液相色谱法-2

1、 内部硅氧交联结构多孔结构 表面有硅醇基氢键作用吸附活性中心1）与极性物质或不饱和化合物形成氢键 物质极性，吸附能力强极性吸附中心，不易洗脱 吸附活性次序：活泼型束缚型游离型 2）吸水失活 105110OC烘干30分钟(可逆失水)吸附力最大 500OC烘干(不可逆失水)活性丧失，无吸附力分析酸性或中性物质 续前流动相的选择三方面1.被分离物质的结构、极性与吸附力的关系2.吸附剂的活性与被分离组分极性关系3.洗脱剂的极性与被分离组分的关系续前图示图示L0L1L2在展开剂中出现的几率为单位时间内一个分子设R在固定相中出现的几率为单位时间内一个分子设R101010LLtLtLuuRR) 1(R01L

2、LRf原点到溶剂前沿的距离心的距离原点到组分斑点质量中mSVVKR11又110LLLVVKmS定时展开保留比续前smmmSfVKVVVVKRR11fRK续前Rf值重现性值重现性: 影响Rf值的因素较多，Rf值重现性较差，相对比移值Rst：以消除因色谱操作条件而引起的误差。Rst的定义为： 可在同一块板上可消除误差 心的距离原点到参考物质斑点中原点到斑点中心的距离stR21LLRRRffs中心的距离原点到参考物斑点质量心的距离原点到组分斑点质量中（参）（组）根据被测物极性和吸附剂的吸附能力 被测物极性强弱极性吸附剂 被测物极性弱强极性吸附剂根据被测组分、吸附剂和展开剂本身的极性展开剂展开剂吸附剂

3、被分离组分非极性极性非极性极性I 级V 级展开剂、吸附剂和被分离组分关系示意图 实际工作中，1.选择展开剂需通过实验来摸索。一般先用单一溶剂进行展开，根据待测组分在薄层板上的分离效果，2.进一步改变展开剂的极性，或使用混合溶剂，按一定比例混合后进行试验，直到能良好分离为止。3.通常要求组分的Rf值在0.20.8之间，各组分间的Rf值之差应大于0.05。 注： 在用多元混合展开剂时，各种溶剂所起作用不同。 占比例大的溶剂在展开过程中主要起溶解物质和基本分离作用。 占比例较小的溶剂主要起调整改善各组分Rf值的作用。 分离酸性或碱性组分： 在展开剂中加入少量酸或碱，可使某些极性物质斑点集中，提高分离

4、度。环已烷 丙酮 水 二乙胺 10 5 5 2 实际应用中： 从文献上查找：薄层色谱用的吸附剂和展开剂 在参考他人工作的基础上，加以必要的改进。 操作技术 1薄层板的类型、制备和活化 （1）类型 薄层板有不加粘合剂的软板和加粘合剂的硬板两种类型。软板无商品，须自制。硬板有商品，也可以自制。常用的粘合剂：常用的粘合剂： 煅石膏(Gypsum，2CaSO4H2O)、羧甲基纤维素钠（CMCNa）、淀粉和聚丙烯酸（为高效薄层板常用粘合剂）。商品硬板有：商品硬板有： 硅胶G（含煅石膏作粘合剂）、硅胶H、硅胶HF254、硅胶GF254、硅胶HF254+366及高效硅胶薄层板等。 F代表含荧光剂，在254

5、nm或366 nm紫外光下可观察到荧光。这类薄层板适用于本身不发荧光且不易显色的试样。这类薄层板适用于本身不发荧光且不易显色的试样。氧化铝：氧化铝：与硅胶相似，也因是否含粘合剂或荧光剂而分为氧化铝G，氧化铝GF254及氧化铝HF254等品种。（2）制备 薄层板制备的好坏直接影响薄层色谱的效果，薄层要求均匀而且厚度（0.251 mm）一致。 薄层色谱通常采用硬板，用湿法制备，即在加粘合 剂的吸附剂内按一定比例加水或其它溶剂，调成糊 状后铺层。 湿法铺层有倾注法、刮层平铺法和涂铺器铺层 法，其中涂铺器制板简单，制成的板均匀光滑。 （3）活化活化 把涂好的薄层板于室温下平放，自然凉干后放入烘箱中加热

6、活化。活化条件根据需要而定。 硅胶板：硅胶板：一般在烘箱中逐渐升温，维持105110活化30 min。 氧化铝氧化铝板：在200烘4 h可得活性II级的薄层，150160烘4 h可得活性IIIIV级的薄层。2点样点样 样品溶于低沸点且极性与展开剂相似的溶剂，配成0.5%1%试液，应避免用水，以防样点在展开时扩散。 用直径小于1 mm的毛细管或微量注射器点样，也可用滤纸移样。点样量要适中，并控制斑点直径不超过23 mm。 现已有商品点样装置可供使用。现已有商品点样装置可供使用。 3展开展开 待样点上溶剂挥干后，即可进行展开。展开缸要求磨口密闭。 上行展开法：上行展开法：软板采用近水平方向展开（与

7、水平约成510角），硬板用近垂直方向展开（与水平成4560角或垂直）。 对对Rf值小的物质可用下行展开法：值小的物质可用下行展开法： 即在薄层板上方放置一溶剂槽，用滤纸或纱巾把溶剂引到板的上端，借助重力作用使展开剂下移。组成复杂的混合物：组成复杂的混合物： 可采用二次展开、连续展开或双向展开。或用相同、不同极性的溶剂以同样的方法再展开一次。 连续展开：连续展开：需在特制的展开缸中进行，将薄层板顶部敞于缸外，溶剂上升到板顶部即向外界不断挥发，它是不增加板长而改进分离的一种方法。 双向展开：双向展开：所用薄层板为正方形，将试样点在板的一角，先向一个方向展开至前沿后，取出板挥干溶剂，再用另一种溶剂于

8、前次展开的垂直方向以同样方式再展开一次，这种方法分离效果较好。当用混合溶剂展开时，要防止产生“边缘效应”（edge effect）。 边缘效应是指同一组分的斑点在薄层中部比在边缘移动慢的现象。规定展开高度溶剂前沿展开方向边缘效应边缘效应产生原因：产生原因： 由于展开缸中混合溶剂未饱和，极性弱的溶剂在两边缘处易挥发，使展开剂组成与中部不同，边缘处含更多极性大的溶剂，洗脱能力强，因此Rf值较大。 可用在展开缸内衬一滤纸以加速溶剂蒸发饱和，或将薄层板两侧边缘吸附剂刮去12 mm的方法消除边缘效应。4显色显色 展开后的斑点若没有颜色，则需用显色方法定位。常用方法有：常用方法有：（1）紫外光照射法 在紫

9、外光（常用汞弧灯）照射下， 如样品能产生荧光，可观察荧光斑点； 若样品不产生荧光而吸附剂中含荧光物质（如硅胶GF254），则板上显荧光，而斑点为暗色。（2）气熏显色法 将几粒碘置于密闭容器中，待碘蒸气饱和后，将展开后的干燥薄层板放入，碘与化合物可逆地结合，斑点显淡棕色。薄层板取出后，碘即升华逸出。因此显色后应立即标记斑点。 （3）喷洒显色剂法 软板一般采用湿态显色，硬板应在溶剂挥干后才喷显色剂显色。此法显色后的物质已被破坏，不能再行回收。 mSfVVKR11实验方法（三）定性定量 与薄层色谱相似，纸色谱法定性的依据也是Rf值。对未知物样品，应使用多种不同溶剂分别进行展开，若所得到的各Rf 值均与纯品的R