实验四 细菌在培养基中的生长表现与生化实验

1、目的要求：目的要求：1 1、了解细菌菌落及其在各种培养基中的培养特性。、了解细菌菌落及其在各种培养基中的培养特性。 2 2、了解细菌菌落及其培养特性对细菌鉴别的意义。、了解细菌菌落及其培养特性对细菌鉴别的意义。 3 3、掌握细菌生化反应的原理、方法和意义。、掌握细菌生化反应的原理、方法和意义。实验内容：实验内容： 一、细菌培养特性观察一、细菌培养特性观察 在液体培养基中生长在液体培养基中生长 在固体培养基中生长在固体培养基中生长 在半固体培养基中生长在半固体培养基中生长 在血液培养基溶血现象在血液培养基溶血现象 鉴别培养基中的生长特性鉴别培养基中的生长特性 实验四实验四 细菌在培养基中的生长表

2、现及细菌的生化试验细菌在培养基中的生长表现及细菌的生化试验 在液体培养基中生长情况：大多数细菌在液体培养基生在液体培养基中生长情况：大多数细菌在液体培养基生长繁殖后呈现均匀混浊状态；少数链状的细菌则呈沉淀生长；长繁殖后呈现均匀混浊状态；少数链状的细菌则呈沉淀生长；枯草芽胞杆菌、结核分枝杆菌等专性需氧菌呈表面生长，常枯草芽胞杆菌、结核分枝杆菌等专性需氧菌呈表面生长，常形成菌膜。形成菌膜。 在固体培养基中生长情况：各种细菌在固体培养基上在固体培养基中生长情况：各种细菌在固体培养基上形成的菌落，在大小、形状、颜色、气味、透明度、表面形成的菌落，在大小、形状、颜色、气味、透明度、表面光滑或粗糙、湿润或

3、干燥、边缘整齐与否，以及在血琼脂光滑或粗糙、湿润或干燥、边缘整齐与否，以及在血琼脂平板上的溶血情况等均有不同表现，这些有助于识别和鉴平板上的溶血情况等均有不同表现，这些有助于识别和鉴定细菌。定细菌。 在半固体培养基中生长情况半固体培养基粘度低，有鞭毛在半固体培养基中生长情况半固体培养基粘度低，有鞭毛的细菌在其中仍可自由游动，沿穿刺线呈羽毛状或云雾状混浊的细菌在其中仍可自由游动，沿穿刺线呈羽毛状或云雾状混浊生长。无鞭毛细菌只能沿穿刺线呈明显的线状生长。生长。无鞭毛细菌只能沿穿刺线呈明显的线状生长。细菌在血液培养基的溶血现象细菌在血液培养基的溶血现象鉴别培养基中的生长特性鉴别培养基中的生长特性E

4、E。Coli Coli 鉴别：鉴别：麦康凯培养基上形成红色菌落；麦康凯培养基上形成红色菌落；伊红美蓝平板：黑色带有金属光泽菌落伊红美蓝平板：黑色带有金属光泽菌落; ;远腾琼脂平板：红色带有光泽菌落。远腾琼脂平板：红色带有光泽菌落。普通平板普通平板实验四实验四 细菌在培养基中的生长表现及细菌的生化试验细菌在培养基中的生长表现及细菌的生化试验二、细菌的常用生化反应二、细菌的常用生化反应 糖发酵试验糖发酵试验 V P V P 试验试验 甲基红试验甲基红试验 枸橼酸盐试验枸橼酸盐试验 吲哚试验吲哚试验 硫化氢试验硫化氢试验 尿素酶试验尿素酶试验 糖发酵试验糖发酵试验不同细菌分解糖类的能力和代谢产物不不

5、同细菌分解糖类的能力和代谢产物不同。例如大肠埃希菌能发酵葡萄糖和乳糖；而伤寒沙门菌可同。例如大肠埃希菌能发酵葡萄糖和乳糖；而伤寒沙门菌可发酵葡萄糖，但不能发酵乳糖。发酵葡萄糖，但不能发酵乳糖。VPVP（Voges-ProskauerVoges-Proskauer）试验）试验大肠埃希菌和产气杆菌均大肠埃希菌和产气杆菌均能发酵葡萄糖，产酸产气，两者不能区别。但产气杆菌能能发酵葡萄糖，产酸产气，两者不能区别。但产气杆菌能使丙酮酸脱羧生成中性的乙酰甲基甲醇，后者在碱性溶液使丙酮酸脱羧生成中性的乙酰甲基甲醇，后者在碱性溶液中被氧化生成二乙酰，二乙酰与含胍基化合物反应生成红中被氧化生成二乙酰，二乙酰与含胍

6、基化合物反应生成红色化合物，为色化合物，为VPVP试验阳性。大肠杆菌不能生成乙酰甲基甲试验阳性。大肠杆菌不能生成乙酰甲基甲醇，故醇，故VPVP试验阴性试验阴性甲基红（甲基红（methyl redmethyl red）试验）试验产气杆菌分解葡萄糖产生丙产气杆菌分解葡萄糖产生丙酮酸，后者经脱羧后生成中性的乙酰甲基甲醇，故培养液酮酸，后者经脱羧后生成中性的乙酰甲基甲醇，故培养液pH5.4pH5.4，甲基红指示剂呈桔黄色，是为甲基红试验阴性。大，甲基红指示剂呈桔黄色，是为甲基红试验阴性。大肠埃希菌分解葡萄糖产生丙酮酸，培养液肠埃希菌分解葡萄糖产生丙酮酸，培养液pH 4.5pH 4.5，甲基红，甲基红指

7、示剂呈红色，则为甲基红试验阳性。指示剂呈红色，则为甲基红试验阳性。枸橼酸盐利用试验枸橼酸盐利用试验当某些细菌（如产气杆菌）利用铵当某些细菌（如产气杆菌）利用铵盐作为唯一氮源，并利用枸橼酸盐作为唯一碳源时，可在盐作为唯一氮源，并利用枸橼酸盐作为唯一碳源时，可在枸橼酸盐培养基上生长，分解枸橼酸盐生成碳酸盐，并分枸橼酸盐培养基上生长，分解枸橼酸盐生成碳酸盐，并分解铵盐生成氨，使培养基变为碱性，是为该试验阳性。大解铵盐生成氨，使培养基变为碱性，是为该试验阳性。大肠埃希菌不能利用枸橼酸盐为唯一碳源，故在该培养基上肠埃希菌不能利用枸橼酸盐为唯一碳源，故在该培养基上不能生长，是为枸橼酸盐试验阴性。不能生长，

8、是为枸橼酸盐试验阴性。吲哚（吲哚（indolindol）试验）试验有些细菌如大肠埃希菌、变形杆菌、有些细菌如大肠埃希菌、变形杆菌、霍乱弧菌等能分解培养基中的色氨酸生成吲哚（靛基质），霍乱弧菌等能分解培养基中的色氨酸生成吲哚（靛基质），经与试剂中的对二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰吲哚而经与试剂中的对二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰吲哚而呈红色，为吲哚试验阳性。呈红色，为吲哚试验阳性。硫化氢试验硫化氢试验有些细菌如沙门菌、变形杆菌等能分解培养有些细菌如沙门菌、变形杆菌等能分解培养基中的含硫氨基酸（如胱氨酸、甲硫氨酸）生成硫化氢，硫基中的含硫氨基酸（如胱氨酸、甲硫氨酸）生成硫化氢，硫化氢遇铅或铁离子生成黑色的硫化物。化氢遇铅或铁