动物生理学实验5蛙心灌流

1、v学习离体蛙心的灌流方法。学习离体蛙心的灌流方法。v观察钠、钙、钾等离子，去甲肾上腺素、观察钠、钙、钾等离子，去甲肾上腺素、乙酰胆碱、阿托品、心得安等药物对心脏乙酰胆碱、阿托品、心得安等药物对心脏活动的影响。活动的影响。 v心脏具有自动节律性。离体心脏用理化性质近心脏具有自动节律性。离体心脏用理化性质近似于血浆的生理溶液（任氏液）进行灌流，以似于血浆的生理溶液（任氏液）进行灌流，以保持其新陈代谢顺利进行，这种节律性可维持保持其新陈代谢顺利进行，这种节律性可维持较长时间。较长时间。v心脏正常节律性活动有赖于内环境理化因素的心脏正常节律性活动有赖于内环境理化因素的相对稳定，所以改变灌流液成分，则可

2、引起心相对稳定，所以改变灌流液成分，则可引起心脏活动的改变。脏活动的改变。v心肌细胞生物电活动的基础是钠、钾、钙等跨膜心肌细胞生物电活动的基础是钠、钾、钙等跨膜离子流。因此细胞外液中这些离子浓度的变化会离子流。因此细胞外液中这些离子浓度的变化会对心脏的活动产生不同的影响。对心脏的活动产生不同的影响。v调节心脏活动的神经、体液因素对心脏活动的直调节心脏活动的神经、体液因素对心脏活动的直接作用是神经递质或激素与心肌细胞相应受体结接作用是神经递质或激素与心肌细胞相应受体结合，导致心脏活动的增强或减弱。乙酰胆碱与去合，导致心脏活动的增强或减弱。乙酰胆碱与去甲肾上腺素就是通过这种方式发挥作用的。特异甲肾

3、上腺素就是通过这种方式发挥作用的。特异的受体阻断剂能阻断相应的递质与受体的作用。的受体阻断剂能阻断相应的递质与受体的作用。v蟾蜍，两栖类手术器械，蟾蜍，两栖类手术器械，八木氏套管，蛙心夹，八木氏套管，蛙心夹，换能器，铁支架，蛙板，换能器，铁支架，蛙板，任氏液，任氏液，0.65NaCl， 2CaCl2，4KCl，0.01去甲去甲肾上腺素，肾上腺素，0.01乙酰胆碱，乙酰胆碱，A液，液，B液液八木氏套管八木氏套管v离体蛙心的制备离体蛙心的制备暴露心脏：同蟾蜍心搏过程描记实验暴露心脏：同蟾蜍心搏过程描记实验蟾蜍心脏示意图蟾蜍心脏示意图 插管，游离心脏：插管，游离心脏：v将心包膜、动脉膜、肝系膜去除干

4、净。将心包膜、动脉膜、肝系膜去除干净。v结扎右主动脉：在右主动脉下穿过两根线，结扎右主动脉：在右主动脉下穿过两根线，分别结扎，中间剪断。分别结扎，中间剪断。v总结扎线：一端自左主动脉下方穿过，另一总结扎线：一端自左主动脉下方穿过，另一端从左右肝静脉下方穿过，打一松结，当心端从左右肝静脉下方穿过，打一松结，当心房房收缩上提收缩上提时结扎。将两侧前腔静脉，左右时结扎。将两侧前腔静脉，左右肺静脉结扎在内，注意肺静脉结扎在内，注意远离静脉窦远离静脉窦。从结扎。从结扎线以外剪断。线以外剪断。v静脉插管：在左右肝静脉和后腔静脉下穿线，静脉插管：在左右肝静脉和后腔静脉下穿线，打一松结，在左肝静脉远端剪开一楔

5、形切口，打一松结，在左肝静脉远端剪开一楔形切口，将装满灌流液的静脉插管插入静脉，见蛙心将装满灌流液的静脉插管插入静脉，见蛙心膨胀变白后结扎线扣。用灌流液将心脏内血膨胀变白后结扎线扣。用灌流液将心脏内血液完全洗出。液完全洗出。v左主动脉插管：在左主动脉弓下穿线，打一左主动脉插管：在左主动脉弓下穿线，打一松结，在动脉管壁远端剪一楔形切口，插入松结，在动脉管壁远端剪一楔形切口，插入灌流器的导管，见有灌流液流出后结扎线扣。灌流器的导管，见有灌流液流出后结扎线扣。注意动脉插管勿插入主动脉圆锥。注意动脉插管勿插入主动脉圆锥。v在左肝静脉和左主动在左肝静脉和左主动脉结扎线外端剪断，脉结扎线外端剪断，将离体蛙

6、心安放于灌将离体蛙心安放于灌流器支架上，调整灌流器支架上，调整灌流液液面及动脉套管流液液面及动脉套管出口的高度，使心脏出口的高度，使心脏收缩时灌流液能顺利收缩时灌流液能顺利搏出心脏，并使灌流搏出心脏，并使灌流液能形成循环，即灌液能形成循环，即灌流液自静脉套流入心流液自静脉套流入心脏，经心脏由动脉套脏，经心脏由动脉套管流出，滴入静脉套管流出，滴入静脉套管。管。蛙心灌流装置蛙心灌流装置A：动脉插管：动脉插管 B：静脉插管：静脉插管v标本及仪器连接标本及仪器连接用蛙心夹在心脏舒张期夹住心尖部，蛙心夹上用蛙心夹在心脏舒张期夹住心尖部，蛙心夹上的系线与换能器相连。的系线与换能器相连。打开软件打开软件 示

7、波示波 选择试验选择试验 示波示波 记录正常心搏曲线。记录正常心搏曲线。v观察离子和药物对心脏活动的影响：观察离子和药物对心脏活动的影响：把蛙心插管内任氏液中滴加把蛙心插管内任氏液中滴加0.65 NaCl溶液，溶液，观察曲线的变化，待变化明显后，将其全部吸观察曲线的变化，待变化明显后，将其全部吸出，用新鲜任氏液冲洗出，用新鲜任氏液冲洗23遍后，保存于任氏遍后，保存于任氏液中，使心脏恢复正常搏动。液中，使心脏恢复正常搏动。按照上述方法向任氏液中依次加入下列试剂，按照上述方法向任氏液中依次加入下列试剂，观察记录蟾蜍心脏活动曲线的变化情况：观察记录蟾蜍心脏活动曲线的变化情况：vCaCl2 2滴滴 冲

8、洗冲洗 CaCl2 6滴滴 冲洗冲洗 KCl 2滴滴 冲洗冲洗 去甲肾上腺素去甲肾上腺素 2滴滴 冲洗冲洗 A液液 2滴滴 约约1分钟后分钟后 去甲肾去甲肾上腺素上腺素 2滴滴 冲洗冲洗 乙酰胆碱乙酰胆碱 2滴滴 冲洗冲洗 B液液 2滴滴 约一分钟后约一分钟后 乙酰乙酰胆碱胆碱 2滴滴 HCl 2滴滴 NaOH 2滴滴 冲冲洗洗 任氏液任氏液v注意：每次更换灌流液时，液面应保持一致。注意：每次更换灌流液时，液面应保持一致。v血管的识别及结扎血管的识别及结扎v插管技术插管技术v游离心脏与换能器的连接游离心脏与换能器的连接v灌流液作用时间及更换时间的把握灌流液作用时间及更换时间的把握v制备蛙心标本

9、时，勿伤及静脉窦。制备蛙心标本时，勿伤及静脉窦。v心脏插管时，切勿戳穿心壁。心脏插管时，切勿戳穿心壁。v各种液体滴管要专用，不可混用。各种液体滴管要专用，不可混用。v蛙心插管内液面应保持一定高度，以蛙心插管内液面应保持一定高度，以1.5 cm 为宜。为宜。v每加一种溶液要用滴管混匀，以免所加溶液浮在上每加一种溶液要用滴管混匀，以免所加溶液浮在上面，不易进入心脏。面，不易进入心脏。v张力换能器应向下倾斜，以免液体进入换能器。张力换能器应向下倾斜，以免液体进入换能器。v滴加试剂后，一旦出现作用应立即用新鲜任氏液换滴加试剂后，一旦出现作用应立即用新鲜任氏液换洗洗23次，以免心肌受损，而且必须待心脏恢

10、复正次，以免心肌受损，而且必须待心脏恢复正常后方能进行下一步实验，以形成前后对照。常后方能进行下一步实验，以形成前后对照。v滴加药品和换取新鲜任氏液时，须及时标记，以便滴加药品和换取新鲜任氏液时，须及时标记，以便观察分析。观察分析。v化学药物作用不明显时，可再适量滴加，密切观察化学药物作用不明显时，可再适量滴加，密切观察药物剂量添加后的实验结果。药物剂量添加后的实验结果。v随时用任氏液润湿蛙心表面。随时用任氏液润湿蛙心表面。v根据实验及相关理论分析根据实验及相关理论分析A、B液分别为何液分别为何种体液因素，为什么？种体液因素，为什么？v根据实验结果判断蟾蜍心脏上所存在的受根据实验结果判断蟾蜍心脏上所存在的受体类型。体类型。v为什么蛙心插管内