动物细胞工程(课件学习教案

1、会计学1动物细胞工程动物细胞工程(gngchng)(课件课件第一页，共56页。提问提问(twn)：v植物细胞工程常用的技术手段有哪些？植物细胞工程常用的技术手段有哪些？植物组织培养技术、植物组织培养技术、 植物体细胞杂交技术植物体细胞杂交技术动物细胞培养技术动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。是其他动物细胞工程技术的基础。第1页/共55页第二页，共56页。动物细胞与组织培养动物细胞与组织培养动物动物(dngw)细细胞融合胞融合单克隆抗体单克隆抗体(kngt)制备制备体细胞克隆体细胞克隆(k ln)细胞核移植细胞核移植动物动物细胞细胞工程工程技术技术动物细胞工程动物细胞工程的基础的基础

2、第2页/共55页第三页，共56页。植物植物(zhw)(zhw)组织培养组织培养 在无菌和人工控制的条件下在无菌和人工控制的条件下, ,将离体的植物器官将离体的植物器官、组织、细胞，培养在人工控制的培养基上，给、组织、细胞，培养在人工控制的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其产生愈伤组织、丛芽予适宜的培养条件，诱导其产生愈伤组织、丛芽，最终形成完整的植株。，最终形成完整的植株。第3页/共55页第四页，共56页。1、动物细胞培养的原理是什么？、动物细胞培养的原理是什么？2、从动物机体中要取出哪些相关组织？并、从动物机体中要取出哪些相关组织？并 解释原因解释原因。3、组织分散成单个细胞的方法是什么？

3、其理论依据是、组织分散成单个细胞的方法是什么？其理论依据是什么？什么？4、动物细胞体外培养需要满足、动物细胞体外培养需要满足(mnz)哪些条件？哪些条件？ 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官动物胚胎或幼龄动物的组织、器官(qgun) 它们细胞增殖能力强，分裂旺盛，分化程它们细胞增殖能力强，分裂旺盛，分化程度低，容易培养。度低，容易培养。细胞细胞(xbo)增增殖殖阅读课本阅读课本P44，简述动物细胞培养的基本，简述动物细胞培养的基本过程过程第4页/共55页第五页，共56页。动物动物(dngw)胚胎胚胎或幼龄动物或幼龄动物(dngw)的组织、的组织、器官器官胰蛋白酶胰蛋白酶(y dn bi mi)剪碎

4、剪碎单个细单个细胞胞(xbo)加培养液加培养液制成制成细胞细胞悬浮悬浮液液10代代细胞细胞部分细胞部分细胞“癌变癌变”，遗传物质改变，无限遗传物质改变，无限传代传代动物细胞培养不能动物细胞培养不能最终培养成动物体最终培养成动物体50代细胞代细胞原代培养原代培养传代培养传代培养细胞贴壁细胞贴壁剥离、分瓶剥离、分瓶细胞株细胞株细胞细胞细胞系细胞系动物细胞培养过程动物细胞培养过程第5页/共55页第六页，共56页。第6页/共55页第七页，共56页。第7页/共55页第八页，共56页。第8页/共55页第九页，共56页。细胞细胞悬浮悬浮液液1010代代细胞细胞5050代代细胞细胞无限无限传代传代原代培养原代

5、培养传代培养传代培养细胞株细胞株细胞系细胞系如何如何(rh)(rh)界定原代培养和传代培养；细胞界定原代培养和传代培养；细胞株和细胞系？株和细胞系？多数组织细胞固定在表面生长和分裂多数组织细胞固定在表面生长和分裂。随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖遗传物质改变遗传物质改变(gibin)第9页/共55页第十页，共56页。思考思考(sko)讨论讨论1.动物细胞培养取材时，一般是取胚胎组织或幼龄动动物细胞培养取材时，一般是取胚胎组织或幼龄动物的组织或器官，请解释物的组织或器官，请解释(jish)原因。原因。细胞的衰老与动物机体的衰老有着密切的关系，细胞的增殖能力与供体的

6、细胞的衰老与动物机体的衰老有着密切的关系，细胞的增殖能力与供体的年龄年龄(ninlng)有关，幼龄动物细胞增殖能力强，有丝分裂旺盛，老龄动物有关，幼龄动物细胞增殖能力强，有丝分裂旺盛，老龄动物则相反。所以，一般来说幼年动物的组织细胞比老年动物的组织细胞易于则相反。所以，一般来说幼年动物的组织细胞比老年动物的组织细胞易于培养。同样，组织细胞的分化程度越低，则增殖能力越强，所以更容易培培养。同样，组织细胞的分化程度越低，则增殖能力越强，所以更容易培养。养。肿瘤组织或细胞肿瘤组织或细胞 正常组织或细胞正常组织或细胞 拓展拓展-动物组织或细胞培养的难易程度动物组织或细胞培养的难易程度幼体组织或细胞幼体

7、组织或细胞 老龄组织或细胞老龄组织或细胞分化程度低的组织或细胞分化程度低的组织或细胞 分化程度高的组织或细胞分化程度高的组织或细胞第10页/共55页第十一页，共56页。2、人类一般保存、人类一般保存(bocn)的是哪类细胞呢？的是哪类细胞呢？为什么？为什么？ 保存保存10代以内的细胞，因为其生物学特性未发生代以内的细胞，因为其生物学特性未发生(fshng)大的变化，最接近于体内组织或细胞的生长特大的变化，最接近于体内组织或细胞的生长特性，很适合用于药物测试、基因表达等实验研究。性，很适合用于药物测试、基因表达等实验研究。3、在动物细胞培养过程中，为什么要用胰蛋白酶对取出的动、在动物细胞培养过程

8、中，为什么要用胰蛋白酶对取出的动物组织进行物组织进行(jnxng)处理？处理？ 胰蛋白酶处理动物组织，可以使动物组织细胞间的胶原胰蛋白酶处理动物组织，可以使动物组织细胞间的胶原纤维和细胞外的其他成分酶解，获得单个细胞纤维和细胞外的其他成分酶解，获得单个细胞; ;成块的组成块的组织细胞靠在一起织细胞靠在一起,彼此限制了细胞的生长和增殖彼此限制了细胞的生长和增殖.第11页/共55页第十二页，共56页。.植物组织培养过程将组织分散成单个细胞的吗？植物组织培养过程将组织分散成单个细胞的吗？.胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明细胞间的物质是什么成份？胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明细胞间的物质是什么成

9、份？.细胞膜的主要成份是什么？胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？细胞膜的主要成份是什么？胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？.既然胰蛋白酶能将细胞消化掉，那将动物组织分散成单个细胞要注意既然胰蛋白酶能将细胞消化掉，那将动物组织分散成单个细胞要注意(zh y)什么问题呢？能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？什么问题呢？能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？进一步思考进一步思考(sko)：否否 胰蛋白酶胰蛋白酶(y dn bi mi)水解水解蛋白质蛋白质蛋白质蛋白质蛋白质和磷脂蛋白质和磷脂能能注意时间的控制注意时间的控制 不能，因为两者的最适不能，因为两者的最适PH不同，而正常组织细胞的生存环境与胰不同，而正常组

10、织细胞的生存环境与胰蛋白酶的最适蛋白酶的最适PH较接近较接近第12页/共55页第十三页，共56页。 多细胞动物和人体的细胞多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境都生活在内环境(hunjng)中中，根据你所学的知识，认为体，根据你所学的知识，认为体外培养细胞应该模拟内环境外培养细胞应该模拟内环境(hunjng)的哪些内容呢？的哪些内容呢？第13页/共55页第十四页，共56页。1、无菌、无毒的环境、无菌、无毒的环境(hunjng) （添加一定量的抗生素，定期更换培养液）（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）2、必须、必须(bx)的营养物质的营养物质（葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、核酸、嘌呤、嘧（葡

11、萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、核酸、嘌呤、嘧啶、激素、生长因子、动物血清等。）啶、激素、生长因子、动物血清等。）保证细胞顺利的生保证细胞顺利的生长增殖长增殖3、适宜的温度、适宜的温度 36.5+（-）度4、充足的氧气和适宜的酸碱度、充足的氧气和适宜的酸碱度 O2和和CO2（95%空气和空气和5% CO2 ）第14页/共55页第十五页，共56页。问题问题(wnt)：1、培养基的类型、培养基的类型(lixng)（1）天然培养基：营养价值高，成分复杂）天然培养基：营养价值高，成分复杂（2）合成培养基：成分明确，便于控制）合成培养基：成分明确，便于控制(kngzh)试验条件试验条件2、动物细胞培养液的

12、主要成分是什么？较植物、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组织培养基有何独特之处？组织培养基有何独特之处？主要成分：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和主要成分：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。动物血清等。独特之处有：独特之处有：1、液体培养基（、液体培养基（动物体细胞大都动物体细胞大都生活在生活在液体液体的环境的环境） 2、成分中有动物血清等、成分中有动物血清等第15页/共55页第十六页，共56页。获得获得(hud)(hud)细胞细胞细胞细胞(xbo)(xbo)的的全能性全能性细胞株、细胞系细胞株、细胞系植物体植物体培养培养(piyng)(piyng)结果结果或细胞产物或细胞产物

13、快速繁殖、培育快速繁殖、培育无病毒植株等无病毒植株等培养目的培养目的葡萄糖、动物血葡萄糖、动物血清清蔗糖、植物激蔗糖、植物激素素培养基特有成分培养基特有成分液体培养基液体培养基固体培养基固体培养基培养基性质培养基性质细胞增殖细胞增殖原理原理动物细胞培养动物细胞培养植物组织培养植物组织培养比较项目比较项目植物组织和动物细胞培养的比较植物组织和动物细胞培养的比较第16页/共55页第十七页，共56页。第17页/共55页第十八页，共56页。小结小结(xioji)(xioji) 动物细胞和组织培养（原理、材料选择及原因、一般过程动物细胞和组织培养（原理、材料选择及原因、一般过程(guchng)、培养条件

14、、主要应用）、培养条件、主要应用）注意：注意：概念理解：原代培养、传代培养、细胞株概念理解：原代培养、传代培养、细胞株 、细胞系、细胞系胰蛋白酶胰蛋白酶(y dn bi mi)处理的原因、目的和注意事处理的原因、目的和注意事项项动物细胞培养和植物组织培养的区别动物细胞培养和植物组织培养的区别第18页/共55页第十九页，共56页。思考与探究：思考与探究：如何用细胞培养技术，为烧伤如何用细胞培养技术，为烧伤(shoshng)病人植皮？病人植皮？ 取该患者的皮肤进行取该患者的皮肤进行(jnxng)细胞培养细胞培养,获得足量的细获得足量的细胞后再移植胞后再移植第19页/共55页第二十页，共56页。1

15、1、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变(gibin)(gibin)的细的细胞是胞是 （ ）A A细胞系细胞系 B B细胞株细胞株 C C原代细胞原代细胞 D D传代细胞传代细胞2 2、动物细胞工程技术的基础是、动物细胞工程技术的基础是 （ ）A.A.动物细胞融合动物细胞融合 B. B.单克隆抗体单克隆抗体C.C.胚胎移植胚胎移植 D. D.动物细动物细胞培养胞培养3 3、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样

16、的组织细胞织细胞 （ ）A.A.容易产生各种变异容易产生各种变异 B B具有更强的全能性具有更强的全能性C.C.取材十分方便取材十分方便 D D分裂增殖的能力强分裂增殖的能力强4 4、下列属于动物细胞工程中的工具是（、下列属于动物细胞工程中的工具是（ ）A A限制性内切酶限制性内切酶 B BDNADNA连接酶连接酶C C胰蛋白酶胰蛋白酶 D D果胶酶果胶酶ADDC第20页/共55页第二十一页，共56页。5 5、在动物细胞培养的有关叙述中，正确的是（、在动物细胞培养的有关叙述中，正确的是（ ）A A动物细胞培养的目的就是为了获得大量的细胞分泌蛋白动物细胞培养的目的就是为了获得大量的细胞分泌蛋白B

17、 B动物细胞培养前要用胰蛋白酶处理使细胞分散动物细胞培养前要用胰蛋白酶处理使细胞分散C C细胞遗传物质细胞遗传物质(wzh)(wzh)的改变发生于原代培养过程中的改变发生于原代培养过程中D D培养至培养至5050代后继续传代的细胞是细胞株代后继续传代的细胞是细胞株6 6、在动物细胞培养中有部分细胞可能在培养条件下无限制地传代下、在动物细胞培养中有部分细胞可能在培养条件下无限制地传代下去，这种传代细胞称之为（去，这种传代细胞称之为（ ）A A原代培养原代培养 B B传代培养传代培养 C C细胞株细胞株 D D细胞系细胞系7 7、动物细胞培养的正确过程是（、动物细胞培养的正确过程是（ ）A.A.原

18、代培养原代培养传代培养传代培养细胞株细胞株细胞系细胞系 B. B. 原代培养原代培养传代培养传代培养细胞系细胞系细胞株细胞株C.C.传代培养传代培养细胞系细胞系原代培养原代培养细胞株细胞株 D. D. 原代培养原代培养细胞系细胞系传代培养传代培养细胞株细胞株8 8、下列与动物细胞培养有关的表述中，不正确的是（、下列与动物细胞培养有关的表述中，不正确的是（ ）A A培养液通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清培养液通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清B B原代培养的细胞一般传至原代培养的细胞一般传至1010代左右便会出现生长停滞代左右便会出现生长停滞C C动物细胞培养一般能

19、够传到动物细胞培养一般能够传到40405050代，但其遗传物质代，但其遗传物质(wzh)(wzh)发发生了改变生了改变D D动物细胞培养可用于检测有毒物质动物细胞培养可用于检测有毒物质(wzh)(wzh)和获得大量自身健康和获得大量自身健康细胞细胞BDAC第21页/共55页第二十二页，共56页。下图是动物细胞培养的基本过程下图是动物细胞培养的基本过程(guchng)(guchng)示意图示意图。请据此图回答。请据此图回答(1)(1)容器容器A A中放置的是动物器官或组织。它一般取自中放置的是动物器官或组织。它一般取自_ _ 。(2)(2)容器容器A A中的动物器官或组织首先要进行的处理是中的动

20、物器官或组织首先要进行的处理是_，然后用，然后用 酶处理，这是为了使细胞分散开来。这酶处理，这是为了使细胞分散开来。这样做的目的是样做的目的是_ _._ _. (3) (3)培养首先在培养首先在B B瓶中进行。瓶中的培养基成分有瓶中进行。瓶中的培养基成分有_ _ _ _ 等。在等。在此瓶中培养一段时间后，一般传到第此瓶中培养一段时间后，一般传到第 代，有许多代，有许多细胞衰老死亡，到这时的培养称为细胞衰老死亡，到这时的培养称为_._.(4)(4)为了把为了把B B瓶中的细胞分装到瓶中的细胞分装到C C瓶中，用瓶中，用_ _ _处理，然后配置处理，然后配置(pizh)(pizh)成成_，再分装。

21、，再分装。(5)(5)在在C C瓶中正常培养了一段时间后，发现细胞全部死亡瓶中正常培养了一段时间后，发现细胞全部死亡。原因是。原因是_。幼龄动物的器官或组织幼龄动物的器官或组织(zzh)、动物胚胎、动物胚胎剪碎剪碎 胰蛋白胰蛋白 使每个细胞能与培养液接触使每个细胞能与培养液接触 葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清 10原代培养原代培养胰蛋白酶胰蛋白酶 细胞悬浮液细胞悬浮液细胞没有发生瘤变细胞没有发生瘤变第22页/共55页第二十三页，共56页。核移植核移植（难度（难度(nd)高）高）受体细胞：受体细胞：M期的期的卵母细胞卵母细胞二、动物二、动物(dn

22、gw)体细胞核移植技术和体细胞核移植技术和克隆动物克隆动物(dngw)胚胎细胞核移植：胚胎细胞核移植：体细胞核移植：体细胞核移植：细胞分化程度低，细胞分化程度低，恢复全能性容易恢复全能性容易第23页/共55页第二十四页，共56页。卵母卵母细胞细胞去核去核体细体细胞取胞取核核电刺激电刺激(cj)使使两细胞两细胞融合融合重组重组(zhn z)细胞细胞重组胚胎重组胚胎新个体新个体第24页/共55页第二十五页，共56页。卵细胞卵细胞母绵羊母绵羊母绵羊母绵羊乳腺细胞乳腺细胞细胞质细胞质细胞核细胞核细胞核移植细胞核移植(yzh)(yzh)早期胚胎早期胚胎卵裂卵裂C母绵羊子宫母绵羊子宫胚胎移植胚胎移植多莉羊

23、多莉羊分娩分娩妊娠妊娠多莉羊的培育多莉羊的培育(piy)过程过程融合后的卵细胞融合后的卵细胞第25页/共55页第二十六页，共56页。克克隆隆羊羊培培育育(piy)过过程程黑面绵羊去黑面绵羊去核卵细胞核卵细胞白面绵羊乳白面绵羊乳腺细胞核腺细胞核细胞核移植细胞核移植重组细胞重组细胞电脉冲刺激电脉冲刺激早期胚胎早期胚胎胚胎移植胚胎移植另一头绵羊另一头绵羊(minyng)的子宫的子宫妊娠、出生妊娠、出生克隆羊多利克隆羊多利第26页/共55页第二十七页，共56页。、在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前、在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前(zhqin)，为什么必须先去掉受体卵母细胞的核，为什么必须先

24、去掉受体卵母细胞的核？为使核移植动物的遗传物质全部来自有利用价值为使核移植动物的遗传物质全部来自有利用价值的动物提供的动物提供(tgng)(tgng)的细胞。的细胞。、用于核移植的供体细胞一般都选用、用于核移植的供体细胞一般都选用(xunyng)(xunyng)传传代代1010代以内的细胞，为什么？代以内的细胞，为什么？1010代以内的细胞一般保持正常二倍体的核型，代以内的细胞一般保持正常二倍体的核型，未发生突变未发生突变思考题思考题第27页/共55页第二十八页，共56页。3 3、体细胞核移植方法生产的克隆动物是对体细、体细胞核移植方法生产的克隆动物是对体细胞供体动物进行胞供体动物进行(jnx

25、ng)(jnxng)了了100%100%的复制吗？为的复制吗？为什么？什么？不是，克隆动物不是，克隆动物(dngw)(dngw)绝大部分绝大部分DNADNA来自来自供体细胞核，但核外还有少部分供体细胞核，但核外还有少部分DNADNA（如线粒（如线粒体体DNADNA）来自受体卵母细胞）来自受体卵母细胞在在19971997年年2 2月英国罗斯林研究所维尔穆特博士科研组公布体月英国罗斯林研究所维尔穆特博士科研组公布体细胞克隆羊细胞克隆羊“多莉多莉”培育成功之前，胚胎细胞核移植技术已经有了培育成功之前，胚胎细胞核移植技术已经有了很大的发展。实际上，很大的发展。实际上，“多莉多莉”的克隆在核移植技术上沿

26、袭了胚胎的克隆在核移植技术上沿袭了胚胎细胞核移植的全部过程，但这并不能减低细胞核移植的全部过程，但这并不能减低“多莉多莉”的重大意义，因的重大意义，因为它是世界上为它是世界上第一例第一例经体细胞核移植出生的动物，是克隆技术领经体细胞核移植出生的动物，是克隆技术领域研究的巨大突破。这一巨大进展意味着：域研究的巨大突破。这一巨大进展意味着：在理论上证明了，同植在理论上证明了，同植物细胞一样，分化了的动物物细胞一样，分化了的动物细胞核细胞核也具有全能性也具有全能性 第28页/共55页第二十九页，共56页。体细胞核移植技术的应用体细胞核移植技术的应用(yngyng)前景前景 1、加速、加速(ji s)

27、家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育育2、保护濒危物种、保护濒危物种(wzhng)，增加存活，增加存活数量数量3、克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白、克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白4、可以作为异种移植的供体，可以用于组织器官、可以作为异种移植的供体，可以用于组织器官的移植的移植第29页/共55页第三十页，共56页。体细胞核移植技术存在体细胞核移植技术存在(cnzi)的问的问题：题：许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷，如体型许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷，如体型过大，异常肥胖，发育困难，脏器过大，异常肥胖，发育困难，脏器(zn q)缺缺陷，免疫失调等。陷，免

28、疫失调等。在研究方面，克隆动物基因组重新编程的机制在研究方面，克隆动物基因组重新编程的机制尚不清楚，克隆技术效率低，克隆动物畸形率尚不清楚，克隆技术效率低，克隆动物畸形率高、死亡率高、易出现早衰等问题。这些问题高、死亡率高、易出现早衰等问题。这些问题尚在研究中。尚在研究中。在应用上，生产克隆动物费用在应用上，生产克隆动物费用(fi yong)昂贵，昂贵，距大规模应用还有一定距离。距大规模应用还有一定距离。第30页/共55页第三十一页，共56页。 “番茄番茄(fnqi)马铃薯马铃薯”理理想图想图 通过通过(tnggu)长期的实验，科长期的实验，科学家们采用体细胞杂交技术获得了学家们采用体细胞杂交

29、技术获得了“番茄番茄马铃薯马铃薯”植株。植株。第31页/共55页第三十二页，共56页。杂杂种种(zzhng)植植株株筛选筛选(shixu(shixun)n)融合融合ABAB的原生的原生质体质体再再生生(zishng)出出细细胞胞壁壁脱脱分分化化愈愈伤伤组组织织再再分分化化植物细胞的融合植物细胞的融合植物组织培养植物组织培养植物细胞植物细胞A原生质体原生质体B原生质体原生质体A杂种杂种细胞细胞AB去去 壁壁去去 壁壁人人工工诱诱导导方法？方法？促进融合的促进融合的方法？方法？融合完成的融合完成的标志标志植物细胞植物细胞B植物体细胞杂交技术过程植物体细胞杂交技术过程原理？原理？原理？原理？第32页

30、/共55页第三十三页，共56页。成果和未解决(jiju)的问题 成果：克服不同生物远缘杂交成果：克服不同生物远缘杂交(zjio)(zjio)的障碍，的障碍，出出 现自然界没有的新品种。现自然界没有的新品种。未解决的问题：未能让杂种植物按照人们未解决的问题：未能让杂种植物按照人们 的需要表现的需要表现(bioxin)(bioxin)出亲代的优良。出亲代的优良。第33页/共55页第三十四页，共56页。如果将牛的细胞与植物如果将牛的细胞与植物(zhw)细胞杂交细胞杂交，得到绿色的小奶牛，那岂不是只要晒晒，得到绿色的小奶牛，那岂不是只要晒晒太阳就可以挤出牛奶啦！太阳就可以挤出牛奶啦！动物细胞也能融合动

31、物细胞也能融合(rngh)吗吗？第34页/共55页第三十五页，共56页。第35页/共55页第三十六页，共56页。请同学们阅读课本请同学们阅读课本P52动物细胞融合动物细胞融合(rngh)内内容容问题：什么是动物细胞融合问题：什么是动物细胞融合(rngh)？它相当？它相当于植物体细胞杂交过程的哪一步？它们的过程于植物体细胞杂交过程的哪一步？它们的过程、基本原理、诱导融合、基本原理、诱导融合(rngh)方法和意义是方法和意义是否相同？否相同？ 第36页/共55页第三十七页，共56页。不同不同(b tn(b tn)DNA)DNA的两个细胞的两个细胞灭活病毒灭活病毒(bngd)(bngd)诱导诱导细胞

32、融合细胞融合融合后的细胞进行融合后的细胞进行(jnxng)(jnxng)有丝分裂有丝分裂1 1、动物细胞融合过程、动物细胞融合过程灭活丧失感染性灭活丧失感染性保留融合活性保留融合活性第37页/共55页第三十八页，共56页。动物细胞融合过程动物细胞融合过程(guchng)(guchng)、原理与诱导、原理与诱导方法方法第38页/共55页第三十九页，共56页。酶解法酶解法(ji f)，如纤维素酶或果胶酶，如纤维素酶或果胶酶2 2、动物细胞融合时需要进行、动物细胞融合时需要进行(jnxng)(jnxng)去壁处理吗？为什去壁处理吗？为什么？么？无需，因为动物细胞无细胞壁无需，因为动物细胞无细胞壁3

33、3、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？离心、电激等物理方法；离心、电激等物理方法；PEG等化学方法等化学方法4 4、动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其他方法、动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其他方法吗？吗？能能 还可以利用灭活的病毒进行诱导还可以利用灭活的病毒进行诱导5 5、植物体细胞杂交应先进行原生质体的融合再进行组织培养、植物体细胞杂交应先进行原生质体的融合再进行组织培养形成完整的杂种个体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体形成完整的杂种个体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗？吗？不能不能6 6、你能归纳出什么叫做

34、动物细胞融合吗？、你能归纳出什么叫做动物细胞融合吗？第39页/共55页第四十页，共56页。第40页/共55页第四十一页，共56页。主要主要(zhyo)(zhyo)用用于制备于制备单克隆抗体单克隆抗体(kngt)(kngt)获得杂种获得杂种(zzhng)(zzhng)植株植株用途用途物理、化学方法物理、化学方法（同左）（同左）灭活的病毒灭活的病毒物理（离心、振动、物理（离心、振动、电刺激）电刺激）化学（聚乙二醇）化学（聚乙二醇）诱导方法诱导方法使细胞分散后诱使细胞分散后诱导细胞融合导细胞融合去除细胞壁后诱去除细胞壁后诱导原生质体融合导原生质体融合细胞融合的方法细胞融合的方法细胞膜的流动性细胞膜的

35、流动性细胞膜的流动性、细胞膜的流动性、植物细胞全能性植物细胞全能性原理原理动物细胞融合动物细胞融合植物体细胞杂交植物体细胞杂交比较项目比较项目植物、动物细胞融合的比较植物、动物细胞融合的比较第41页/共55页第四十二页，共56页。思考题思考题 利用利用(lyng)动物细胞融合技术诱导形成杂交动物细胞融合技术诱导形成杂交瘤细胞瘤细胞8、在生产、在生产(shngchn)实际中杂交瘤细胞有怎实际中杂交瘤细胞有怎样的应用？样的应用？ 生产单克隆抗体生产单克隆抗体第42页/共55页第四十三页，共56页。提提问问？1.抗体是由何种细胞产生的？抗体是由何种细胞产生的？、一个淋巴细胞、一个淋巴细胞(浆细胞浆细

36、胞)能分泌多种能分泌多种抗体吗？抗体吗？、一种抗原侵入机体之后，引起机体免、一种抗原侵入机体之后，引起机体免疫反应产生的抗体只有一种吗？疫反应产生的抗体只有一种吗？. 简述获得抗体的传统途径？简述获得抗体的传统途径？、这种方法获得的抗体有什么、这种方法获得的抗体有什么(shn me)缺陷？缺陷？二、单克隆抗体二、单克隆抗体(kngt)第43页/共55页第四十四页，共56页。问题：抗体由什么细胞问题：抗体由什么细胞产生产生(chnshng)？其？其化学本质是什么？与抗化学本质是什么？与抗原作用的特点？主要分原作用的特点？主要分布在哪里？布在哪里？1抗体抗体(kngt)第44页/共55页第四十五页

37、，共56页。 一个天然抗原物质可有多种和多个决定簇。教材一个天然抗原物质可有多种和多个决定簇。教材中所说的抗原分子刺激淋巴细胞，说的也就是抗原中所说的抗原分子刺激淋巴细胞，说的也就是抗原决定簇刺激决定簇刺激B B淋巴细胞，使其分裂淋巴细胞，使其分裂(fnli)(fnli)分化出特分化出特异性的效应异性的效应B B细胞，分泌特异性抗体。细胞，分泌特异性抗体。第45页/共55页第四十六页，共56页。抗体抗体(kngt)的传统生产方法的传统生产方法从从血血清清(xuqng)中中分分离离抗抗体体该法制备抗体的特点：该法制备抗体的特点： 产量产量(chnling)低、纯度低低、纯度低，且抗体的特异性差、

38、灵敏度，且抗体的特异性差、灵敏度低。低。多多种种效效应应B细细胞胞动动物物体体内内多多种种抗抗体体抗抗原原 第46页/共55页第四十七页，共56页。 抗原抗原 动物体动物体刺激刺激浆细胞浆细胞 抗体抗体抗体抗体(kngt)不不纯纯特异性差、纯度特异性差、纯度(chnd)(chnd)低；低；产量低、反应产量低、反应(fnyng)(fnyng)不够灵敏不够灵敏传统血清抗体的制备传统血清抗体的制备抗原不纯抗原不纯 每个淋巴细胞只能分泌一种抗体，由一个淋巴细胞增每个淋巴细胞只能分泌一种抗体，由一个淋巴细胞增殖产生的细胞群分泌的抗体化学成份是单一的。殖产生的细胞群分泌的抗体化学成份是单一的。如何获得化学

39、性质单一、特异性强的抗体？如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？体外培养淋巴细胞能无限增殖吗体外培养淋巴细胞能无限增殖吗? 体外培养单个淋巴细胞，提取分泌的抗体体外培养单个淋巴细胞，提取分泌的抗体怎样解决这个问题？怎样解决这个问题？第47页/共55页第四十八页，共56页。设计方案：设计方案：一个一个B B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体淋巴细胞只分泌一种特异性抗体(kngt)(kngt)小鼠骨髓瘤细胞能无限增殖小鼠骨髓瘤细胞能无限增殖杂种杂种(zzhng)细胞细胞既能分泌既能分泌(fnm)一种特异性抗体又能无一种特异性抗体又能无限增殖限增殖第48页/共55页第四十九页，共56页。2.2.制备制备(zhbi)(zhbi)过程过程：诱导其融合诱导其融合(rngh)的方法有哪些的方法有哪些？融合融合(rngh)后培养液中有几种后培养液中有几种细胞细胞怎样筛选出杂交瘤细胞，杂交怎样筛选出杂交瘤细胞，杂交瘤细胞有何优点瘤细胞有何优点注射抗原的目的是什么注射抗原的目的是什么为何要进行克隆化培养和专一为何要进行克隆化培养和专一抗体检测，多次筛选抗体检测，多次筛选大量增殖杂交瘤细胞获得单抗大量增殖杂交瘤细胞获得单抗的方法的方法第49页/共55页第五十页，共56页。B BB B瘤瘤 瘤