叶绿素含量测定_第1页
叶绿素含量测定_第2页
叶绿素含量测定_第3页
叶绿素含量测定_第4页
叶绿素含量测定_第5页
全文预览已结束

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

1、一、叶绿素提取方法（直接浸提法）（植物生理学实验技术，高俊凤主编，北京：高等教育出版社，2006）（1） 取烤烟中部幼嫩叶片，去除叶脉后剪成0.2cm左右的细丝或小块混合均匀后，称取0.100.20g，放入50mL离心管中；（2） 在离心管中加入0.5mL纯丙酮和1015mL80%的丙酮，并仔细将粘附在瓶壁边缘的叶片碎末洗到丙酮溶液中去，盖上瓶塞，室温下置暗处浸提过夜，其间摇动34次；（3） 次日取出离心管，观察叶组织已全部变白时，表示叶绿素已浸提干净，然后用80%丙酮定容至25mL刻度，过滤或离心（25，35min,12000r·min-1)后，进行比色测定。（4） 比色测定：将叶

2、绿体色素提取液倒入光径1cm的比色杯 内，用分光光度计分别在波长645nm、663nm和652nm下测定吸光度，以80%丙酮为空白对照。（5） 按下列公式分别计算叶绿素a、b和叶绿素的总浓度（mg·L-1)Ca=12.72×A663-2.59×A645（叶绿素a的浓度）Cb=22.88×A663-4.67×A645（叶绿素b的浓度）CT=Ca+Cb=20.29×A645+8.05×A663由于叶绿素a、b在652nm处的吸收峰相交，二者具有相同的比吸收系数（均为34.5），也可以在此波长下测定一次吸光度（A652）而求出叶绿

3、素含量：（6） 求得色素浓度后再按下式计算组织中各色素含量（用mg·g-1鲜重或干重表示)式中，C：叶绿体色素的浓度（mg·L-1)；FW:鲜重（g）；VT：提取液总体积（mL)；n：稀释倍数（在此处为1）。二 、丙酮乙醇混合液法（植物生理学实验技术，郝建军主编，辽宁科学技术出版社，2001年再版）1、将丙酮、无水乙醇按1:1体积混合成浸提液2、称取0.1g，剪成细丝置于盛混合液的试管中，加塞置于暗处，于室温（1030）条件下浸提，每个一定时间观察浸提情况，以材料完全变白为准。用混合浸提液作空白调零，测定663nm、645nm和652nm处测光密度（一般隔夜测定）。注意事项

4、 (1) 为了避免叶绿素光解，操作时应在弱光下进行，研磨时间应尽量短些，以不超过两分钟为宜。 (2)  叶绿体色素提取液不能 浑浊。可在710nm或750nm下测量吸光度，其值应小于当波长为叶绿素a吸收峰时消光度值的5%，否则应重新过滤。 (3)用分光光度计法测定叶绿素含量，对分光光度计的波长精确度要求较高。如果波长与原吸收峰波长相差1nm,则叶绿素a的测定误差为2%，叶绿素b为19%，使用前必须对分光光度计的波长进行校正。校正方法除按仪器说明书外，还应以纯的叶绿素a和叶绿素来来校正。因为即使使用国产仪器中性能较好的7200型分光光度计，经校正后再600700nm波段中的读数误差还可能有±2nm，这对测定叶绿素a：b值已有影响。 叶绿素含量测定记载表处理 时间（h）重复 FW(g） VT（mL）吸光度色素浓度mg·L-1色素含量mg·g-1A645A652A663CaCbCTCa'Cb'CT'CK01

人人文库> 全部分类> 专业文献 > 工程机械

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论