血红蛋白的分离

1、血血每个肽链环绕一个亚铁血红素基团，每个肽链环绕一个亚铁血红素基团，此基团可携带一分子氧或一分子二此基团可携带一分子氧或一分子二氧化碳，血红蛋白因含有血红素而氧化碳，血红蛋白因含有血红素而呈红色。呈红色。一、基础知识一、基础知识 凝胶色谱法（分配色谱法）凝胶色谱法（分配色谱法）1 1、凝胶：、凝胶：一些微小多孔的球体（内含许多贯穿的通一些微小多孔的球体（内含许多贯穿的通道，由多糖类构成如葡聚糖、琼脂糖）道，由多糖类构成如葡聚糖、琼脂糖）2 2、概念：、概念：根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法效方法3 3、原理：、原理： 用凝胶色谱法分离蛋白质时，分子

2、量用凝胶色谱法分离蛋白质时，分子量大的蛋白质大的蛋白质 A A路程较长，移动速度较慢路程较长，移动速度较慢 B B路程较长，移动速度较快路程较长，移动速度较快 C C路程较短，移动速度较慢路程较短，移动速度较慢 D D路程较短，移动速度较快路程较短，移动速度较快D 相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的进行过程可表示为图中哪一个的进行过程可表示为图中哪一个B缓冲溶液：缓冲溶液：能够抵制（能够抵制（ ） 对溶对溶液的（液的（ ）的影响，维持）的影响，维持PH PH 基本基本不变。不变。外界的酸或碱外界的酸或碱PHPH值值使用使用SDS-SDS-聚丙烯酰胺电泳过程中，不

3、同蛋聚丙烯酰胺电泳过程中，不同蛋白质的电泳迁移率完全取决于白质的电泳迁移率完全取决于A A 电荷的多少电荷的多少 B B 分子的大小分子的大小C C 肽链的多少肽链的多少 D D 分子形状的差异分子形状的差异分离血红蛋白溶液分离血红蛋白溶液有机溶剂有机溶剂 （无色透明的甲苯层）（无色透明的甲苯层）脂类物质脂类物质 （白色白色脂溶性物质沉淀层）脂溶性物质沉淀层）血红蛋白溶液血红蛋白溶液 （红色透明液体）（红色透明液体）红细胞破碎物沉（暗红色沉淀物）红细胞破碎物沉（暗红色沉淀物） 下列操作正确的是（下列操作正确的是（ ） A. A. 分离红细胞时采用低速长时间离心分离红细胞时采用低速长时间离心 B

4、. B. 红细胞释放出血红蛋白只需要加入蒸红细胞释放出血红蛋白只需要加入蒸馏水就可馏水就可 C. C. 分离血红蛋白溶液是低速短时间离心分离血红蛋白溶液是低速短时间离心 D. D. 透析时要用透析时要用20mmol/l20mmol/l的磷酸缓冲液，的磷酸缓冲液，透析透析12h12hD在蛋白质的提取和分离中，关于对样品处理过程在蛋白质的提取和分离中，关于对样品处理过程中，分析无误的是中，分析无误的是A A洗涤红细胞的目的是去除血浆中的葡萄糖、无洗涤红细胞的目的是去除血浆中的葡萄糖、无机盐机盐B B洗涤时离心速度过小，时间过短，白细胞等会洗涤时离心速度过小，时间过短，白细胞等会沉淀，达不到分离的效

5、果沉淀，达不到分离的效果C C洗涤过程选用洗涤过程选用0.1%0.1%的生理盐水的生理盐水D D透析的目的是去除样品中相对分子质量较小的透析的目的是去除样品中相对分子质量较小的杂质杂质D注意事项：注意事项：底塞中插入的玻璃管的上部不得超出橡皮底塞中插入的玻璃管的上部不得超出橡皮塞的凹穴底面，否则难以铺实尼龙网，还会导致液体塞的凹穴底面，否则难以铺实尼龙网，还会导致液体残留，蛋白质分离不彻底。残留，蛋白质分离不彻底。二、实验操作二、实验操作 蛋白质的提取和分离一般分为四步：蛋白质的提取和分离一般分为四步： （1 1）样品处理：样品处理：包括洗涤红细胞；血红包括洗涤红细胞；血红蛋白释放；离心等操作收集到的血红蛋蛋白释放；离心等操作收集到的血红蛋白溶液。白溶液。 （2 2）粗分离：粗分离：透析除去分子较小的杂质。透析除去分子较小的杂质。 （3 3）纯化：纯化：通过凝胶色谱法将分子量较通过凝胶色谱法将分子量较大的杂质蛋白质除去。大的杂质蛋白质除去。 （4 4）纯度鉴定：纯度鉴定：通过聚丙烯酰胺凝胶电通过聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定。泳鉴定。3.3.下列是有关血红蛋白提取和分离的相关下列是有关血红蛋白提取和分离的相关操作，其中正确的是（操作，其中正确的是（ ）A A可采集猪血作为实验材料可采集猪血作为实验材料 B B用蒸馏水