农产品分析3-2ppt课件

1、 氨基酸是组成蛋白质的根本单位，也是蛋白质氨基酸是组成蛋白质的根本单位，也是蛋白质的分解产物。全氨基酸和个别氨基酸的分析测定是的分解产物。全氨基酸和个别氨基酸的分析测定是研讨蛋白质、酶的化学组成及性质的重要手段。研讨蛋白质、酶的化学组成及性质的重要手段。 生物学及农业科学的许多领域都需求分析氨基酸，生物学及农业科学的许多领域都需求分析氨基酸，在评价谷物的蛋白质营养价值时需求测定游离氨基在评价谷物的蛋白质营养价值时需求测定游离氨基酸及蛋白质中氨基酸的组成。酸及蛋白质中氨基酸的组成。 动植物产品中的氨基酸以多种方式存在，大致可分动植物产品中的氨基酸以多种方式存在，大致可分为构成蛋白质的氨基酸和游离

2、氨基酸两种。另外，还有为构成蛋白质的氨基酸和游离氨基酸两种。另外，还有微量的由肽键衔接的几个氨基酸，以及与糖或脂结合在微量的由肽键衔接的几个氨基酸，以及与糖或脂结合在一同的。在人类和动物营养学上，各种氨基酸含量的高一同的。在人类和动物营养学上，各种氨基酸含量的高低是很重要的，特别是几个限制性氨基酸。假设缺乏这低是很重要的，特别是几个限制性氨基酸。假设缺乏这些氨基酸，人与动物不仅不能发育，还会引起某些疾病，些氨基酸，人与动物不仅不能发育，还会引起某些疾病，而这些氨基酸在储存和加工过程中极易损失破坏。而这些氨基酸在储存和加工过程中极易损失破坏。 测定它们的含量已成为衡量谷物、饲料蛋白质测定它们的含

3、量已成为衡量谷物、饲料蛋白质的重要规范之一。的重要规范之一。l 氨基酸的测定氨基酸的测定l 氨基酸分析方法包括测定氨基酸总含量及测定全氨基氨基酸分析方法包括测定氨基酸总含量及测定全氨基酸中每种氨基酸含量两个方面。酸中每种氨基酸含量两个方面。l 测定氨基酸总量的方法与蛋白质分析有亲密关系，许多测定氨基酸总量的方法与蛋白质分析有亲密关系，许多测定蛋白质全氮含量的方法如凯氏定氮法及各种比色法均可测定蛋白质全氮含量的方法如凯氏定氮法及各种比色法均可用于测定氨基酸的总含量。用于测定氨基酸的总含量。l 此外，测定氨基酸总含量的方法还有氨基酸的甲醛滴定此外，测定氨基酸总含量的方法还有氨基酸的甲醛滴定法及茚三

4、酮比色法。法及茚三酮比色法。 有关氨基酸的测定方法很多，近些年来氨基酸分有关氨基酸的测定方法很多，近些年来氨基酸分析采用了一系列微量分析及高效率的分别方法。析采用了一系列微量分析及高效率的分别方法。 例如，薄层层析、气相色谱、液相色谱、氨基酸例如，薄层层析、气相色谱、液相色谱、氨基酸自动分析仪等方法。自动分析仪等方法。 氨基酸自动分析仪是测定氨基酸的专门仪器氨基酸自动分析仪是测定氨基酸的专门仪器, ,氨基氨基酸自动分析仪的最大优点是氨基酸不用衍生酸自动分析仪的最大优点是氨基酸不用衍生, ,可直接可直接对其分别对其分别, ,从而防止了由于衍生所呵斥的测定误差，从而防止了由于衍生所呵斥的测定误差，

5、因其方便、快捷、准确因其方便、快捷、准确, ,实现多种氨基酸的同时测定，实现多种氨基酸的同时测定，已广泛运用于各个行业测定氨基酸。已广泛运用于各个行业测定氨基酸。 非极性氨基酸非极性氨基酸 甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸丙氨酸、脯氨酸 极性氨基酸极性氨基酸 极性中性氨基酸：色氨酸、酪氨酸、丝氨酸、半胱极性中性氨基酸：色氨酸、酪氨酸、丝氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、苏氨酸氨酸、蛋氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、苏氨酸 酸性氨基酸：天冬氨酸、谷氨酸酸性氨基酸：天冬氨酸、谷氨酸 碱性氨基酸：赖氨酸、精氨酸、组氨酸碱性氨基

6、酸：赖氨酸、精氨酸、组氨酸 其中：属于芳香族氨基酸的是：色氨酸、酪氨酸、其中：属于芳香族氨基酸的是：色氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸苯丙氨酸 属于亚氨基酸：脯氨酸属于亚氨基酸：脯氨酸 含硫氨基酸：半胱氨酸、蛋氨酸含硫氨基酸：半胱氨酸、蛋氨酸W W内标物内标物 mSmS生物、蛋白质污染游离氨基酸样品、金属离子生物、蛋白质污染游离氨基酸样品、金属离子污染、油腻污染等。污染、油腻污染等。，* * *为必需氨基酸为必需氨基酸定法较为准确。定法较为准确。20ml，摇匀，以，摇匀，以0.100NNaOH准溶液准溶液滴定至淡蓝色。按下述公式计算。滴定至淡蓝色。按下述公式计算。DBCDBC的差值的差值, ,即可算出该

7、样品中蛋白质的即可算出该样品中蛋白质的赖氨酸。赖氨酸。OO赖氨酸的eNH2+CH3CH2COCCH2CH3O丙酸酐eHNCCH2CH3+CH3CH2COOH丙酰丙酸由测得的透光率由测得的透光率T T或吸收值或吸收值A A，在规范曲线上查得或由回归线计，在规范曲线上查得或由回归线计算得到剩余染料溶液的浓度算得到剩余染料溶液的浓度mmol/L),mmol/L),样品中的赖氨酸的浓度样品中的赖氨酸的浓度按下式计算：按下式计算：mol/L)赖氨酸的摩尔质量(g浓度(mmol/L)酸性橙红染料溶液初始比0.2）与20之体积2为（20为加入染料溶液量L）溶液浓度（mmol/的剩余染料各为酰化与不酰化样品式

8、中赖氨酸；）（、：）（146.23.891.111002 .14610/)11. 1 (89. 3/)11. 1 (89. 3%3mlVccVmcmcDCBABABADCDC本实验采用的稀释倍数为本实验采用的稀释倍数为5050倍，吸光度测倍，吸光度测定值在定值在0.2-0.30.2-0.3之间。之间。种资料而又简单易行的测定定方法。其红紫色强度与色氨酸的含量在一定范围内成正比，其最大其红紫色强度与色氨酸的含量在一定范围内成正比，其最大的吸收峰在的吸收峰在545nm545nm，可进展比色测定。，可进展比色测定。 主要仪器：培育箱、分光光度计主要仪器：培育箱、分光光度计 试剂：试剂：1 1、混合显

9、色剂：称取、混合显色剂：称取FeCl36H2O 270mgFeCl36H2O 270mg，用水，用水0.5ml0.5ml溶溶解后，再用冰醋酸溶解稀释至解后，再用冰醋酸溶解稀释至1L1L。15mol/LH2SO415mol/LH2SO4 运用前运用前1-2h1-2h将试剂和等体积混合，混合时防止发热将试剂和等体积混合，混合时防止发热，可在冰水中进展。，可在冰水中进展。2 2、0.1mol/L0.1mol/L醋酸钠缓冲溶液：称取醋酸钠醋酸钠缓冲溶液：称取醋酸钠16.406g16.406g于于2L2L的容的容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，并用醋调理量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，并用醋调理pHpH至至

10、7.07.0。3 3、木瓜蛋白酶溶液：称取木瓜蛋白酶、木瓜蛋白酶溶液：称取木瓜蛋白酶400mg400mg溶于溶于100ml0.1mol/L100ml0.1mol/L醋酸钠缓冲溶液中。醋酸钠缓冲溶液中。4 4、色氨酸规范溶液：、色氨酸规范溶液：贮备液：准确称取经贮备液：准确称取经105105枯燥枯燥2h2h的的L-L-色氨酸色氨酸20mg20mg加少量温水溶解后，洗入加少量温水溶解后，洗入200ml200ml棕色容量瓶中，用醋棕色容量瓶中，用醋酸钠缓冲溶液稀释至刻度，浓度为酸钠缓冲溶液稀释至刻度，浓度为100g/ml100g/ml。任务液：分别汲取任务液：分别汲取0 0、5 5、7.57.5、1

11、010、1515、20ml20ml贮备贮备液于液于50ml50ml容量瓶中，用醋酸钠缓冲溶液稀释至刻度，容量瓶中，用醋酸钠缓冲溶液稀释至刻度，此浓度为此浓度为0 0、1010、1515、2020、3030、40g/ml40g/ml系列色氨酸系列色氨酸规范溶液。规范溶液。l 操作步骤：操作步骤： l 称取风干磨碎过称取风干磨碎过6060目筛的脱脂谷物样品目筛的脱脂谷物样品100mg100mg于具塞试管中，加木瓜酶液于具塞试管中，加木瓜酶液5ml5ml，混匀后放入，混匀后放入6565培培育箱中育箱中16h16h，另用木瓜酶液，另用木瓜酶液5ml5ml作空白，在培育的第作空白，在培育的第一个小时内，

12、每隔一个小时内，每隔30min30min摇一次，摇一次，16h16h后取出水解液后取出水解液，摇匀，冷却至室温，在，摇匀，冷却至室温，在3000r/min3000r/min离心离心10min10min。吸。吸上清液上清液1ml1ml于试管中，加混合显色剂于试管中，加混合显色剂4ml4ml，摇匀，置，摇匀，置6565培育箱中显色培育箱中显色15min15min，取出冷却至室温，在最大，取出冷却至室温，在最大吸收峰吸收峰545nm545nm波长比色得吸收值波长比色得吸收值A A。l 规范曲线绘制：分别汲取浓度为规范曲线绘制：分别汲取浓度为0 0、1010、1515、2020、3030、40 40 g/mlg/ml系列色氨酸溶液各系列色氨酸溶液各1ml1ml，于具塞试管中各参与混合显色剂，于具塞试管中各参与混合显色剂4ml4ml，同样品一样条件下显色后比色并绘制色氨酸质量浓度，同样品一样条件下显色后比色并绘制色氨酸质量浓度g/mlg/m