常用试剂的配方

1、.常用贮液与溶液1mol/L亚精胺（Spermidine）:溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml0分装成小份贮存于-20C01mol/L精胺（Spermine）:溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml分装成小份贮存于-20Co10mol/L乙酸胺（ammoniumacetate）:将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。10mg/ml牛血清蛋白（BSA）:加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为减少变性，须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全

2、溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20C01mol/L二硫苏糖醇（DTT）:在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20C。或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。8mol/L乙酸钾（potassiumacetate）:溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，力口水定容到100ml。1mol/L氯化钾（KCl）:?§解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。3mol/L乙酸钠（sodiumacetate）:溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5

3、.2,再加水定容到100ml。0.5mol/LEDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L）,混合后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA2H2O和20g的NaOH,并溶于水中，定容至1L。1mol/LHEPES:将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH调pH（6.8-8.2）,然后用水定容至100ml。1mol/LHCl:力口8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。25mg/mlIPGT:溶解250mg的IPGT（异丙基硫代-伊D-半乳糖甘）于10ml水中，分成小份贮存于-20Co1mol/LMgCl2:溶解20.3gMgCl26H2O

4、于足量的水中，定容到100ml。100mmol/LPMSF:溶解174mg的PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中,定容到10ml0分成小份并用铝箔将装液管包裹或贮存于-20C。20mg/ml蛋白酶K（proteinaseK）:将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中,轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20C。10mg/mlRnase（无DNase）（DNasefreeRNase）:溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中（pH5.0）。溶解后于水浴中煮沸15min,使DNA酶失活。用1mol/L的Tris

5、HCl调pH至7.5,于-20C贮存。（配制过程中要戴手套）5mol/L氯化钠（NaCl）:?§解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至100ml。10N氢氧化钠（NaOH）:溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中（磁力搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。10%SDS（十二烷基硫酸钠）：称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L。2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）:溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使终体积为100ml。100%三氯乙酸（TCA）:在装有500gTCA的试齐1J瓶中力口入100ml水

6、，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。（稀释液应在临用前配制）2.5%Xgal（5-澳-4-氯-3引咪一伊半乳糖甘）：溶解25mg的Xgal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF）,用铝箔包裹装液管，贮存于-20C0100XDenhardt试剂（Denhardt'sregent）成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量2%聚MW(Ficoll,400型)2%聚乙烯叱咯烷酮(PVP-40)2%BSA(组分V)水2g2g2g加水至总体积为100ml依照上表称取各组分，溶于水中定容。过滤除菌及杂质，分装成小份于-20C贮存。10xfe准DNA连接酶缓冲液（standardDNAligasebuffer）

7、（粘端、平端连接）成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量0.5mol/LTris-HCl100mmol/LMgCl2100mmol/LDTT2mmol/LATP5mmol/L盐酸亚精胺（可选）0.5mg/mlBSA（组分V）（可选）水5ml1mol/L贮液1ml1mol/L贮液1ml1mol/L贮液200ul100mmol/L贮液50ul1mmol/L贮液0.5ml10mg/mL贮液2.25ml将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于-20Co100mmol/LdNTP溶液(dNTPsolutions)可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液,-80C可贮存至少6个月。10mmol/LdNTP

8、混合液成分及终浓度10mmol/LdATP10mmol/LdCTP10mmol/LdGTP10mmol/LdTTP水配制20ul溶液各成分的用量2ul100mmol/LdATP贝士液2ul100mmol/LdCTP贝士液2ul100mmol/LdGTP贝士液2ul100mmol/LdTTP贮液12ul20%PEG8000/2.5MNaCl成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量质量浓度为20%聚乙二醇2.5mol/L氯化钠水20g50ml5mol/L氯化钠或14.6g固体氯化钠补足100ml加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中，加水至终体积100ml,用磁力搅拌器搅拌溶解。20XSSC成分及终浓度配

9、制1L溶液各成分的用量88.2g175.3g补足1L300mmol/L柠檬酸三钠（二水）3mol/L氯化钠水溶解柠檬酸三钠（二水）和氯化钠于约0.9L水中，加几滴10NNaOH溶液调pH为7.0,用水补足体积至1L。DEPC（焦碳酸二乙酯）处理水加100ulDEPC于100ml水中，使DEPC的体积分数为0.1%。在37c温浴至少12h,然后在15psi条件下高压灭菌20min,以使残余的DEPC失活。DEPC会与胺起反应，不可用DEPC处理Tris缓冲液。甲酰胺（deionizedformamide）直接购买或加DowexXG8混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中，用磁力搅拌器轻轻搅拌1h,可去

10、除甲酰胺中的离子。经Whatman1号滤纸过滤除去树脂后分成小份，充氮气于-80C贮存（防止氧化）。磷酸缓冲液（phosphatebuffer）按照下表所给定的体积，混合1mol/L的磷酸二氢钠（单碱）和1mol/L磷酸氢二钠（双碱）贮液，获得所需pH的磷酸缓冲液。配制1mol/L的磷酸二氢钠（NaH2PO4H2O）贮液：溶解138g于足量水中，使终体积为1L;1mol/L磷酸氢二钠（Na2HPO4）贮液:溶解142g于足量水中使终体积为1L。1mol/L磷酸二氢钠（ml）1mol/L磷酸氢二钠（ml）最终pH值8771236.08501506.18151856.27752256.373526

11、56.46853156.56253756.65654356.75104906.84505506.93906107.03306707.12807207.2TE（用于悬浮和贮存DNA）成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量10mmol/LTris-HCl1mmol/LEDTA水1ml1mol/LTris-HCl(pH7.4-8.0,25C)200ul0.5mol/LEDTA(pH8.0)98.8mlTris缓冲液（Tris-HClbuffer）将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中，再根据所要求的pH（25C下）加一定量的浓盐酸（11.6N）,用水调整终体积至1L。浓盐酸的体积（ml）pH

12、8.69.0148.8218.628.58.4388.2468.0567.8667.671.37.4767.2.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液电泳缓冲液50kris-乙酸（TAE）缓冲液成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量2mol/LTris碱1mol/L乙酸100mmol/LEDTA水242g57.1ml的冰乙酸(17.4mol/L)200ml的0.5mol/LEDTA(pH8.0)补足1L5XTris-硼酸(TBE)缓冲液成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量445mmol/LTris碱445mmol/L硼酸盐10mmol/LEDTA水54g27.5g硼酸20ml的0.5mol/LEDTA(p

13、H8.0)补足1L染料1%澳酚蓝(bromophenolblue)加1g水溶性钠型澳酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解1%二甲苯青FF(xylenecyanoleFF)溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml10mg/ml的澳化乙锭(ethidiumbromide)小心称取1g澳化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管，于4c贮存。凝胶上样液(gelloadingsolutions)6x碱性凝胶上样液(室温贮存)成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.3N氢氧化钠6mmol/LEDTA18%聚蔗糖(400型)0.15%澳甲酚

14、绿0.25%二甲不青FF水300ul10N氢氧化钠120ul0.5mol/LEDTA(pH8.0)1.8g15mg25mg补足至U10ml6x聚蔗糖凝胶上样液(室温贮存)成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.15%澳酚蓝0.15%二甲不青FF1.5ml1%澳酚蓝1.5ml1%二甲不青FF5mmol/LEDTA15%聚蔗糖(400型)水100ul0.5mol/LEDTA(pH8.0)1.5g补足至U10ml成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.15%澳酚蓝0.15%二甲苯青FF5mmol/LEDTA40%聚蔗糖水1.5ml1%澳酚蓝1.5ml1%二甲苯青FF100ul0.5mol/LED

15、TA(pH8.0)4g补足至U10ml10x十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量6x澳酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.25%澳酚蓝0.25%二甲不青FF15%聚蔗糖（400型）水2.5ml1%澳酚蓝2.5ml1%二甲不青FF1.5g补足至U10ml6X甘油凝胶上样液（4c贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.15%澳酚蓝0.15%二甲不青FF5mmol/LEDTA50%甘油水1.5ml1%澳酚蓝1.5ml1%二甲不青FF100ul0.5mol/LEDTA(pH8.0)3ml3.9ml6x

16、蔗糖凝胶上样液（室温贮存）0.2%澳酚蓝0.2%二甲苯青FF200mmol/LEDTA0.1%SDS50%甘油水20mg20mg4ml0.5mol/LEDTA(pH8.0)100ul10%SDS5ml补足至U10ml.常用培养基LB培养基将下列组分溶解在0.9L水中:蛋白陈10g酵母提取物5g氯化钠10g如果需要用1NNaOH(1ml)调整pH至7.0,再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L0SOB培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白陈20g酵母提取物5g氯化钠0.5g1mol/L氯化钾2.5ml用水补足体积到1L。分成100ml的小份，高压灭菌

17、。培养基冷却到室温后，再在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。SOC培养基成分、方法同SOB培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，除了在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外，再加2ml灭菌的1mol/L葡萄糖(18g葡萄糖溶于足够水中，再用水补足到100ml,用0.22um的滤膜过滤除菌)TB培养基将下列组分溶解在0.9L水中:蛋白陈12g酵母提取物24g甘油4ml各组分溶解后高压灭菌。冷却到60C,再加100ml灭菌的170mmol/LKH2PO4/0.72mol/LK2HPO4的溶液(2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中

18、，使终体积为100ml。高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌)。2XYT培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白陈16g酵母提取物10g氯化钠4ml如果需要用1NNaOH(1ml)调整pH至7.0,再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L0YPD培养基将下列组分溶解在0.9L水中:蛋白陈20g酵母提取物10g葡锢糖20g用水补足体积为1L后，高压灭菌。建议在高压灭菌之前，对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加1.6g色氨酸，因为YPD培养基是色氨酸限制型培养基。为了配制平板，需要在高压灭菌前加入20g琼脂粉。四.常用抗生素氨苇青霉素(ampicillin)(100mg/ml)溶解1g氨苇青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10mlo分装成小份于-20C贮存。常以25ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。竣苇青霉素(carbenicillin)(50mg/ml)溶解0.5g竣苇青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10mlo分装成小份于-20C贮存。常以25ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基