀释。(3)取取10支小试管，按给各管参与生理盐水支小试管，按给各管参与生理盐水0.2mL。(4)取取1：10稀释的尿囊液稀释的尿囊

4、液02mL，加人第，加人第1个试管个试管中，混匀后，再吸出中，混匀后，再吸出02mL参与第参与第2个试管中；个试管中；混匀后，从第混匀后，从第2个试管吸出个试管吸出02mL参与第参与第3个试个试管管依次作倍比稀释至第九管，混匀后自第依次作倍比稀释至第九管，混匀后自第9个试管中取出个试管中取出02mL弃掉。这样各管液体量均弃掉。这样各管液体量均为为02mL，从第，从第1-9个试管的尿囊液稀释度为个试管的尿囊液稀释度为1:20，1:40，1:5120，第，第10个试管为生理个试管为生理盐水对看管。盐水对看管。 (5)稀释终了后加人体积分数为稀释终了后加人体积分数为05的压积鸡红的压积鸡红细胞悬液，

5、每管细胞悬液，每管02mL,室温放置室温放置3060mn。 流感病毒血凝实验试管号试管号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10生理盐水生理盐水 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2病毒液病毒液 (1:10) 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 弃弃0.2病毒稀释度病毒稀释度 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 1:2560 1:5120 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 1:2560 1:5120 对对照照0.5%鸡红细胞鸡

6、红细胞 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 摇匀置室温摇匀置室温6090分钟分钟结结 果果 + + + + + + + 试管号试管号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10生理盐水生理盐水 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2病毒液病毒液 (1:10) 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 弃弃0.2病毒稀释度病毒稀释度 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 1:2560 1:5120 1:20 1:40 1:80 1:160 1:

7、320 1:640 1:1280 1:2560 1:5120 对照对照0.5%鸡红细胞鸡红细胞 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 摇匀置室温摇匀置室温6090分钟分钟结结 果果 + + + + + + + (6)结果察看结果察看察看时要轻拿、勿摇，首先察看对看管应无凝集，然察看时要轻拿、勿摇，首先察看对看管应无凝集，然后再察看实验管，各管出现的凝集程度以后再察看实验管，各管出现的凝集程度以“+、“+、“+、“+、“表示，判别规范如下：表示，判别规范如下： “+：全部红细胞凝集，凝集的红细胞铺满管底，：全部红细胞凝集，凝集的红细胞铺满管底，边缘不整齐

8、。边缘不整齐。 “+：大部分红细胞凝集，在管底铺成薄膜状，但尚有少数红细胞不：大部分红细胞凝集，在管底铺成薄膜状，但尚有少数红细胞不凝，在管底中心构成小红点。凝，在管底中心构成小红点。 “+：约有半数红细胞凝集，在管底铺成薄膜，面积较小，不：约有半数红细胞凝集，在管底铺成薄膜，面积较小，不凝集的红细胞在管底中心聚成小圆点。凝集的红细胞在管底中心聚成小圆点。 “+：只需少数红细胞凝集，不凝集的红细胞在管底中心聚成小：只需少数红细胞凝集，不凝集的红细胞在管底中心聚成小圆点，凝集的红细胞在小圆点的周围。圆点，凝集的红细胞在小圆点的周围。 “：不凝集，红细胞沉于管底，呈一边缘整齐的致密圆点。：不凝集，

9、红细胞沉于管底，呈一边缘整齐的致密圆点。 凝集效价：能使红细胞呈“+凝集的病毒最高稀释度为凝集效价，表示含有一个单位血凝抗原。 如表，第6个试管为“+，且病毒稀释度最高，那么该病毒悬液效价为1:640，即该病毒悬液稀释到1：640时，每02mL中含有一个血凝单位，配制4个血凝单位的病毒悬液时，病毒液应稀释成(1：640)X4，即1：160。2、血细胞凝集抑制实验 试试 管管1 待测待测 2 待测待测3 血清对照血清对照4 抗原对照抗原对照5 红细胞对照红细胞对照 生理盐水生理盐水1：5血清血清4u病毒液病毒液0.5鸡红鸡红细胞细胞0.20.20.20.20.20.20.20.20.20.20.20.20.40.2按表参与资料和试剂按表参与资料和试剂 结果察看结果察看先察看先察看3支对看管，如抗原对看管出现完全凝集，血清对照和红支对看管，如抗原对看管出现完全凝集，血清对照和红细胞对照不发生凝集，再察看实验管。细胞对照不发生凝集，再察看实验管。血凝抑制效价：完全抑制红细胞凝集的血清最高稀释度，即该血凝抑制效价：完全抑制红细胞凝集的血清最高稀释度，即该血清的抑制效价。血清的抑制效价。鉴定病