实验室的标准操作规程SOP13ppt课件

1、实验室的标准操作规程SOP）水产品和畜、禽肉中氯霉素残留量检验方法水产品和畜、禽肉中氯霉素残留量检验方法气相色谱法气相色谱法- -质谱检测法质谱检测法1 1 方法提要方法提要根据方法进行验证修改后根据方法进行验证修改后, ,并依据欧盟指令建并依据欧盟指令建立了质谱测定条件，将某些关键步骤进行细化。立了质谱测定条件，将某些关键步骤进行细化。本方法适用于水产品和畜、禽肉组织、肠衣中本方法适用于水产品和畜、禽肉组织、肠衣中氯霉素残留确证检测。用乙酸乙酯提取，提取氯霉素残留确证检测。用乙酸乙酯提取，提取液用正己烷净化，硅烷化后用气相色谱配有负液用正己烷净化，硅烷化后用气相色谱配有负化学源的化学源的59

2、73N5973N质谱检测器检测。质谱检测器检测。实验室的标准操作规程SOP） 气相色谱法-质谱检测法检测氯霉素2 实验室设备2.1 仪器和设备2.1.1 Agilent6890气相色谱仪：配有负化学源的5973N质谱检测器。2.1.2 离心机：5810型，Eppendorf公司。2.1.3 均质器：T25型，18G 刀，IKA公司2.1.4 旋转蒸发器：R-200，BUCHI公司。2.1.5 移液枪：200L、1000L、5000L，Eppendorf公司。2.1.6 具塞塑料离心管：15 mL 、50 ML。2.1.7 涡流混匀器：39760型，Thermolyne公司。实验室的标准操作规程

3、SOP） 气相色谱法-质谱检测法检测氯霉素2.2 试剂所有试剂均为分析纯级有机试剂需重蒸馏），水为去离子水。2.2.1 乙酸乙酯。2.2.2 甲醇。2.2.3 正己烷。2.2.4 氯化钠。2.2.5 无水硫酸钠：经650灼烧4 h，置于干燥器内备用。2.2.6 硅烷化试剂： Sylon BFT 99% N,O-双三甲基硅烷三氟乙酰胺BSTFA）+1%三甲基氯硅烷TMCS）美国 Supelco产品，货号33154-u，0.1mL/ampul。 实验室的标准操作规程SOP） 气相色谱法-质谱检测法检测氯霉素2.3 标准物质2.3.1 氯霉素chloramphenicol）：纯度99%，Amresc

4、o分装，上海生工生物工程有限公司和Sigma公司。2.4 标准溶液的配制2.4.1 标准储备液的配制准确称取氯霉素标样50mg置50ml棕色容量瓶中，用甲醇溶解，并定容至刻度，混匀，浓度为1 mg/mL，4保存6个月。2.4.2 标准工作溶液配制：取1mL储备液用甲醇溶解定容到100Ml，此时浓度为1g/mL，取1g/mL 1mL定容至10mL，浓度为0.1g/mL；取1g/mL 0.5 mL定容至10mL，浓度为0.05g/mL。实验室的标准操作规程SOP） 气相色谱法-质谱检测法检测氯霉素3 实验方法3.1 试样制备从所取原始样品中取出部分有代表性样品，经充分混匀。用四分法缩分出不少于50

5、0 g试样，混匀，均分成两份。装入清洁容器内，加封后，表明标记。3.2 测定步骤3.2.1 提取与净化称取5 g精确至0.01 g试样于50 mL离心管中。加入25 mL乙酸乙酯，用均质器均质提取2 min，4000 r/min离心3 min。将乙酸乙酯层移入50 mL鸡心瓶中，试样再加入5 mL乙酸乙酯，涡流混匀器混匀1min，合并乙酸乙酯提取液，于40旋转蒸发至近干。加入1 mL甲醇溶解残渣，再加入20 mL 4% 氯化钠溶液和15 mL正己烷，用涡流混匀器混合1 min，4000 r/min离心3 min。弃去正己烷层，水层加15 mL正己烷，同上操作，弃去正己烷层。水层中加入15 mL

6、乙酸乙酯，用涡流混匀器混合2 min，3000 r/min离心3min。吸取乙酸乙酯层，通过无水硫酸钠柱5g脱水于另一个50 mL鸡心瓶中，用少量乙酸乙酯淋洗无水硫酸钠柱。于40 旋转蒸发至约1 mL。实验室的标准操作规程SOP） 气相色谱法-质谱检测法检测氯霉素3.2.2 衍生化将浓缩液移入5 mL离心管中，用1 mL乙酸乙酯洗涤鸡心瓶，合并乙酸乙酯。于40吹氮气蒸发至干。加入100 L正己烷和100 L硅烷化试剂，于70烘箱中加热30min。吹氮气蒸发至干，加入0.50 mL正己烷与环己烷混合液6：4），混匀溶解，供气相色谱测定。3.2.3 测定3.2.3.1 气相色谱条件a) 色谱柱：3

7、0 m 0.25 mm 0.25 m，HP-5MS； c) PTV进样口温度：70(1.0 min)700/min 250(6.0 min) 700/min 300；d) 载气：氦气，恒压模式，柱头压 10psi；e) 进样量：2uL实验室的标准操作规程SOP） 气相色谱法-质谱检测法检测氯霉素3.2.3.2 质谱条件 a) 传输线温度：280C b) 溶剂延迟： 5min c) 离子源温度：150Cd) 四极杆温度：100Ce) 反应气：甲烷，流量：2ml/minf) 选择离子监测目标物 监测离子氯霉素 466，468，470，376其中定量离子为466，定性离子为468，470，376 g

8、) 离子停留时间：60毫秒实验室的标准操作规程SOP） 气相色谱法-质谱检测法检测氯霉素3.2.3.3 标准溶液的衍生化取适量标准溶液，用氮气吹干，加入200 L正己烷和100 L硅烷化试剂，于80烘箱中加热30min。吹氮气蒸发至干，加入0.50 mL正己烷与环己烷混合液6:4），混匀溶解，供气相色谱-质谱测定。在上述色谱条件下：氯霉素保留时间为 11.65 min。3.2.3.4 样品测定分别注射等体积的标准工作液、试剂空白、阴性控制样品、待检样品不超过10个）、阴性控制和阳性控制样品，按上述色谱条件测定，峰面积定量。 4、气相色谱-质谱定性(1)保留时间定性：在上述条件下,目标化合物的保

9、留时间为11.650.1min实验室的标准操作规程SOP） 气相色谱法-质谱检测法检测氯霉素(2)质谱确证在保留时间窗口内出现色谱峰后，获取其质谱图，扣除本底后如果以下判别标准全部符合，则可判定氯霉素存在：所有4个监测离子全部在质谱图中出现离子466为基峰和定量离子，其它3个离子与基峰丰度之比应符合如下标准质荷比标准丰度比（%）允许相对偏离范围（%）468 7620470 1830376 2025实验室的标准操作规程SOP） 气相色谱法-质谱检测法检测氯霉素5、质量控制每组实验除标准、样品，需同时进行溶剂空白实验、阴性控制样品实验和阳性控制样品实验。5.1 溶剂空白不加试样，用与样品相同的方法

10、进行处理。5.2 阴性控制样品称取5.0克阴性控制样品，置于50 mL离心管中，用与样品相同的方法进行处理。5.3 阳性控制样品称取5.0克阴性控制样品，置于50 mL离心管中，用微量注射器加入0.1g/mL的氯霉素标准工作液25 L，相当于样品浓度0.5ng/g用与样品相同的方法进行处理。用相同浓度的标准进行定量，计算回收率，用来判断本组操作的可靠性。实验室的标准操作规程SOP） 气相色谱法-质谱检测法检测氯霉素6 结果计算6.1 外标法定量 用色谱数据处理机或按下列公式计算： 式中：X 试样中氯霉素药物残留含量，mg/kg；A 样液中硅烷化氯霉素色谱峰面积；AS标准工作溶液中硅烷化氯霉素色

11、谱峰面积； c 标准工作溶液中氯霉素的浓度，g/mL； V 最终样液的定容体积，mL； m 最终样液所代表试样量，g。计算结果需扣除空白值。实验室的标准操作规程SOP） 气相色谱法-质谱检测法检测氯霉素7 测定低限本方法氯霉素的测定低限为 0.2 g/kg.8 可接受的检验结果在添加浓度0.5g/kg时，回收率，50%120%。9 检测报告按照SPSBA00024检验报告管理程序执行。10 方法验证10.1 取相当于1g/g的氯霉素衍生化物，在200-600M/z范围，进行全扫描分析，确定定量离了和确证离子及其丰度比，见附录1。实验室的标准操作规程SOP） 气相色谱法-质谱检测法检测氯霉素10.2 标准工作曲线用注射器分别移取0.05g/mL ，20L 、30L、60L；0.1g/mL，50L, 1g/mL, 25L、标准工作液置于6个5ML 离心管中，氮气吹干，其系列分别相当于样品中0.2、0.3、0.4、1、5 ng/g的浓度。分别注射等体积的标准工作液按给定的色谱条件进行测定，用G