第九章革兰阳性需氧和兼性厌氧杆菌鉴定

1、微生物学检验微生物学检验微生物学检验微生物学检验国家卫生和计划生育委员会规划教材国家卫生和计划生育委员会规划教材 第九章 革兰阳性需氧和兼性厌氧杆菌鉴定返回总目录返回总目录本 章 内 容第一节 革兰阳性无芽胞杆菌1第二节 革兰阳性需氧芽胞杆菌属2学习目标及重点学习目标： 1掌握：白喉棒状杆菌、炭疽芽胞杆菌和产单核李斯特菌的生物学特性及临床意义。2熟悉：白喉棒状杆菌异染颗粒的染色方法和鉴定；炭疽芽胞杆菌与蜡样芽胞杆菌的鉴别。3了解：红斑丹毒丝菌的特点，与其他细菌的区别。本章重点： 白喉棒状杆菌鉴定要点。 炭疽芽胞杆菌的致病特点及鉴定要点 产单核李斯特菌的生物学特性第一节 革兰阳性无芽胞杆菌革兰阳

2、性无芽胞杆菌 主要包括棒状杆菌属（Corynebacterium）中的白喉棒状杆菌，李斯特菌属（Listeria）中产单核李斯特菌，丹毒丝菌属（Erysipelothrix）中红斑丹毒丝菌一、白喉棒状杆菌（一）生物学特性1.形态与染色：G+，菌体细长弯曲 ，栅栏状，异染颗粒2.培养特性含 有 凝 固 血 清 的 吕 氏 培 养 基（Loeffler medium）：细小、灰白色湿润、圆形突起的菌落含有亚碲酸钾血琼脂平板：黑色菌落亚碲酸盐血平板上菌落第一节 革兰阳性无芽胞杆菌一、白喉棒状杆菌3.变异： 白喉棒状杆菌形态、菌落和毒性均可发生变异4.生化反应无毒株溶原性细菌棒状噬菌体（产生外毒素）触

3、酶硝酸盐还原氧化酶尿素分解吲哚试验 葡萄糖麦芽糖+5.抵抗力：对干燥、寒冷和日光的抵抗力较其他无芽胞细菌强。在衣物、床单、儿童玩具等各种物品中生存数日至数周。在干燥的假膜中能存在3个月以上。第一节 革兰阳性无芽胞杆菌一、白喉棒状杆菌(二) 微生物学检验1. 检验程序咽拭标本亚碲酸钾 血平板观察菌落特征 直接涂片 革兰染色异染颗粒染色血平板 吕氏血清斜面 直接涂片 革兰染色异染颗粒染色涂片染色镜检生化反应 毒力试验结果报告第一节 革兰阳性无芽胞杆菌一、白喉棒状杆菌2. 标本：咽拭子取分泌物。不能及时检验时，可将标本浸于生理盐水或15甘油盐水中保存3.鉴定（1）标本直接涂片 革兰染色：观察形态、染

4、色性 异染颗粒染色：观察异染颗粒（2）分离培养 吕氏斜面：生长迅速，涂片镜检异染颗粒明显 亚碲酸钾血平板：黑色菌落第一节 革兰阳性无芽胞杆菌一、白喉棒状杆菌（3）毒力测定1）体外法：可用Eleks琼脂扩散法、SPA协同凝集、对流电泳等检测外毒素2）体内法：用实验动物(豚鼠、家兔)体内毒力测定（毒素抗毒素中和试验）Elek平板第一节 革兰阳性无芽胞杆菌一、白喉棒状杆菌(三) 临床意义1. 致病因子：外毒素2. 所致疾病：白喉，急性呼吸道传染病，乙类传染病鼻、咽黏膜繁殖(产毒)假膜假膜脱落堵塞呼吸道 窒息炎性细胞坏死组织白喉杆菌毒素入血:全身中毒、心肌炎等3.治疗：可选用青霉素等白喉病人第一节 革

5、兰阳性无芽胞杆菌二、二、产单核李斯特菌李斯特菌属包括产单核李斯特菌(L.monocytogenes) 此菌对人致病绵羊李斯特菌(L.ivanovii)英诺克李斯特菌(L.innocua)威尔斯李斯特菌(L.welshimeri)西尔李斯特菌(L.seeligeri)格氏李斯特菌(L.grayi)默氏李斯特菌(L.murrayi) 第一节 革兰阳性无芽胞杆菌二、产单核李斯特菌(一) 生物学特性1.形态与染色 G+球杆菌, 2025形成周鞭毛，37时鞭毛很少或无；无芽胞2.培养特性 兼性厌氧菌、345均能生长（4冷增菌），最适3037营养要求不高，在含血液、血清、腹水的培养基生长更好。耐盐（200

6、g/LNaCl）。血琼脂平板：形成较小、圆形、光滑而有狭窄溶血环的菌落产单核李斯特菌血平板上菌落第一节 革兰阳性无芽胞杆菌二、产单核李斯特菌3. 生化反应：触酶试验（+）、氧化酶（-）、CAMP（+）、葡萄糖（+） 、麦芽糖（+） 、果糖（+）；VP （+）、MR （+）、七叶苷（+）4.抵抗力：耐盐、耐碱、耐冷、不耐酸；对氨苄青霉素，青霉素、链霉素、红霉素等敏感，对杆菌肽、多黏菌素耐药第一节 革兰阳性无芽胞杆菌二、产单核李斯特菌(二)微生物学检验1.标本：血液、脑脊液、分泌物及病变组织2.染色：G+球杆菌（细胞内、外）3.分离培养：血液琼脂、5%-10%CO2 、354 .诊断要点：G+球杆

7、菌、（湿片）翻筋斗样运动、触酶阳性、七叶苷阳性、葡萄糖（+）、MR （+）、 VP（+）第一节 革兰阳性无芽胞杆菌二、产单核李斯特菌(三) 临床意义1.传播途径：粪-口传播；垂直感染2.致病物质：溶血素O、磷脂酰肌醇-特异性磷脂酶C（PI-PLC）3.所致疾病：可引起食物中毒，病死率高达30 70 该病的临床表现，健康成人个体出现轻微类似流感症状，新生儿、孕妇、免疫缺陷患者表现为呼吸急促、呕吐、出血性皮疹、化脓性结膜炎、发热、抽搐、昏迷、自然流产、脑膜炎、败血症直至死亡第一节 革兰阳性无芽胞杆菌三、红斑丹毒丝菌丹毒丝菌属代表菌种红斑丹毒丝菌(E. rhusiopathiae产单核丹毒丝菌（E.

8、 monocytogenes）扁桃体丹毒丝菌（E. tonsillarum）1.形态与染色：革兰阳性短小杆菌，无鞭毛，无芽胞，无荚膜2.培养：厌氧或微需氧，血平板上形成两种菌落：S菌落：细小、圆形、凸起有光泽（较小，毒力强）；R菌落：较大，颗粒状、扁平、边缘不齐（较大，毒力弱）红斑丹毒丝菌形态血平板上菌落第一节 革兰阳性无芽胞杆菌三、红斑丹毒丝菌3.生化反应触酶阴性；分解乳糖、葡萄糖、阿拉伯糖三糖铁培养基上产H2S（突出特点）4.鉴定：通过形态染色、生化反应，特别是TSI上产生H2S，可初步鉴定是红斑丹毒丝菌，但要与产单核李斯特菌鉴别5.临床意义：红丹毒丝菌病是一种急性传染病，主要发生在鱼类、

9、家畜、家禽和兔类，人类也因接触引起感染。也可引起败血症和心内膜炎。近年在发达国家因污染奶制品而引起食物中毒。青霉素是治疗该病的首选抗菌药物返回章内容返回章内容第一节 革兰阳性无芽胞杆菌芽胞杆菌属（Bacillus）中5种与医学相关炭疽芽胞杆菌（B. anthracis）蜡样芽胞杆菌(B. cereus)蕈状芽胞杆菌(B. . mycoides)巨大芽胞杆菌(B. megaterium)苏云金芽胞杆菌(B. thuringiensis)第二节 革兰阳性需氧芽胞杆菌属一、炭疽芽胞杆菌(一) 生物学特性1.形态与染色致病菌中最大的G+粗大杆菌，两端平切、排列呈竹节状、有荚膜，无鞭毛芽胞在有氧条件下形

10、成，呈椭圆形，位于菌体中央（抵抗力强）2.培养特性 专性需氧，营养要求不高普通平板：扁平、粗糙、不透明、灰白色、无光泽，边缘不整齐的菌落(卷发状菌落) 血平板：毛玻璃样，无溶血或微溶血 （24h后）。有毒株形成荚膜，为M型菌落（可有拉丝现象）炭疽芽胞杆菌第二节 革兰阳性需氧芽胞杆菌属一、炭疽芽胞杆菌3.生化反应葡萄糖（+）、麦芽糖（+）、海藻糖（+）、硝酸盐还原（+）、H2S （） 、Indol （） 、C （） 、URE（）能液化明胶，沿穿刺线向四周呈放射状生长，如倒松树状4.抵抗力（芽胞）很强5%石炭酸5天; 干燥土壤、皮毛中存活数年至几十年对青霉素、红霉素、庆大霉素、氯霉素、环丙沙星等敏

11、感，头孢菌素耐药第二节 革兰阳性需氧芽胞杆菌属一、炭疽芽胞杆菌(二) 微生物学检验1.标本 血液、呕吐物、痰液、脑脊液、动物尸体、肉类、毛皮 注意生物安全防护！严禁在室外剖检病体!2.鉴定形态和菌落特征：荚膜、竹节状初步报告生化试验串珠试验核酸检测：核酸杂交第二节 革兰阳性需氧芽胞杆菌属炭疽芽胞杆菌检验程序已处理标本直接涂片增菌培养分离培养Ascoli试验革兰染色荚膜染色初步报告血平板戊烷脒琼脂平板可疑菌落菌落涂片染色镜检鉴定试验肉汤培养动物实验动物死亡分离培养噬菌体裂解串珠试验青霉素抑制试验结果报告第二节 革兰阳性需氧芽胞杆菌属一、炭疽芽胞杆菌 (三) 临床意义1.传染源：病畜及其制品或被污

12、染物2.传播途径:接触、消化道、呼吸道3.致病因子（1）荚膜：抗吞噬，利于细菌扩散（2）炭疽毒素：主要致病和死亡原因（3）保护性抗原、致死因子、水肿因子三种蛋白复合物 损伤微血管内皮细胞，增加血管通透性水肿第二节 革兰阳性需氧芽胞杆菌属一、炭疽芽胞杆菌 (三) 临床意义4.所致疾病-炭疽病（Anthrax）皮肤炭疽：接触感染肠炭疽：消化道感染肺炭疽：呼吸道感染5.防治措施病畜处理疫苗抗生素皮肤炭疽第二节 革兰阳性需氧芽胞杆菌属二、蜡样芽胞杆菌(一) 生物学特性1.形态与染革兰阳性大杆菌，两端钝圆，周鞭毛，无荚膜，形成芽胞2.培养特性：需氧或兼性厌氧普通平板：乳白色不透明菌落，形似“白蜡” 血平板：毛玻璃样液体：混浊，有菌膜血平板上菌落第二节 革兰阳性需氧芽胞杆菌属二、蜡样芽胞杆菌(一) 生物学特性3.生化反应 葡萄糖（+）、麦芽糖（+） 、海藻糖（+） 、蔗糖（+） 、水杨素（+） 、VP （+） 、H2S （） 、Indol （） 、C （+） 、URE（）4.抵抗力：芽胞耐受10030min、干热12060min才能杀死对氯霉素、红霉素、庆大霉素敏感对