乳腺癌HER2FISH检测判读及报告

1、乳腺癌HER2FISH佥测-检测意义、建议及标本准备HER2与孚L腺癌乳腺癌是女性恶性肿瘤中发病率最高的一种，正以每年3%4%的速度急剧上升，已成为女性的第一杀手。临床上大约20-35%的浸润性乳腺癌存在HER2基因的扩增及蛋白的高表达。HER2基因（又名HER2/neu,c-erbB-2）位于17q12,是表皮生长因子受体（HER）家族成员之一，HER家族在细胞生理过程中发挥重要的调节作用。HER2编码相对分子量185KD的跨膜受体样蛋白，具有酪氨酸激酶活性。HER2是重要的乳腺癌预后判断因子，HER2阳性（过表达或扩增）的乳腺癌，其临床特点和生物学行为有特殊表现，治疗模式也与其他类型的乳腺

2、癌有很大的区别。HER2检测方法有免疫组化（IHC）和荧光原位杂交（FISH）等。2014年NCCN乳腺癌临床实践指南和乳腺癌HER2检测指南2014版均强调：FISH是检测HER2基因状态的金标准。一.检测意义1 .判断预后：HER2阳性的乳腺癌浸润性强，无病生存期短，预后差。2 .指导治疗：HER2基因扩增的乳腺癌患者对内分泌治疗药物（如他莫昔芬）产生耐药。HER2基因扩增的乳腺癌患者对CMF方案不敏感，宜采用大剂量慈环类药物和紫杉醇类药物方案；HER2基因扩增的乳腺癌患者明显受益于Herceptin（赫赛汀，2001年FDA批准上市）等靶向药物治疗。二.检测建议IHC和FISH检测HER

3、2的状态一致性很高，但也存在着差异，数据统计如下表1和表2示，对于IHC2+样本必须要用FISH进一步确认结果；0、1+或3+,根据条件，可再做FISH验证。Fgwr*1PT&temE,即andGeneAmplilk0llnIHC-FISH阳性率（%）阴性阳性0892565.91+51421129.12+32741555.93+7466089.9表1:(2004)HER2AmplificationRatiosbyFluorescenceInSituHybridizationandCorrelation表2:2007年卫生部科教司牵头组织全国73家三级以上医院历时2年完成荧光原位杂交技术

4、（FISH）withImmunohistochemistryinaCohortof6556Breast用于乳腺癌患者Her-2检测的临床研究”课题，检测标CancerTissues.ClinicalBreastCancer本达3368例因此，«2014年NCCN乳腺癌临床实践指南和乳腺癌HER2检测指南（2014版）»均建议先进行HER2蛋白的IHC检测，IHC2+样本进行ISH（FISH、DISH或CISH）检测。，HER2HHER2toning0fvaficfabaidMCMut£reltaxiMEftitiISHifum-orcmdtrmwtntfNCeft

5、SH(Ifntwipeclmtii-flvalflbta).HGR2mungbywIKlVMaingfaiprobwffiHfotngvHERJcqpy2nHtSOgM国ISHHMuttnflubutwilldiMkprabtZe*«mb<rE询giHC(Wumi4.0ww*«0jQBlgiuliiallr«ulforonhrnaw|as|wrt由中4a*C信Mwafwehnn-bb|.HERaCEPlJmanbar4at即1则住一1igjHEMMg即vi哂dmiL_tteng»Hni£Ofy必zISH3.户加rtgiHER2M4yEg4

6、1RwWcailI3H附JER3K例7tAyfmHE时二叩ynumb*,之仙ariid电notagilr«iJftZf*HER2CCPF.1shzMgnriiogwifiHCft«im««p«ctnvn|lpIntwitfiHbitmIwiCBM5HmM翻mITpf&byororderimw堀看119H疣Ofnew«2014年NCCN乳腺癌临床实践指南三.样本准备:1 .标本类型：（1）手术切除标本；（2）粗针穿刺活检标本；（3）活检标本。2 .标本固定：所有乳腺癌标本离体后都应尽快固定（1h内固定）。固定时应将标本每隔510

7、mm切开，并可在组织间嵌入纱布或滤纸等物。固定液量与所浸泡组织的比例应足够。固定时间以672h为宜。3 .固定液类型：4%中性（磷酸缓冲）甲醛固定液。4 .组织切片：（1）切片厚度3-5um；（2）应有HE染色切片作为对照。四.临床上哪些患者需要进行HER2检测1 .所有乳腺原发性浸润癌都应进行HER2检测；2 .只要能获取肿瘤组织，对复发灶或转移灶也应该进行HER2检测；3 .如HER2检测结果为阴性，但疾病复发且生物学行为提示可能为HER2阳性肿瘤时，应重复HER2检测；4 .如HER2检测结果与组织病理学特征不相符时，如组织学分级为I级的浸润性乳腺癌HER2阳性，应重复HER2检测。组织

8、学1级的类型腺癌：短润性导管或小叶癌，ER和PR阳性?小管癌（至少90%为纯小管癌）刑液癌（至少90%为纯粘液癌）狒状癌（至少90%为纯筛状癌）?腺样囊性癌（至少90%为纯腺样囊性癌）且常为三阴性乳腺癌HER2FISH佥测-判读一.信号观察流程1 .首先在HE/IHC切片上确认肿瘤区域；2 .在10砌镜下，于FISH标本上找到与HE染色切片上相同的组织细胞结构；3 .在40剂镜下扫描整张切片，观察是否存在异质性，要求至少找到2个浸润癌区域，计数至少20个浸润癌细胞。满意的标本应是75%以上癌细胞核中有杂交信号；4 .在100剂镜下观察癌细胞核的FISH结果进行信号计数，注意上下调整焦距，以免遗

9、漏信号。二.实验失败、不能判读的情况1 .因操作等原因，细胞核被损坏，边界不完整；2 .组织过度消化，细胞核边界不完整，DAPI染色浅；3 .组织消化不足，25%以上的细胞核无信号；4 .自发荧光很强或细胞核分辨差，10%细胞核外有信号。三.计数要求1 .计数区域可结合苏木精伊红染色进行肿瘤细胞标识；2 .选择具较好核分界的区域，要求细胞核大小基本一致、边界完整，DAPI染色均匀、核无重叠，绿色着丝粒信号清晰；3 .随机计数确定的肿瘤区域中2030个细胞核中的双色信号，不要主观选择信号多的核计数；4 .不要计数仅显示一种颜色信号的细胞核；5 .避免计数分裂像的细胞核或被细胞核分裂及边界不完整核

10、；6 .如果2个同样大小的橘红信号之间距离不足一个常规橘红信号大小，只计为一个信号；7 .若红、绿两信号的比值>20或众多信号连接成簇时可不计数，视为基因扩增；8 .若为临界值，则需要再计数20个细胞核中的信号或由另外一个观察者重新计数，如仍为临界值，则应在FISH检测报告中注明，或换其它方法或其它蜡块重新检测；9 .若HER2基因扩增在不同癌细胞中存在异质性时，应在另一癌区域再计算2030个癌细胞核中的红、绿信号值，报告其最大值，并加以注释；10 .判读时可以将乳腺组织中的正常细胞（如成纤维细胞、血管内皮细胞、淋巴细胞、正常乳腺上皮细胞）的HER2信号和CSP17信号作为内对照。1拙胆

11、核靛分量曼，他自1年在里区域内.数：可卜珊胆枝内为两十根色.两个封色(n法也内；植的n色信号和两个温色侍号,一个佛色信号扩不计致”间核中看，f比日曲q两仃的掴弛州口域巡行直通.商粤倍号座区域内.(1%)计数为：四中橙色信号和M个导也格号，个阻色信号幢费开.二-）计放为:个帽色仁丐和两个母色匕修”个蹴型恪号被裂升.睢的燃号也被裂开.©H曲为：曲小粒色信号和小愫色信）计改为:三个和色仁号和一个釉色心号”或）计题为：叫个IR色行号和睛个盘色信号口一绿色牌斜，CEP17=相色探鼾，LSIHEH-?neii一些常见信号类型及计数方法摘自乳腺癌HER-2基因检测试剂盒（FISH法）说明书一Abb

12、ottMoleularInc.四.结果判读在清晰的肿瘤区域，按以上计数要求在至少20个核内计数GSPHER2（红色）和CSP17（绿色）信号，分别记录GSPHER2和CSP17的信号总数，再计算平均每个细胞HER2拷贝数、平均每个细胞CSP17拷贝数以及GSPHER2和CSP17比值。A.若HER2/CSP17<2.0,且平均HER2拷贝数/细胞<4.0,HER2阴性；B.若HER2/CSP17<2.0,且平均HER2拷贝数/细胞<6.0,但A4.0寸,HER2结果不确定；C.若HER2/CSP17A2.0或HER2/CSP17<2.0而HER2拷贝数/细胞>

13、;6.0HER2阳性。乳腺癌HER2检测指南2014版使用经过酷亚的班搜钟1EH方法进行HERZ检律檀润瘙）I一一对照出现假期结果I.一-平均HERE拷贝数，幅腮<4.0ISH-桂乳腺癌HER2检测指南2014版注：a：对于HER2/CSP17比值）2.0但平均HER2拷贝数/细胞<4.0的病例是否应该视为FISH阳性目前尚存争议，建议对这部分病例在报告中加以备注，提示目前的争议，建议临床医师参考免疫组织化学检测结果并与患者进行必要的沟通；b:见于均质、连续的浸润细胞，且占浸润癌的10%以上五.HER2FISH判读标准的变化乳腺癌HER2检测指南2009版判读标准：A.若HER2/

14、CSP17<1.8,HER2阴性；B.若HER2/CSP17A1.8且<2.2,HER2结果不确定；C.若HER2/CSP17>2.2HER2阳性。新旧判读标准的比较：2014版新标准的截断值为2.0,2009版老标准的截断值为1.8和2.2;2014版新标准不只是HER2/CSP17的比值，需结合HER2基因的拷贝数进行判读；2009版则仅根据HER2/CSP17的比值进行判读，不考虑HER2基因拷贝数。新旧判读标准衔接中可能出现的问题：2014版新标准出现HER2检测结果不确定的情况会比2009版标准更少；2014版新标准判读阴阳性结合了HER2基因的拷贝数，有些2009

15、版标准判读结果为阴性的标本，如果HER2基因拷贝数>6.02014版新标准则判为阳性。乳腺癌HER2检测指南2009版与乳腺癌HER2检测指南2014版乳腺癌HER2FISH佥测-报告及结果解释一.报告要求乳腺癌HER2检测指南2014版要求检测报告包括如下内容：患者信息（包括姓名、性别、年龄、门诊/住院号）、送检医师姓名、送检日期、标本信息（包括病理号和蜡块号卜标本部位和类型、探针信息、检测方法、是否使用图像分析、对照设置情况、样本量是否适合评估、判读结果（包括评估的细胞数量、平均HER2拷贝数/细胞、平均CSP17拷贝数/细胞、平均HER2拷贝数/平土匀CSP17拷贝数白比值）、检测

16、结论（如阳性、不确定、阴性、无法判读）。这里强调两个概念：17号染色体计数和HER2异质性。1. 17号染色体数目：FISH双探针检测系统中加入CSP17探针的目的是为了在检测HER2基因的同时检测17号染色体数目，从而区分17号染色体的非整倍体与HER2基因扩增。近年来的研究显示17号染色体多倍体与CSP17多信号点（着丝粒区多点）是不同的概念。17号染色体多倍体较罕见，而部分乳腺癌中17号染色体上存在HER2基因和着丝粒区的共同扩增。越来越多的学者认为，与GSPHER2/CSP17比值相比，HER2拷贝数对于HER2基因扩增的判断更为重要。因此在HER2FISH检测结果中除报告GSPHER

17、2/CSP17比值外，还应分别报告HER2拷贝数和CSP17的数值。2. HER2基因的异质性：浸润性乳腺癌中HER2表达或扩增可存在异质性。虽然HER2基因异质性的临床意义目前仍不明确，但它可导致IHC与ISH检测、原发灶与转移灶、穿刺标本与手术切除标本的检测结果不一致。在ISH计数之前，应观察整张切片或使用IHC确定可能存在HER2扩增的区域。需要强调的是，即使存在异质性，但只要扩增细胞连续、均质，且占浸润癌10%以上，就应明确报告为ISH阳性。在报告中可补充报告不同细胞群（10%）的计数彳1（包括计数的细胞总数、HER2拷贝数、CSP1嘤值、GSPHER2/CSP17比值），并报告扩增细

18、胞群占所有浸润癌细胞的比例。2 .常见结果及解释FISH阴性（HER况扩增），17号二倍体。GSPHER2心SP17（红色/绿色）2.0。FISH临界，17号多倍体（HER2基因伴随多拷贝）。GSPHER2心SP17（红色/绿色）2.0，但平均每个细胞HER2贝数为4.9个，介于4.0-6.0之间。FISH阳性，17号多倍体。GSPHER2心SP17（红色/绿色）2.0，但平均每个细胞HER2贝数为6.8个，大于6.0。FISH阳性，17号染色体二倍体。GSPHER2心SP17（红色/绿色）FISH阳性，17号染色体多倍体。GSPHER2/CSP17（红色/绿色）FISH阳性，17号染色体单倍体。GSPHER2/CSP17（红色/绿色）2.0o2.0。2.0,平均每个细胞HER2贝数为2.0个，平均每个细胞CSP1褚贝数为1.