流式细胞分析分选原理PPT学习教案

1、会计学1流式细胞分析流式细胞分析(fnx)分选原理分选原理第一页，共54页。第1页/共54页第二页，共54页。流式细胞仪与显微镜流式细胞仪与显微镜光源激光自然光、灯光、氙(汞)灯对象细胞、生物粒子细胞、生物粒子承载工具载(盖)玻片鞘液及流动室检测信号 光学信号形态及染色放大方式PMT，放大电路目镜X物镜统计人工，200计算机，5000结果简单，单参数多参数，综合分析第2页/共54页第三页，共54页。第3页/共54页第四页，共54页。流式细胞仪流式细胞仪光路光路流路流路电子电子(dinz)软件软件(run jin)第4页/共54页第五页，共54页。流路流路光路光路电路电路(dinl)/电电子子软

2、件软件(run jin)第5页/共54页第六页，共54页。第6页/共54页第七页，共54页。Injector TipFluorescencesignalsFocused laserbeamSheath fluid第7页/共54页第八页，共54页。流路流路光路光路电路电路(dinl)/电电子子软件软件(run jin)第8页/共54页第九页，共54页。光光 路路光源光源检测信号检测信号 散射光信号散射光信号FS: 前向角散射光前向角散射光SS: 侧向角散射光侧向角散射光(90度散射光度散射光) 荧光荧光(ynggung)信号信号荧光荧光(ynggung)染料染料光学滤片光学滤片 颜色补偿颜色补偿

3、第9页/共54页第十页，共54页。第10页/共54页第十一页，共54页。检测检测(jin c)(jin c)信号信号第11页/共54页第十二页，共54页。nFS用于检测细胞或其他粒子的表面属性n如:大小第12页/共54页第十三页，共54页。前向散射光前向散射光第13页/共54页第十四页，共54页。第14页/共54页第十五页，共54页。第15页/共54页第十六页，共54页。侧向侧向(c xin)散射光散射光第16页/共54页第十七页，共54页。第17页/共54页第十八页，共54页。第18页/共54页第十九页，共54页。90 Degree Scatter0 200 400 600 80010008

4、15203040501002001000LymphocytesMonocytesNeutrophilsSide Scatter ProjectionLight Scatter GatingScale第19页/共54页第二十页，共54页。第20页/共54页第二十一页，共54页。激发波长(bchng)(EXCITING)发射波长(bchng)(EMISSION)第21页/共54页第二十二页，共54页。Fluorescence emitted by each fluorochrome is usually detected in a unique fluorescence channel.The s

5、pecificity of detection is controlled by the wavelength selectivity of optical filters and mirrors.第22页/共54页第二十三页，共54页。Absorption spectrum:Range over which a fluorescence compound may be excitedEmission spectrum:Range of emitted wavelengths for a particular compound第23页/共54页第二十四页，共54页。第24页/共54页第二十五页

6、，共54页。第25页/共54页第二十六页，共54页。荧光(ynggung)染料 激发波长 (nm) 发射波长(nm) 用途 颜色FITC 488 525 免疫荧光(ynggung) 绿色PE(RD1) 488 575 免疫荧光(ynggung) 橙色 ECD 488 620 免疫荧光(ynggung) 橙红PeCy5 488 675 免疫荧光(ynggung) 红PI 488 620 DNA染色 橙红PECy7 488 755 免疫荧光(ynggung) 深红PerCP 488 670APC 633 670第26页/共54页第二十七页，共54页。第27页/共54页第二十八页，共54页。标准标准

7、(biozhn)带通滤片带通滤片 band pass 光源光源(gungyun)通过通过(tnggu)的光谱的光谱630/30 nm BP615-645 nm light 第28页/共54页第二十九页，共54页。SourcelightPassedlightCertain colorsabsorbedAbsorbancefilter第29页/共54页第三十页，共54页。第30页/共54页第三十一页，共54页。488 DL488 BK550 DL525 BP600 DL575 BP640 DL620 BP675 BP第31页/共54页第三十二页，共54页。Air-cooled Argon Ion

8、LaserBeam Shaping LensesHigh SensitivityQuartz Flow CellForward ScatterDetectorSide ScatterDetector525BP FL1 (FITC)575BP FL2 (RD1)620BP FL3 (ECD)675BP FL4 (PC5)488DL488BK550DL600DL645DL第32页/共54页第三十三页，共54页。Air-cooled Argon Ion LaserBeam Shaping LensesHigh SensitivityQuartz Flow CellForward ScatterDet

9、ectorSide ScatterDetector525BP FL1 (FITC)575BP FL2 (RD1) 675BP(PC5)750BP FL4 (PC7)488DL488BK550DL600DL 700DL第33页/共54页第三十四页，共54页。第34页/共54页第三十五页，共54页。With Thanks to Dr. Frank SchniedersGentherapie Gruppe Abteilung Molekulare Zellbiologie Institut fr Medizinische Biochemie und MolekularbiologieUniversi

10、ttsklinikum Hamburg-EppendorfEGFP, EYFP and 7-AADWith EPICS XLTM and EXPO32TM ADC-SoftwareHEK293Human EmbryonalKidney Cells 293Filter SetBP 510LAF21BP 550LAF30Dichroic Mirror 525DRLPCell Viability with 7-AADHEK293-cells with EYFP TransfectionHEK293-cells with EGFP TransfectionMixture of EGFP- and EY

11、FP-transfected HEK293-CellsEGFP . Enhanced Green Fluorescent Protein (Ex 488; Em 507 nm)EYFP . Enhanced Yellow Fluorescent Protein (Ex 513; Em 527 nm)7-AAD .7-Aminoactinomycin (Viability Stain ; Ex 546; Em 647 nm) 第35页/共54页第三十六页，共54页。emission intensitywavelengthFLBFLA第36页/共54页第三十七页，共54页。FITCPEFITCPE

12、FITCPE第37页/共54页第三十八页，共54页。CD45-ECD第38页/共54页第三十九页，共54页。流路流路光路光路电路电路(dinl)/电子电子软件软件(run jin)第39页/共54页第四十页，共54页。第40页/共54页第四十一页，共54页。不同的脉冲信号被转换成数字不同的脉冲信号被转换成数字(shz)通道通道(CHANNEL)的过程的过程 第41页/共54页第四十二页，共54页。第42页/共54页第四十三页，共54页。Log FITC 1000 100 10 1 110.1Count 30 700 150ImmunophenotypingImmunophenotyping单参数单参数(cnsh)直方图直方图第43页/共54页第四十四页，共54页。第44页/共54页第四十五页，共54页。流路流路光路光路电路电路(dinl)/电电子子软件软件(run jin)第45页/共54页第四十六页，共54页。第46页/共54页第四十七页，共54页。第47页/共54页第四十八页，共54页。补偿补偿(bchng)前前补偿补偿(bchng)后后第48页/共54页第四十九页，共54页。颜色点图组合212233234624510256152