实验二、静脉注射氨茶碱血药浓度及药动学参数的检测

1、实验二 静脉注射氨茶碱血药浓度测定及药动学参数的计算生物药剂学与药物动力学实验课件一、实验目的:1.掌握紫外双波长法测定氨茶碱血药浓度的方法；2.熟悉家兔耳缘静脉注射给药后药动学处理原理和方法；3.熟悉血清中药物提取方法及双波长测定法在血药浓度测定中的应用。生物药剂学与药物动力学实验课件二、基本原理1.氨茶碱氨茶碱氨茶碱又名茶碱乙烯双胺，由茶碱与乙二胺缩合而成，氨茶碱能抑制氨茶碱又名茶碱乙烯双胺，由茶碱与乙二胺缩合而成，氨茶碱能抑制体内磷酸二酪酶，减慢环磷酸腺苷（体内磷酸二酪酶，减慢环磷酸腺苷（cAMP）的分解速度，从而增加）的分解速度，从而增加其在细胞内的含量，促使支气管平滑肌舒张，有扩张胆

2、管、冠状动脉其在细胞内的含量，促使支气管平滑肌舒张，有扩张胆管、冠状动脉作用；减少肾小管对电解质的再吸收而呈现强心利尿作用，作用；减少肾小管对电解质的再吸收而呈现强心利尿作用，一般应用一般应用于支气管哮喘、胆绞痛、心绞痛等。于支气管哮喘、胆绞痛、心绞痛等。2. 静脉注射药物动力学静脉注射药物动力学氨茶碱经静脉进入血液，随血液循环进行组织分布，达到平衡后转入氨茶碱经静脉进入血液，随血液循环进行组织分布，达到平衡后转入消除相。血药浓度消除相。血药浓度-时间曲线呈时间曲线呈二室药物动力学模型二室药物动力学模型。3. 氨茶碱血药浓度的测定氨茶碱血药浓度的测定双波长法测定原理：双波长法测定原理：在酸性条

3、件下，可用有机溶剂从血清中提取出茶在酸性条件下，可用有机溶剂从血清中提取出茶碱，并同时沉淀血清蛋白，再用碱液将茶碱从有机溶剂中提出，然后碱，并同时沉淀血清蛋白，再用碱液将茶碱从有机溶剂中提出，然后采用双波长法进行紫外测定，即测定采用双波长法进行紫外测定，即测定274和和298处的吸光度（处的吸光度（ 274为茶为茶碱和本底，即溶剂、血清的吸收，碱和本底，即溶剂、血清的吸收， 298为本底的吸收为本底的吸收 ），），A= 274 - 298 ，可根据标准曲线进行浓度换算。，可根据标准曲线进行浓度换算。生物药剂学与药物动力学实验课件生物药剂学与药物动力学实验课件家兔耳缘静脉注射氨茶碱家兔耳缘血管分

4、布生物药剂学与药物动力学实验课件二室药物动力学模型：二室药物动力学模型：XcXpX0K10K12K21X0：静脉注射给药剂量；Xc：中央室的药量；Xp：周边室的药量；K10：药物从中央室消除的一级速率常数；K12：药物从中央室向周边室转运的一级速率常数；K21：药物从周边室向中央室转运的一级速率常数；lgCt分布相消除相药物动力学公式：药物动力学公式：dxc/dt = K21*Xp K12*Xc K10*Xcdxp/dt = K12*Xc K21*Xp利用消除相残数利用消除相残数法求算相关药物法求算相关药物动力学参数。动力学参数。生物药剂学与药物动力学实验课件所用材料所用材料日本大耳白或新西兰

5、兔日本大耳白或新西兰兔兔子固定器兔子固定器婴儿称婴儿称1.5 ml EP管管其它其它:1 ml注射器注射器,1.5 ml EP管离心机管离心机,漩涡振荡器漩涡振荡器,离心机离心机,紫外检测仪紫外检测仪,10 ml离心管离心管,三氯醋酸三氯醋酸,氢氢氧化钠氧化钠,等等.氨茶碱注射液氨茶碱注射液生物药剂学与药物动力学实验课件三、实验操作1.氨茶碱标准曲线的绘制：氨茶碱标准曲线的绘制：取5支0.5 ml空白家兔血清，分别加入氨茶碱注射液（2.5 mg/2 ml）使其浓度分别达到 0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 ml，加0.1mol/L盐酸0.2ml、5%异丙醇氯仿液（抽提液）5ml，蜗旋混合

6、后，3000r/min离心10min。吸取下层氯仿液下层氯仿液4 ml至另一试管中，加入0.1mol/L NaOH溶液4ml，蜗旋混合后、3000r/min，离心10min。吸取上层碱液上层碱液，以0.1mol/NaOH溶液做参比，测定其在274和和298的吸收度（ A274和和A298 ），计算A，以茶碱浓度为横坐标， A为纵坐标描点绘图，用Excel软件求直线回归方程和相关系数。2.静脉注射氨茶碱和血药浓度的测定静脉注射氨茶碱和血药浓度的测定取体重2.53.0kg健康雄性家兔1只，于耳缘静脉（外侧）注射氨茶碱10mg/kg（2min内注完），另一耳用锐利刀片切割耳缘静脉取血。分别在给氨茶碱

7、后5、10、20、30、60、120、180 min取血约1.5ml，室温下静置60 min。分离血清：分离血清：等EP管中血液凝固后，10000 r/min离心15 s分离血清，各管均取血清0.5ml于10ml试管中，加0.1mol/L盐酸0.2ml、5%异丙醇氯仿液（抽提液）5ml，蜗旋混合后，3000r/min离心10min。吸取下层氯仿液下层氯仿液4 ml至另一试管中，加入0.1mol/L NaOH溶液4ml，蜗旋混合后、3000r/min，离心10min。吸取上层碱液上层碱液，以0.1mol/NaOH溶液做参比，测定其在274和和298的吸收度（ A274和和A298 ），计算A。将

8、测得血清样品的A代入标准曲线的方程，求得相应的C，C10即为茶碱的血药浓度。以时间（T）为横坐标，浓度对数（logC）为纵坐标，进行相应的药动学数据处理。生物药剂学与药物动力学实验课件3.药动学参数的计算药动学参数的计算 作时间t-浓度C-lgC表，画lgC t图，求算Vc、K21、K10、K12（按课本P229例1处理）。4. 本实验本实验3人一组人一组 每组进行家兔耳缘静脉给药及家兔氨茶碱血药浓度药物动力学数据的计算。四、实验结果：生物药剂学与药物动力学实验课件T(min)510203060120180AC(g/ml)二、氨茶碱血药浓度二、氨茶碱血药浓度-时间表时间表一、氨茶碱血药浓度与一

9、、氨茶碱血药浓度与A的标准曲线的标准曲线C = 1.84*A- 0.00002C单位：mg/ml, r = 12三、药物动力学参数的计算结果三、药物动力学参数的计算结果生物药剂学与药物动力学实验课件作时间t-浓度C-lgC表，画lgC t图，求算Vc、K21、K10、K12（按课本P229例1处理）。五、讨论与思考1.氨茶碱家兔体内的药时曲线呈几室模型，如何解氨茶碱家兔体内的药时曲线呈几室模型，如何解释？有几种判断是二室模型的方法，判断的依据是释？有几种判断是二室模型的方法，判断的依据是什么？什么？2.为什么要测定两个波长下氨茶碱的吸光度并取其为什么要测定两个波长下氨茶碱的吸光度并取其差值？差

10、值？生物药剂学与药物动力学实验课件生物药剂学与药物动力学实验课件二、氨茶碱血药浓度二、氨茶碱血药浓度-时间表时间表一、氨茶碱血药浓度与一、氨茶碱血药浓度与A的标准曲线的标准曲线六、参考结果：序号序号时间（时间（min）不同波长下吸光度不同波长下吸光度A浓度浓度（mg/ml）274 nm298 nm150.2740.1740.10.18412100.1680.0980.070.12893200.1390.0750.0640.11784300.1550.0930.0620.11415600.2630.2070.0560.103161200.1480.0920.0560.103171800.2740

11、.1740.10.184182400.1680.0980.070.1289C单位：mg/mlC = 1.84*A- 0.00002生物药剂学与药物动力学实验课件T(min)510203060120180240C(mg/ml)1.841.291.1781.1411.0311.0311.8411.289lgC0.2650.1100.0710.0570.01330.0130.2650.110二、氨茶碱静脉注射后时间二、氨茶碱静脉注射后时间 t C - lgC表表生物药剂学与药物动力学实验课件七、注意事项： 一、一、注射时不宜快速注射，也不宜过多，否则会引起兔子心悸死亡。药液注射入血管时，原来红色的血

12、管充满无色的药液则说明注射成功，若药液未进入血管，表现在推注时阻力较大，且在注射部位药液会流出。二、二、血液最好自然滴入EP管中，一般不宜刮取，否则血细胞将破裂，血清颜色变红，也不要用注射器抽取、用吸管吸取。三、三、计算浓度时，计算出A后，所求得的C需10，才是真正血清中的药物浓度，因为我们在处理样品时稀释10倍。四、四、血清样品要放置1h以上再处理才较好，最好120 min后其充分凝结，少于1h则离心得到的是血浆，其中纤维蛋白较多，对样品的后处理不佳。五、五、用注射器吸取血清0.5ml，最后一个时间点最好超过1h，否则血清中蛋白质会凝固，导致血清移取困难。生物药剂学与药物动力学实验课件七、注意事项：六、六、取血时不要用凉水润湿取血部位。七、七、若离心用10000 r/min离心血清，当转速显示到达10000r/min后，15s即可。八、八、若血清与氯仿乳化，可用超声仪超声破乳。九、九、血清样品测定时，可用空白对紫外仪调零，波长分别用274nm、298nm调零，