免疫磁珠技术

1、关于免疫磁珠技术现在学习的是第一页，共37页目录目录1 1 免疫磁珠技术简介免疫磁珠技术简介1.1 免疫磁珠的结构与性质1.2 免疫磁珠技术2 2 免疫磁珠技术的应用免疫磁珠技术的应用2.1 IMB技术在食品有害微生物检测中的应用2.2 免疫磁珠与其它检测手段的联用2.3 免疫磁珠技术在其他领域的应用2.4 免疫磁珠技术的优缺点及发展方向现在学习的是第二页，共37页1. 1.免疫磁珠技术简介免疫磁珠技术简介1.1 1.1 免疫磁珠的结构与性质免疫磁珠的结构与性质1.1.1 1.1.1 免疫磁珠的结构免疫磁珠的结构 免疫磁珠（免疫磁珠（IMBIMB），）， 也称免疫磁性微球，也称免疫磁性微球，

2、是一种均匀、是一种均匀、具有超顺磁性及保护性壳的球形小粒子，基本上由载体微具有超顺磁性及保护性壳的球形小粒子，基本上由载体微球和免疫配基结合而成。其核心为顺磁性粒子，核心外层球和免疫配基结合而成。其核心为顺磁性粒子，核心外层包裹一层高分子料，包裹一层高分子料， 最外层是免疫配基。最外层是免疫配基。 现在学习的是第三页，共37页载体微球载体微球 载体微球功能基高分子层磁性物质金属小颗粒（Fe2O3、Fe3O4）如聚乙烯亚胺、聚乙烯醇、聚醋酸乙烯脂、聚丙烯酸、酶类、多糖（淀粉、纤维素、葡聚糖、果胶等）、球蛋白和牛血清白蛋白等，如氨基(-NH2)、羧基(-COOH)、羟基(-OH)，使其表现具有疏水

3、-亲水、非极性-极性、带正电荷-带负电荷等不同的物理性质。 现在学习的是第四页，共37页免疫配基免疫配基 免疫配基通过生物高分子的功能基团结合到磁性载体微球上形成免疫磁珠。由于载体微球制备材料和方法不同，其表现出的物理性质也不同， 从而可结合不同的免疫配基， 如抗原、抗体、凝集素、DNA 和RNA 等。配基必须具有生物专一性的特点， 而且载体微球与配基结合要不影响或改变配基原有的生物学特性， 保证磁珠的特殊识别功能。现在学习的是第五页，共37页1.1.2 1.1.2 免疫磁珠的性质免疫磁珠的性质由于免疫磁珠的大小和形状具有均一性，由于免疫磁珠的大小和形状具有均一性， 从而可使靶从而可使靶物质迅

4、速和有效地结合到磁珠上，也可使生成的新复物质迅速和有效地结合到磁珠上，也可使生成的新复合物在磁场中具有相同的磁响应性，且行为一致合物在磁场中具有相同的磁响应性，且行为一致磁珠的球形结构可消除与不规则形状粒子有关的非特异磁珠的球形结构可消除与不规则形状粒子有关的非特异性结合性结合顺磁性可使磁珠置于磁场时显示其磁性，并做定向移动，顺磁性可使磁珠置于磁场时显示其磁性，并做定向移动， 从磁场移出时磁性消除，从磁场移出时磁性消除， 磁珠分散，磁珠分散， 由此可方便地进行分由此可方便地进行分离和磁性导向离和磁性导向保护性壳可防止磁性内核漏出或被载液腐蚀；保护性壳可防止磁性内核漏出或被载液腐蚀； 免疫配基可

5、特异性地结合反应体系中相应的抗原、抗免疫配基可特异性地结合反应体系中相应的抗原、抗体、核酸等生物活性物质。体、核酸等生物活性物质。现在学习的是第六页，共37页1.2 1.2 免疫磁珠技术免疫磁珠技术免疫磁珠免疫磁珠( immunomagnetic bead, IMB)( immunomagnetic bead, IMB)技术：技术：是一种以特异的抗原抗体反应为基础的免疫学检测和分离技术。它是以抗体包被的磁珠为载体，通过抗体与反应介质中特异性抗原结合，形成抗原抗体复合物，此复合物在外加磁场的作用下发生定向移动，从而达到分离抗原的目的。基本原理：基本原理：磁性微球经过一定处理后,可将抗体结合到磁珠

6、上,形成免疫磁性微球,免疫磁性微球的抗体与特异性抗原结合形成抗原微球复合物,该复合物在磁场中具有与其它组分不同的磁响应性,在磁力作用下,该复合物发生力学移动,从而达到分离抗原的目的。现在学习的是第七页，共37页现在学习的是第八页，共37页2.1 2.1 食品有害微生物检测中的应用食品有害微生物检测中的应用免疫磁珠技术与常规检验方法相比具有显著的免疫磁珠技术与常规检验方法相比具有显著的优点，它能从样品中优点，它能从样品中迅速、有选择性地分离出迅速、有选择性地分离出目的微生物，有效地减少了背景的干扰，提高目的微生物，有效地减少了背景的干扰，提高了精准性。了精准性。还能还能捕获受损伤的靶细菌捕获受损

7、伤的靶细菌，而目前所用的几种常而目前所用的几种常规方法则不具备这样的能力。目前，免疫磁珠技规方法则不具备这样的能力。目前，免疫磁珠技术已经广泛应用于食品样品中致病微生物的检测。术已经广泛应用于食品样品中致病微生物的检测。2 .免疫磁珠技术的应用现在学习的是第九页，共37页2.1.1 2.1.1 大肠杆菌大肠杆菌O157O157的检测的检测 传统分离E.coli O157 H7所采用的直接分离法存在着鉴别力差、抑制杂菌能力弱、耗时长、工作量大等缺点。采用免疫磁珠技术，能够快速地从各种食品样品中分离富集E.coli O157 H7，满足流行病学的研究要求和提高控制力度。 现在这种免疫磁珠的方法已经

8、被英国公共健康服务实验室认定为标准的分离方法，我国也已将免疫磁珠法对大肠杆菌O157的检测纳入国家标准（GB/T 4789.36-2008）和出入境检验检疫行业标准(SN/T 1059.5-2006)。现在学习的是第十页，共37页 检样25g(mL)+225mL改良EC肉汤（mEC+n），均质225mL 免疫磁珠捕获涂布CT-SMAC平板和改良CHROMagar O157弧菌显色琼脂平板挑取可疑菌落5个10个，氧化酶阴性，革兰氏阴性杆菌接种TSI MUG-LST 阳性GB/T 4789.36-2008 GB/T 4789.36-2008 免疫磁珠捕获法检测程序免疫磁珠捕获法检测程序 阴性 血清

9、学试验 非O157细菌 生化试验 报告36 1oC18h24h36 1oC36 1oC18h24h18h24h现在学习的是第十一页，共37页增菌增菌免疫磁珠捕获与分离免疫磁珠捕获与分离 1.1.将将EppendorffEppendorff管按样品和质控菌株进行编号，每个样品使管按样品和质控菌株进行编号，每个样品使用用1 1支支EppendorffEppendorff管，然后插人到磁板架上。在漩涡混管，然后插人到磁板架上。在漩涡混合器上轻轻振荡合器上轻轻振荡E. coli O157E. coli O157免疫磁珠溶液后，用开盖器免疫磁珠溶液后，用开盖器打开每支打开每支EppendorffEppe

10、ndorff管的盖子，每管加人管的盖子，每管加人20 L E. coli 20 L E. coli 01570157免疫磁珠悬液。免疫磁珠悬液。 2.2.取取mEC+nmEC+n肉汤增菌培养物肉汤增菌培养物1 mL1 mL，加人到，加人到EppendorffEppendorff管管中，盖上盖子，然后轻微振荡中，盖上盖子，然后轻微振荡10 s10 s。每个样品更换。每个样品更换1 1支加样支加样吸头，质控菌株必须与样品分开进行，避免交叉污染吸头，质控菌株必须与样品分开进行，避免交叉污染。 具体操作步骤现在学习的是第十二页，共37页 3. 3.结合结合: :在在18183030环境中，将上述环境中

11、，将上述EppendorffEppendorff管连同管连同磁板架放在磁板架放在Dynal MXlDynal MXl样品混合器上转动或用手轻微转样品混合器上转动或用手轻微转10 min10 min，使，使E. coli O157E. coli O157与免疫磁珠充分接触。与免疫磁珠充分接触。 4. 4.捕获捕获: :将磁板插人到磁板架中浓缩磁珠。在将磁板插人到磁板架中浓缩磁珠。在3 min3 min内不断内不断地倾斜磁板架，确保悬液中与盖子上的免疫磁珠全部被地倾斜磁板架，确保悬液中与盖子上的免疫磁珠全部被收集起来，此时，在收集起来，此时，在EppendorffEppendorff管壁中间明显可

12、见圆形或管壁中间明显可见圆形或椭圆形棕色聚集物。椭圆形棕色聚集物。 5.5.吸取上清液吸取上清液: :取取1 1支无菌加长吸管，从免疫磁珠聚集物对支无菌加长吸管，从免疫磁珠聚集物对侧深人液面，轻轻吸走上清液。当吸到液面通过免疫磁侧深人液面，轻轻吸走上清液。当吸到液面通过免疫磁珠聚集物时，应放慢速度，以确保免疫磁珠不被吸走。珠聚集物时，应放慢速度，以确保免疫磁珠不被吸走。如吸取的上清液内含有磁珠，则应将其放回到如吸取的上清液内含有磁珠，则应将其放回到EppendorffEppendorff管中，并重复管中，并重复4步骤。每个样品换用步骤。每个样品换用1 1支无菌加支无菌加长吸管。长吸管。现在学习

13、的是第十三页，共37页 6. 6.洗涤洗涤: :洗涤免疫磁珠混合物。重复上述步骤洗涤免疫磁珠混合物。重复上述步骤 4 6 4 6 。 7. 7.重复上述步骤重复上述步骤4 5 4 5 。 8. 8.免疫磁珠悬浮免疫磁珠悬浮: :将免疫磁珠重新悬浮在将免疫磁珠重新悬浮在100 L PBS-100 L PBS-Tween 20Tween 20洗液中。洗液中。 9.9.涂布平板涂布平板: :用漩涡混合器将免疫磁珠混匀，用加样器用漩涡混合器将免疫磁珠混匀，用加样器各取各取50 L50 L免疫磁珠悬液分别转移至免疫磁珠悬液分别转移至CT-SMACCT-SMAC平板和改平板和改良良CHROMagar O1

14、57CHROMagar O157弧菌显色琼脂平板一侧，然后用无弧菌显色琼脂平板一侧，然后用无菌涂布棒将免疫磁珠涂布平板的一半，再用接种环划线接菌涂布棒将免疫磁珠涂布平板的一半，再用接种环划线接种平板的另一半。待琼脂表面水分完全吸收后，翻转平板种平板的另一半。待琼脂表面水分完全吸收后，翻转平板，于，于3636士士1 01 0培养培养18 h-24 h 18 h-24 h 。现在学习的是第十四页，共37页菌落识别菌落识别 在在CT-SMACCT-SMAC平板上，典型菌落为不发酵山梨醇的圆形、光滑、较小平板上，典型菌落为不发酵山梨醇的圆形、光滑、较小的无色菌落，中心呈现较暗的灰褐色的无色菌落，中心呈

15、现较暗的灰褐色; ;发酵山梨醇的菌落为红色发酵山梨醇的菌落为红色; ;在改在改CHROMagarO157CHROMagarO157弧菌显色琼脂平板上为圆形、较小的菌落，中心呈淡弧菌显色琼脂平板上为圆形、较小的菌落，中心呈淡紫色一紫红色，边缘无色或浅灰色。紫色一紫红色，边缘无色或浅灰色。初步生化试验初步生化试验: : 在在CT-SMACCT-SMAC和改良和改良CHROMagarO157CHROMagarO157弧菌显色琼脂平板上挑弧菌显色琼脂平板上挑取取5 5个个1010个典型或可疑菌落，分别接种个典型或可疑菌落，分别接种TSITSI琼脂，同时接种琼脂，同时接种MUG-MUG-LSTLST肉汤

16、，于肉汤，于3636士士1 1培养培养18h24h18h24h。必要时进行氧化酶试验和。必要时进行氧化酶试验和革兰氏染色。在革兰氏染色。在TSITSI琼脂中，典型菌株为斜面与底层均呈阳性反应琼脂中，典型菌株为斜面与底层均呈阳性反应呈黄色，产气或不产气，不产生硫化氢呈黄色，产气或不产气，不产生硫化氢(H2S)(H2S)。置。置MUG-LSTMUG-LST肉汤管肉汤管于长波紫外灯下观察，无荧光产生者为阳性结果，有荧光产生者为阴性结于长波紫外灯下观察，无荧光产生者为阳性结果，有荧光产生者为阴性结果果; ;对分解乳糖且无荧光的菌株，在营养琼脂平板上分纯，于对分解乳糖且无荧光的菌株，在营养琼脂平板上分纯

17、，于3636士士1 1培养培养18h24h18h24h，并进行鉴定。，并进行鉴定。现在学习的是第十五页，共37页大肠杆菌大肠杆菌O157O157的检测的检测Fratamico等将兔抗E.coli O157 H7多克隆抗体连接到羊抗兔IgG包被的磁珠上，从食物增菌培养液中分离O157H7菌株，再将带菌的磁珠接种到培养基上，加入荧光素标记的O157H7抗血清，在荧光显微镜下观察，此法敏感性为10cfu/mL增菌培养液。Decory等建立了免疫磁珠-免疫脂质体（IMB/IL）荧光试验方法，可在8h内快速检测出多种液态样品（水样、苹果汁、苹果酒）中低至1cfu/mL的E. coli O157 H7，而

18、传统微生物学方法不能从阴性样本中区分出E. coli O157 H7感染样本。 现在学习的是第十六页，共37页2.1.2 2.1.2 单核细胞增生李斯特菌的检测单核细胞增生李斯特菌的检测 传统的单增李斯特菌检测方法检测周期长，约514d，步骤繁琐且灵敏度低，而IMB技术的优点在于在较低的菌液浓度时也可以通过免疫磁珠的富集作用进行检测，缩短了检测时间并进一步降低了单增李斯特菌的检测限。 2008年，我国将免疫磁珠检测单核细胞增生李斯特菌的方法纳入了出入境检验检疫行业标准中(SN/T 0184.3-2008)。现在学习的是第十七页，共37页 检样25g(mL)对225mLFB1増菌液（30 士1

19、，24h士1h） 1mL转种10mL FB2増菌液（ 35 ，24h士1h）通过免疫磁珠捕获李斯特菌，然后再用灭菌缓冲液洗涤用0.1mL的灭菌缓冲液重新制成悬液吸取50uL免疫磁珠悬液划线于CHROMagar 显色培养基，OXA/PALCAM琼脂平板（35 +1 ,24h28h) 各挑选5个典型菌落接种于TSA-YE琼脂平板，纯培养 鉴定和确认试验 单增李斯特菌的检测方法现在学习的是第十八页，共37页 1 1样品制备样品制备 2 2增菌增菌 3 3免疫磁珠分离免疫磁珠分离(IMS(IMS） 1)1)免疫捕获免疫捕获混增菌培养液混增菌培养液. .沉淀所有的粗糙食物残渣沉淀所有的粗糙食物残渣. .

20、从增菌培养液从增菌培养液中移取中移取1mL1mL上层液体上层液体( (要尽可能避免移取到食物颗粒和脂肪要尽可能避免移取到食物颗粒和脂肪颗粒颗粒) )加人加人EppendorfEppendorf管中管中. .加加20L20L准备好的免疫磁珠。在旋准备好的免疫磁珠。在旋涡混合器上混合该悬液涡混合器上混合该悬液。现在学习的是第十九页，共37页 2 2）分离）分离将将EppendorfEppendorf管固定在磁架的管孔中。管固定在磁架的管孔中。1801800 0轻缓摆动磁架轻缓摆动磁架5 5次次-6-6次次, ,使免疫磁珠聚集到磁极。小心地打开磁架上的使免疫磁珠聚集到磁极。小心地打开磁架上的Eppe

21、ndorfEppendorf管管盖管管盖, ,从磁极对面一侧慢慢吸出液体，注意不要从磁极对面一侧慢慢吸出液体，注意不要接触管壁上的磁珠。每一个样品换一次枪头接触管壁上的磁珠。每一个样品换一次枪头; ;加加1mI1mI灭菌的灭菌的PBSPBS，并重新盖好盖子，并重新盖好盖子. .将磁极从支架上移走，将磁极从支架上移走，1801800 0轻缓摆轻缓摆动磁架动磁架5 5次一次一6 6次次, ,使管内各成分混合使管内各成分混合, ,后重新将磁极放回到支后重新将磁极放回到支架上。重复该清洗步骤几次。将离心管从磁性分离器上移开架上。重复该清洗步骤几次。将离心管从磁性分离器上移开. .并加并加100L100

22、L灭菌的灭菌的PBSPBS到管中，重悬磁珠。如果实验室没有到管中，重悬磁珠。如果实验室没有磁性分离器磁性分离器. .，可以用手摇代替，可以用手摇代替. . 4.4.分离培养分离培养 1 1）分离培养）分离培养现在学习的是第二十页，共37页 吸取吸取50L50L免疫磁珠悬液免疫磁珠悬液. .加到显色培养基及任一选择加到显色培养基及任一选择性培养基性培养基OXAOXA、PALCAMPALCAM琼脂平板上琼脂平板上. .用无菌接种环划用无菌接种环划线线.35.35士士1 1培养培养22h-48h22h-48h。 2 2）筛选）筛选李斯特氏菌在李斯特氏菌在CHROMagarCHROMagar显色培养基

23、上菌落为蓝色显色培养基上菌落为蓝色. .且在其周围形成一个晕环。李斯特氏菌在且在其周围形成一个晕环。李斯特氏菌在OXAOXA琼脂平板上生琼脂平板上生长长22h22h后菌落呈现黑色后菌落呈现黑色. .直径为直径为1mm.1mm.在其周围形成一个在其周围形成一个黑色环。培养黑色环。培养48h48h，菌落仍呈黑色，菌落仍呈黑色. .直径直径2mm-3mm.2mm-3mm.除除在菌落周围有一环外在菌落周围有一环外. .在菌落中心部位的深层也形成黑点在菌落中心部位的深层也形成黑点。李斯特氏菌在。李斯特氏菌在PALCAMPALCAM琼脂平板上与在琼脂平板上与在()XA()XA琼脂平板琼脂平板上菌落相似。在

24、上菌落相似。在CHROMagarCHROMagar显色培养基及显色培养基及OXAOXA或或PALCAMPALCAM琼脂平板上挑取琼脂平板上挑取5 5个或更多可疑菌落个或更多可疑菌落. .接种于接种于TSA-YETSA-YE琼脂平板上琼脂平板上. .纯培养后进鉴定。纯培养后进鉴定。 5.5.鉴定和确认鉴定和确认现在学习的是第二十一页，共37页单核细胞增生李斯特氏菌的检测单核细胞增生李斯特氏菌的检测 Skjerve等通过包被单克隆抗体的磁珠从不同食物样品中分离李斯特菌，采用将磁珠接种到琼脂平板培养的方法进行菌株鉴定，此法的敏感性为102104cfu/mL样品。Hudson等研究表明，将免疫磁珠技术

25、与PCR结合，24h内即可检出火腿中的单增李斯特菌。现在学习的是第二十二页，共37页2.1.3 2.1.3 沙门氏菌的检测沙门氏菌的检测例1：Notzon等用IMB-荧光PCR检测肉类中的沙门氏菌，实验包括非选择性增菌、免疫磁珠分离、DNA提取及PCR扩增，1213h即可完成检测过程，IMB-荧光PCR在检测自然感染肉类和人工感染肉类都具有较高的敏感性和特异性。例2：Blackburn 等将用生物素标记的抗沙门菌多价多克隆抗体连接到链霉亲和素包被的磁珠上，以此试剂检测从不同食物中提取的活沙门菌。此法的敏感性可达105cfu/g 食物，总的检测时间从5d减少至12d。现在学习的是第二十三页，共3

26、7页IMBIMB技术的优点技术的优点IMB技术适用于各类食品基质中的沙门氏菌的快速检测，能快速有效富集食品基质中的目标病原菌，且有良好的灵敏度和特异性，检测限可达到110cfu/25g;在检测时间方面可将常规检测方法中的72小时检测周期缩短至40小时，而且能有效减轻过程交叉污染;筛选结果既可以与常规的细菌生化和血清学联用，也可以和显色培养基、荧光PCR以及微生物全自动鉴定仪器等方法联用，为食源性致病菌的检测和鉴定提供了有效的快速筛选技术。现在学习的是第二十四页，共37页2.1.4 2.1.4 金黄色葡萄球菌的检测金黄色葡萄球菌的检测例1：陈伶俐等将人IgG结合到磁珠上，用该磁珠对样品中的金黄葡

27、萄球菌进行了快速分离检验。取适量免疫磁珠，加入金黄葡萄球菌菌液中，磁场下分离磁珠，将分离前后的菌液及磁珠涂平板，并用大肠杆菌、白葡萄球菌等作对照。结果用此磁珠分离后，只有金黄葡萄球菌的浓度有明显的降低。对磁珠所涂平板的菌落进行鉴定，证明为金黄葡萄球菌。应用此法分离检验此菌，富集速度快，灵敏度高，效果好。例2：刘琳琳利用自制的金属螯合免疫磁珠来检测食品中金黄色葡萄球菌，该法能够在30min内富集检测金黄色葡萄球菌且检测低限可达100 CFU，同时磁珠可保持活性达3周以上。现在学习的是第二十五页，共37页2.1.5 2.1.5 副溶血性弧菌的检测副溶血性弧菌的检测Hara-Kudo等利用IMS和显

28、色培养基分离贝类中产TDH的副溶血性弧菌O3:K6。Datta等利用副溶血性弧菌ATCC17802制备针对极鞭毛的单克隆抗体,这将有益于快速检测从环境来源的副溶血性弧菌。张凡非等利用IMS分离环境及食品中产生TDH副溶血性弧菌，分别从1份海水、1份海泥和3份蛤肉中检出了神奈川现象阳性,并产生耐热溶血毒素的副溶血性弧菌,血清型为03:K6。现在学习的是第二十六页，共37页IMBIMB技术优点技术优点该方法与一般的细菌培养分离法相比,极大地提高了环境样品及食品中病原性副溶血性弧菌的检出率。利用IMS可有效地吸附、浓缩大量样品中的少量病原微生物, IMS为难于从环境及食品中分离病原性副溶血性弧菌的问

29、题提供一种有效手段。现在学习的是第二十七页，共37页2.1.6 2.1.6 其他致病菌的检测其他致病菌的检测志贺氏菌例：Islam等应用O抗原特异性单克隆抗体包被免疫磁珠，快速检测粪便中的疾痢志贺菌和福氏志贺菌。分离出的志贺菌株用PCR扩增方法进行鉴定。此种免疫磁珠分离与PCR联合法检测志贺菌，较传统的培养法敏感、快速(7 h)。小肠结肠炎耶尔森氏菌例：Kapperud等用抗小肠结肠炎耶尔森氏菌血清抗体包被磁性微球，从食物和水样中分离，并能将小肠结肠炎耶尔森氏菌与假结核耶尔森氏菌和非致病性耶尔森氏菌区别开来。现在学习的是第二十八页，共37页2.22.2免疫磁珠与其它检测手段的联用免疫磁珠与其它

30、检测手段的联用2.2.1 2.2.1 免疫磁珠与免疫磁珠与PCRPCR的联用的联用 鉴于鉴于PCR PCR 技术灵敏度较低这一缺点，将免疫磁珠技术技术灵敏度较低这一缺点，将免疫磁珠技术和和PCR PCR 技术相结合，建立了新的检测系统技术相结合，建立了新的检测系统 磁免疫磁免疫PCRPCR。例如：它以李斯特氏菌单抗包被磁珠，对样品进行前。例如：它以李斯特氏菌单抗包被磁珠，对样品进行前处理，将菌进行富集裂解，再以处理，将菌进行富集裂解，再以iap iap 基因的保守区域设计基因的保守区域设计引物进行引物进行PCRPCR结果显示该方法具有良好的特异性，而且结果显示该方法具有良好的特异性，而且十分灵

31、敏。十分灵敏。 现在学习的是第二十九页，共37页2.2.2 2.2.2 免疫磁珠与免疫磁珠与ELISAELISA的联用的联用 利用磁性微球，并以兔抗甘草蛋白利用磁性微球，并以兔抗甘草蛋白IgGIgG抗体致敏，制备抗体致敏，制备特异性捕获甘草特征蛋白的免疫磁性微球。以生物素标记特异性捕获甘草特征蛋白的免疫磁性微球。以生物素标记抗体为示踪抗体，结合辣根过氧化物酶标亲和素建立抗体为示踪抗体，结合辣根过氧化物酶标亲和素建立ELISAELISA检测系统，用于甘草药材和含甘草中成药中甘草检测系统，用于甘草药材和含甘草中成药中甘草蛋白的分析。结果蛋白的分析。结果 用该方法对甘草药材和中成药中甘用该方法对甘草

32、药材和中成药中甘草蛋白抗原检测，检测灵敏度草蛋白抗原检测，检测灵敏度10ng10ngmLmL。免疫磁性捕获。免疫磁性捕获ELISAELISA检测技术方便、快速、准确，为生药的品种鉴定及检测技术方便、快速、准确，为生药的品种鉴定及中成药的质量控制提供一种新方法中成药的质量控制提供一种新方法。 现在学习的是第三十页，共37页2.2.3 2.2.3 免疫磁珠与发光检测手段的联用免疫磁珠与发光检测手段的联用 发光手段分析包括荧光免疫分析、电化学发光分析等。发光手段分析包括荧光免疫分析、电化学发光分析等。 免疫磁珠荧光微球现在学习的是第三十一页，共37页2.3 IMB2.3 IMB技术在其他领域中的应用

33、技术在其他领域中的应用2.3.12.3.1免疫检测免疫检测 IMB IMB技术不仅应用于食品中有害微生物的检测，它在医学技术不仅应用于食品中有害微生物的检测，它在医学领域也有广阔的应用前景，它可以检测肿瘤细胞，如骨髓领域也有广阔的应用前景，它可以检测肿瘤细胞，如骨髓中肿瘤细胞的检测和淋巴结中肿瘤细胞的检测。另外这种中肿瘤细胞的检测和淋巴结中肿瘤细胞的检测。另外这种技术还可以对肿瘤进行磁导向治疗和免疫磁性净化治疗。技术还可以对肿瘤进行磁导向治疗和免疫磁性净化治疗。现在学习的是第三十二页，共37页2.3.2 2.3.2 细胞分离细胞分离细胞分离是免疫磁珠目前应用最主要的一个方面，传细胞分离是免疫磁珠目前应用最主要的一个方面，传统细胞分离技术有的比较费时，有的十分昂贵，由于统细胞分离技术有的比较费时，有的十分昂贵，由于免疫磁珠技术分离细胞时只需要抗体和磁铁，既简便免疫磁珠技术分离细胞时只需要抗体和磁铁，既简便灵敏又经济快捷。灵敏又经济快捷。分离细胞有两种方式，用免疫磁珠直接从细胞混合液中分离细胞有两种方式，用免疫磁珠直接从细胞混合液中分离靶细胞的方法称为分离靶细胞的方法称为阳性分离阳性分离，用免疫磁珠去除无关细胞用免疫磁珠去除无关细胞使靶细胞得以纯化的方法称为使靶细胞得以纯化的方法称为阴性分离阴性分离。马东初用马东初用GPG