第二十章 生物制品分析llqppt课件

1、生物制品生物制品: 以微生物、细胞、动物或人源组织和体液等以微生物、细胞、动物或人源组织和体液等为原料，运用传统技术或现代生物技术制成。为原料，运用传统技术或现代生物技术制成。一疫苗类一疫苗类二抗病毒及抗毒血清类药物免疫血清类二抗病毒及抗毒血清类药物免疫血清类三血液制品三血液制品四重组四重组DNA制品制品五诊断制品五诊断制品一疫苗类一疫苗类用病毒或立克次体接种于动物、鸡胚，或经组织培用病毒或立克次体接种于动物、鸡胚，或经组织培育后加以处置制造而成。育后加以处置制造而成。 疫苗保管了病原菌刺激动物体免疫系统的特性。疫苗保管了病原菌刺激动物体免疫系统的特性。当动物体接触到这种不具损伤力的病原菌后，

2、免疫当动物体接触到这种不具损伤力的病原菌后，免疫系统便会产生一定的维护物质，如免疫激素、活性系统便会产生一定的维护物质，如免疫激素、活性生理物质、特殊抗体等；当动物再次接触到这种病生理物质、特殊抗体等；当动物再次接触到这种病原菌时，动物体的免疫系统便会依循其原有的记忆，原菌时，动物体的免疫系统便会依循其原有的记忆，制造更多的维护物质来阻止病原菌的损伤。制造更多的维护物质来阻止病原菌的损伤。1、细菌类疫苗、细菌类疫苗2、病毒类疫苗、病毒类疫苗3、结合疫苗、结合疫苗4、双价疫苗及多价疫苗、双价疫苗及多价疫苗一疫苗类一疫苗类 1、细菌类疫苗、细菌类疫苗 由有关细菌、螺旋体或其衍生物制成的减由有关细菌

3、、螺旋体或其衍生物制成的减毒活疫苗、灭活疫苗、重组毒活疫苗、灭活疫苗、重组DNA疫苗、亚单疫苗、亚单位疫苗。位疫苗。 皮内注射用卡介苗、伤寒皮内注射用卡介苗、伤寒Vi多糖疫苗、吸多糖疫苗、吸附破伤风疫苗、乙型脑炎灭活疫苗、乙型脑附破伤风疫苗、乙型脑炎灭活疫苗、乙型脑炎减毒活疫苗、人用狂犬疫苗等。炎减毒活疫苗、人用狂犬疫苗等。一疫苗类一疫苗类 2、病毒类疫苗、病毒类疫苗 由病毒、衣原体、立克次体或其衍生物由病毒、衣原体、立克次体或其衍生物制成的减毒活疫苗、灭活疫苗、重组制成的减毒活疫苗、灭活疫苗、重组DNA疫苗、亚单位疫苗。疫苗、亚单位疫苗。 口服脊髓灰质炎减毒活疫苗、麻疹减毒口服脊髓灰质炎减毒

4、活疫苗、麻疹减毒活疫苗、风疹减毒活疫苗、腮腺炎减毒活活疫苗、风疹减毒活疫苗、腮腺炎减毒活疫苗等。疫苗等。 3、结合疫苗、结合疫苗 两种或两种以上疫苗原液按特定两种或两种以上疫苗原液按特定比例配制成的具有多种免疫原性的比例配制成的具有多种免疫原性的灭活疫苗或活疫苗。灭活疫苗或活疫苗。 伤寒副伤寒甲乙结合疫苗、吸附伤寒副伤寒甲乙结合疫苗、吸附百白破结合疫苗、麻疹腮腺炎结合百白破结合疫苗、麻疹腮腺炎结合减毒疫苗等。减毒疫苗等。 4、双价疫苗及多价疫苗、双价疫苗及多价疫苗 两种或两种以上同一种但不同型或群抗原合两种或两种以上同一种但不同型或群抗原合并组成的疫苗。并组成的疫苗。 双价肾综合症出血热灭活疫

5、苗等。双价肾综合症出血热灭活疫苗等。二抗毒素及抗毒血清免疫血清类二抗毒素及抗毒血清免疫血清类抗毒素抗毒血清：用细菌类毒素或毒素免疫马抗毒素抗毒血清：用细菌类毒素或毒素免疫马或其他大动物所获得的免疫血清或其他大动物所获得的免疫血清 破伤风抗毒素、白喉抗毒素和肉毒抗毒素等破伤风抗毒素、白喉抗毒素和肉毒抗毒素等二免疫血清类二免疫血清类抗菌抗病毒血清：用细菌、病毒本身免抗菌抗病毒血清：用细菌、病毒本身免疫马或其他大动物所获得的免疫血清疫马或其他大动物所获得的免疫血清 抗蝮蛇毒血清、抗五步蛇毒血清、抗银环抗蝮蛇毒血清、抗五步蛇毒血清、抗银环蛇毒血清、抗眼镜蛇毒血清、抗炭疽血清、蛇毒血清、抗眼镜蛇毒血清、

6、抗炭疽血清、抗狂犬病血清抗狂犬病血清l继续时间短，主要用治疗和紧急预防继续时间短，主要用治疗和紧急预防三血液制品三血液制品 由安康人的血浆或经特异免疫由安康人的血浆或经特异免疫的人血浆，经分别、提纯或由重组的人血浆，经分别、提纯或由重组DNA技术制成的血浆蛋白组分，以技术制成的血浆蛋白组分，以及血液细胞有构成分。及血液细胞有构成分。 人血白蛋白、人免疫球蛋白、人血白蛋白、人免疫球蛋白、乙型肝炎人免疫球蛋白等。乙型肝炎人免疫球蛋白等。四重组四重组DNA制品制品 四重组四重组DNA制品制品 1、细胞因子类：重组人干扰素等、细胞因子类：重组人干扰素等 2、生长因子类：重组人表皮生长因子等、生长因子类

7、：重组人表皮生长因子等 3、激素类：重组人生长激素等、激素类：重组人生长激素等 4、酶类：注射用重组链激酶等、酶类：注射用重组链激酶等 5、疫苗：重组乙型肝炎疫苗等、疫苗：重组乙型肝炎疫苗等 6、单克隆抗体：注射用抗人、单克隆抗体：注射用抗人T细胞细胞CD3鼠单抗鼠单抗五诊断制品五诊断制品 用于检测相应的抗原、抗体或机体免疫形状用于检测相应的抗原、抗体或机体免疫形状的制品。的制品。 毒素、诊断血清、分型血清和因子血清等。毒素、诊断血清、分型血清和因子血清等。分为：分为： 1 1、体外诊断制品、体外诊断制品 2 2、体内诊断制品、体内诊断制品一需进展相对分子质量的测定一需进展相对分子质量的测定

8、大部分为大分子物质如蛋白质、多肽、大部分为大分子物质如蛋白质、多肽、核酸、多糖类等，其相对分子质量普通为几核酸、多糖类等，其相对分子质量普通为几千至几十万。对大分子的生物制品而言，即使千至几十万。对大分子的生物制品而言，即使组分一样，往往由于相对分子质量不同而产生组分一样，往往由于相对分子质量不同而产生不同的生理活性。所以，生物制品常需进展相不同的生理活性。所以，生物制品常需进展相对分子质量的测定。对分子质量的测定。一、生物制品分析的特点一、生物制品分析的特点第二节第二节 生物制品分析特点及质量要求生物制品分析特点及质量要求二需检查生物活性二需检查生物活性 在制备多肽或蛋白质类药物时，有时因工

9、在制备多肽或蛋白质类药物时，有时因工艺条件的变化，导致活性多肽或蛋白质失活。艺条件的变化，导致活性多肽或蛋白质失活。因此，对这类生物制品除了用通常采用的理化因此，对这类生物制品除了用通常采用的理化法检验外，尚需用生物检定法进展检定，以证法检验外，尚需用生物检定法进展检定，以证明其生物活性。明其生物活性。三需做平安性检查三需做平安性检查 由于生物制品的性质特殊，消费工艺复杂，由于生物制品的性质特殊，消费工艺复杂，易引入特殊杂质，故生物制品常需做平安性检易引入特殊杂质，故生物制品常需做平安性检查，如热原检查、过敏实验、异常毒性实验等。查，如热原检查、过敏实验、异常毒性实验等。四需做效价测定四需做效

10、价测定 生化制品多数可经过含量测定，以阐明其生化制品多数可经过含量测定，以阐明其主药的含量。但对某些药物需进展效价测定或主药的含量。但对某些药物需进展效价测定或酶活力测定，以阐明其有效成分含量的高低。酶活力测定，以阐明其有效成分含量的高低。五要用生化法确证构造五要用生化法确证构造 在大分子生物药物中，由于有效构造或相在大分子生物药物中，由于有效构造或相对分子质量不确定，其构造确实证很难沿用元对分子质量不确定，其构造确实证很难沿用元素分析、红外、紫外、核磁、质谱等方法加以素分析、红外、紫外、核磁、质谱等方法加以证明，往往还要用生化法如氨基酸序列分析等证明，往往还要用生化法如氨基酸序列分析等方法加

11、以证明。方法加以证明。一来源于生物体一来源于生物体二制造过程涉及生物资料和生物学特征二制造过程涉及生物资料和生物学特征三工艺存在易变性和平安性问题三工艺存在易变性和平安性问题二、生物制品消费的特点二、生物制品消费的特点危险要素：异源物质、不稳定、易受微生物污染危险要素：异源物质、不稳定、易受微生物污染全程质量控制：原资料、消费过程、最终产品全程质量控制：原资料、消费过程、最终产品 1严厉遵守严厉遵守GMP规范规范 2建立完善的制造检定规程建立完善的制造检定规程 3建立各消费工序相顺应的检定方法、规建立各消费工序相顺应的检定方法、规范操作细那么范操作细那么SOP三、生物制品的全程质量控制三、生物

12、制品的全程质量控制2019版三部工程：版三部工程： 1. 品名中文通用称号、英文称号、汉语拼音品名中文通用称号、英文称号、汉语拼音 2. 定义、组成及用途定义、组成及用途 3. 根本要求根本要求 4. 制造制造 5. 检定原液、半废品、废品检定原液、半废品、废品 6. 保管运输及有效期保管运输及有效期 7. 运用阐明仅预防类含此项运用阐明仅预防类含此项生物制质量量控制的重点：生物制质量量控制的重点：一有效成分的同一性、构造确证一有效成分的同一性、构造确证二有效成分的均一性、纯度检验二有效成分的均一性、纯度检验三有害物质及剩余杂质的控制三有害物质及剩余杂质的控制四高效、灵敏的生物活性及比活性实验

13、方法四高效、灵敏的生物活性及比活性实验方法生物制质量量控制的根本内容：生物制质量量控制的根本内容：一鉴别实验一鉴别实验二杂质检查二杂质检查三平安性检查三平安性检查四含量生物学活性或效价测定四含量生物学活性或效价测定一免疫学法一免疫学法 抗原抗体反响检测新技术：抗原抗体反响检测新技术： 1免疫双分散法免疫双分散法 凝胶中进展的固相沉淀反响。抗原抗体在凝胶中进展的固相沉淀反响。抗原抗体在琼脂凝胶中分散，由近及远构成梯度，当两者在琼脂凝胶中分散，由近及远构成梯度，当两者在比例适当处相遇，发生反响，反响的沉淀物因其比例适当处相遇，发生反响，反响的沉淀物因其颗粒较大，在凝胶中不再分散，构成沉淀带。颗粒较

14、大，在凝胶中不再分散，构成沉淀带。2免疫电泳法免疫电泳法 琼脂平板电泳和双相免疫分琼脂平板电泳和双相免疫分散两种方法的结合。将抗原样品散两种方法的结合。将抗原样品在琼脂平板上先进展电泳，使其在琼脂平板上先进展电泳，使其中的各种成分因电泳迁移率的不中的各种成分因电泳迁移率的不同而彼此分开，然后参与抗体做同而彼此分开，然后参与抗体做双相免疫分散，当两者在比例适双相免疫分散，当两者在比例适当处相遇，发生反响，构成沉淀当处相遇，发生反响，构成沉淀弧。弧。迁移率、分子量迁移率、分子量 3免疫印迹法免疫印迹法Western blot 经过经过PAGE分别的蛋白质样品，转移到固分别的蛋白质样品，转移到固相载

15、体如硝酸纤维素薄膜上。以固相载体相载体如硝酸纤维素薄膜上。以固相载体上的蛋白质作为抗原，与对应的抗体起免疫反上的蛋白质作为抗原，与对应的抗体起免疫反响，再与酶或同位素标志的第二抗体起反响，响，再与酶或同位素标志的第二抗体起反响，经过底物显色或放射自显影，对供试品的抗原经过底物显色或放射自显影，对供试品的抗原特异性进展检查。特异性进展检查。二肽图分析二肽图分析 根据蛋白质、多肽的分子量大小以及氨基酸根据蛋白质、多肽的分子量大小以及氨基酸组成特点，运用专注性较强的蛋白水解酶普通组成特点，运用专注性较强的蛋白水解酶普通为肽链内切酶作用于特殊的肽链位点将多肽裂为肽链内切酶作用于特殊的肽链位点将多肽裂解

16、成小片断，经过一定的分别检测手段构成特征解成小片断，经过一定的分别检测手段构成特征性指纹图谱。性指纹图谱。l溴化氰裂解溴化氰裂解-SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳PAGEl胰蛋白裂解胰蛋白裂解-反相高效液相色谱反相高效液相色谱RP-HPLCl胰蛋白酶裂解胰蛋白酶裂解-毛细管区带电泳毛细管区带电泳CZEl 结合结合N-末端氨基酸序列分析，是蛋白质类生末端氨基酸序列分析，是蛋白质类生物制品准确的鉴别方法物制品准确的鉴别方法一来源于生物体一来源于生物体二制造过程涉及生物资料和生物学特征二制造过程涉及生物资料和生物学特征三工艺存在易变性和平安性问题三工艺存在易变性和平安性问题生物制品消费的

17、特点生物制品消费的特点生物制品危险要素：异源物质、不稳生物制品危险要素：异源物质、不稳定、易受微生物污染定、易受微生物污染 一过敏性物质检查一过敏性物质检查 二杀毒、灭活和脱毒检查二杀毒、灭活和脱毒检查 三毒性物质检查三毒性物质检查 四四 外源性污染检查外源性污染检查二、平安性检查内容二、平安性检查内容过敏反响检查：过敏反响检查： 检查异性蛋白检查异性蛋白 豚鼠实验法豚鼠实验法 毒性检查：疫苗类生物制品能否存在本身毒素引起毒性检查：疫苗类生物制品能否存在本身毒素引起的特异性毒性的不平安要素的特异性毒性的不平安要素 小鼠实验法小鼠实验法 豚鼠实验法豚鼠实验法外源性污染检查：能否污染外源性毒性物质

18、以及能外源性污染检查：能否污染外源性毒性物质以及能否存在不测的不平安要素否存在不测的不平安要素3. 血清学法血清学法 体外抗原抗体实验体外抗原抗体实验 经典血清学反响：经典血清学反响： 1凝集反响凝集反响 2沉淀反响沉淀反响 3补体结合反响补体结合反响 4中和反响中和反响经典血清学反响：经典血清学反响： 1凝集反响凝集反响 颗粒性抗原完好的病原微生物或红细胞等颗粒性抗原完好的病原微生物或红细胞等与相应抗体结合，在有电解质存在的条件下，经与相应抗体结合，在有电解质存在的条件下，经过一定时间，出现肉眼可见的凝集小块。过一定时间，出现肉眼可见的凝集小块。 2沉淀反响沉淀反响 可溶性抗原与相应的抗体混

19、合，在可溶性抗原与相应的抗体混合，在电解质存在的条件下，两者比例适宜，电解质存在的条件下，两者比例适宜，即可有沉淀物出现。沉淀反响抗原多系即可有沉淀物出现。沉淀反响抗原多系胶体溶液，沉淀物主要是由抗体蛋白所胶体溶液，沉淀物主要是由抗体蛋白所组成。组成。3 补体结合反响补体结合反响 可溶性抗原与相应抗体结合后，抗原抗体复合可溶性抗原与相应抗体结合后，抗原抗体复合物可以结合补体，但这一反响肉眼不能觉察，物可以结合补体，但这一反响肉眼不能觉察，参与红细胞和溶血素，即可根据能否出现溶血参与红细胞和溶血素，即可根据能否出现溶血反响来断定反响系统中能否存在相应的抗原或反响来断定反响系统中能否存在相应的抗原

20、或抗体。抗体。一、普通杂质检查一、普通杂质检查二、特殊杂质检查二、特殊杂质检查三、平安性检查三、平安性检查 检查工程：氯化物、硫酸盐、铵盐、铁盐、重金检查工程：氯化物、硫酸盐、铵盐、铁盐、重金属、酸碱度、溶液的廓清度与颜色、水分及枯燥属、酸碱度、溶液的廓清度与颜色、水分及枯燥失重、炽灼残渣等。失重、炽灼残渣等。 检查方法：同化学药物检查方法：同化学药物一、普通杂质检查一、普通杂质检查检查意义：检查意义： 1特殊杂质能够存在的毒性会引起平安性问题特殊杂质能够存在的毒性会引起平安性问题 2能够影响产品的生物学活性和药理作用能够影响产品的生物学活性和药理作用 3反映产品消费工艺的稳定性反映产品消费工

21、艺的稳定性 主要特殊杂质：主要特殊杂质： 生物污染物、产品相关杂质、工艺添加剂生物污染物、产品相关杂质、工艺添加剂二、特殊杂质检查二、特殊杂质检查 主要特殊杂质：生物污染物主要特殊杂质：生物污染物 1微生物微生物 2细胞成分细胞成分 3培育基成分培育基成分 4有关大分子物质有关大分子物质二、特殊杂质检查二、特殊杂质检查宿主细胞、外源性宿主细胞、外源性DNA牛血洁白蛋白牛血洁白蛋白重组制品重组制品中的鼠中的鼠IgG 主要特殊杂质：产品相关杂质主要特殊杂质：产品相关杂质 1二聚体和多聚体二聚体和多聚体 2脱氨或氧化产物脱氨或氧化产物 3突变物突变物 4错误裂解产物错误裂解产物 5二硫化物异构体二硫化物异构体二、特殊杂质检查二、特殊杂质检查 主要特殊杂质：工艺添加剂主要特殊杂质：工艺添加剂 1剩余抗生素剩余抗生素 2蛋白分别剂聚乙二醇、乙醇蛋白分别剂聚乙二醇、乙醇 3佐剂氢氧化铝佐剂氢氧化铝 4产品稳定剂辛酸钠、肝素产品稳定剂辛酸钠、肝素 5防腐剂苯酚、硫柳汞等防腐剂苯酚、硫柳汞等 6细菌与病毒灭活剂甲醛等细菌与病毒灭活剂甲醛等二、特殊杂质检查二、特殊杂质检查 一宿主细胞蛋白残留量的检查一宿主细胞蛋白残留量的检查 检查目的：控制异源蛋白的含量，以防超量后引检查目的：控制异源蛋白的含量，以防超量后引起机体免疫反响起机体免疫反