实验诊断学_病原微生物检查

1、 明确明确感染感染是否发生以及是否发生以及病原体的类型病原体的类型。 提供体外微生物提供体外微生物药物敏感实验药物敏感实验的结果。的结果。 密切监视烈性传染病与新的传染病的发生，密切监视烈性传染病与新的传染病的发生，及时向行政主管部门报告。及时向行政主管部门报告。 配合相关机构进行流行病学调查。配合相关机构进行流行病学调查。 本章主要内容本章主要内容一、标本采集、运送和检测方法一、标本采集、运送和检测方法二、细菌耐药性检查二、细菌耐药性检查三、临床感染常见病原体检查三、临床感染常见病原体检查四、病毒性肝炎检测四、病毒性肝炎检测五、院内感染五、院内感染一、一、细菌细菌检验标本采集与送检的基本原则

2、1.1.注明被检人姓名、性别、年龄、临床诊断、标本来注明被检人姓名、性别、年龄、临床诊断、标本来源及检验目的、抗生素使用情况。源及检验目的、抗生素使用情况。2.2.尽量在抗生素尽量在抗生素使用前使用前采集标本。采集标本。3.3.在采集血液、脑脊液、穿刺液等标本时，应严格执在采集血液、脑脊液、穿刺液等标本时，应严格执行行无菌无菌操作，避免杂菌污染。操作，避免杂菌污染。4.4.立即送到实验室，某些细菌还应注意立即送到实验室，某些细菌还应注意保温、保湿保温、保湿。5.5.盛标本容器须经盛标本容器须经灭菌灭菌处理，勿用处理，勿用消毒剂。消毒剂。 参考P463二、常见标本的采集：血液与骨髓二、常见标本的

3、采集：血液与骨髓1 1. .采血部位多为采血部位多为肘静脉肘静脉，切忌在静滴抗菌药物的静，切忌在静滴抗菌药物的静脉处采集血标本，脉处采集血标本，无菌操作无菌操作。 2 2. .每瓶采血量为每瓶采血量为5 510ml10ml左右，左右，培养基与血液之比以培养基与血液之比以10:110:1为宜，为宜，以稀释血液中的抗生素、抗体等杀菌物质。以稀释血液中的抗生素、抗体等杀菌物质。3 3. .选择寒战发热之初采血。对已用抗菌药物而又不选择寒战发热之初采血。对已用抗菌药物而又不能停药者，应在下次用药前采血。能停药者，应在下次用药前采血。4.4.每例建议不同时间不同部位采血每例建议不同时间不同部位采血3 3

4、次，注意区别次，注意区别 感染菌和感染菌和皮肤污染菌皮肤污染菌。尿液标本的采集尿液标本的采集1 1. .中段尿采集：中段尿采集：最常用的方法。采样前须消毒尿道最常用的方法。采样前须消毒尿道口将中段或近后段的尿液留于无菌容器中。口将中段或近后段的尿液留于无菌容器中。2.2.导尿管采集尿液：可减少污染，但易引起导尿管采集尿液：可减少污染，但易引起逆行感逆行感染染。不可从集尿袋下端管口留取标本。不可从集尿袋下端管口留取标本。3 3. .膀胱穿刺采集尿液：病人耻骨上皮肤消毒后，以膀胱穿刺采集尿液：病人耻骨上皮肤消毒后，以无菌针筒作膀胱穿刺。此法主要用于尿液无菌针筒作膀胱穿刺。此法主要用于尿液厌氧菌厌氧

5、菌培养或婴幼儿。培养或婴幼儿。粪便标本的采集粪便标本的采集1.挑取有挑取有脓血粘液脓血粘液部分的新鲜粪便约部分的新鲜粪便约2 23 3克盛克盛于灭菌容器中送检，也可用拭子挑取粪便插于灭菌容器中送检，也可用拭子挑取粪便插入入Cary-BlairCary-Blair运送培养基中送检。运送培养基中送检。2 2. .对不易获取粪便者，如婴幼儿可用对不易获取粪便者，如婴幼儿可用直肠拭子直肠拭子采集送检。采集送检。 呼吸道标本的采集呼吸道标本的采集1 1. .自然咳痰：自然咳痰：清水反复漱口后用力咳嗽，从呼吸道清水反复漱口后用力咳嗽，从呼吸道深深部部咳出咳出, ,以清晨以清晨第一口痰第一口痰为好。为好。2

6、 2. .气管镜下采集法、气管穿刺法：下呼吸道病原学的气管镜下采集法、气管穿刺法：下呼吸道病原学的理想标本，可减少污染，但病人有一定的痛苦，不理想标本，可减少污染，但病人有一定的痛苦，不易接受和推广。易接受和推广。3 3. .应应及时及时送检和处理送检和处理( (11小时小时) )，放置时间长可导致肺，放置时间长可导致肺炎链球菌，流感嗜血杆菌等的检出率明显下降。炎链球菌，流感嗜血杆菌等的检出率明显下降。 脑脊液等无菌体液标本的采集脑脊液等无菌体液标本的采集1.1.严格严格无菌无菌条件下采集标本。条件下采集标本。2.2.尽量采集多的标本送检。尽量采集多的标本送检。3.3.尽快送检或床旁接种可尽快

7、送检或床旁接种可提高阳性率，特殊标本提高阳性率，特殊标本需需保温保温送检。如脑膜炎奈瑟菌、送检。如脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌、流感嗜血杆菌等。肺炎链球菌、流感嗜血杆菌等。其它标本的采集其它标本的采集( (伤口、烧伤创面、脓肿等伤口、烧伤创面、脓肿等) )1 1. .无菌生理盐水清洗病灶表面后，用无菌生理盐水清洗病灶表面后，用无菌拭子无菌拭子取病灶取病灶深部的脓液和分泌物，立即送检。深部的脓液和分泌物，立即送检。2 2. .对未溃破的脓肿直接用碘酒、酒精消毒皮肤后，以对未溃破的脓肿直接用碘酒、酒精消毒皮肤后，以无菌注射器抽取脓液无菌注射器抽取脓液送检，也可以切开排脓时用无送检，也可以切开排脓时用无

8、菌拭子采样。菌拭子采样。3.3.生殖道标本包括尿道口分泌物、外阴糜烂物、宫颈生殖道标本包括尿道口分泌物、外阴糜烂物、宫颈口分泌物、前列腺液等，应注意保温。口分泌物、前列腺液等，应注意保温。三、检查方法三、检查方法1 1. .直接涂片、镜检：直接涂片、镜检：初步诊初步诊断但阳性率低。如抗酸染断但阳性率低。如抗酸染色找结核杆菌色找结核杆菌。阴道毛滴虫革兰氏染色2.2.分离、培养、鉴定：分离、培养、鉴定：金标准较费时（金标准较费时（3 3天）天）, ,同时同时可进行药物敏感试验。可进行药物敏感试验。3.3.血清学检查：血清学检查：如肥达氏试验、军团菌抗体检查等。如肥达氏试验、军团菌抗体检查等。抗体检

9、测应进行双份血清检测，两次抗体效价相抗体检测应进行双份血清检测，两次抗体效价相差差4 4倍以上有现症诊断价值，但无早期诊断意义。倍以上有现症诊断价值，但无早期诊断意义。 （但（但IgMIgM有早期诊断意义）有早期诊断意义） 主要内容主要内容一、标本采集、运送和检测方法一、标本采集、运送和检测方法二、细菌耐药性检查二、细菌耐药性检查三、临床感染常见病原体检查三、临床感染常见病原体检查四、病毒性肝炎检测四、病毒性肝炎检测五、院内感染五、院内感染耐药性及发生机制耐药性及发生机制 1.1.当前临床分离的常见细菌当前临床分离的常见细菌 (1)(1)革兰阴性菌革兰阴性菌 大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿大肠

10、埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、阴沟肠杆菌、不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞假单胞菌、阴沟肠杆菌、不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌等，占菌等，占70%70%。 (2)(2)革兰阳性菌革兰阳性菌 葡萄球菌、肠球菌、肺炎链球菌、葡萄球菌、肠球菌、肺炎链球菌、卡他布兰汉菌等，占卡他布兰汉菌等，占30%30%。滥用抗生素的后果耐药2.2.耐药机制耐药机制(1)(1)耐药基因的整合子系统耐药基因的整合子系统(2)(2)产生灭活抗生素的水解酶或钝化酶产生灭活抗生素的水解酶或钝化酶(3)(3)改变抗生素作用的靶位改变抗生素作用的靶位(4)(4)细菌膜的外排泵出系统细菌膜的外排泵出系统(5)(5)生物膜的形成，提高耐药

11、性生物膜的形成，提高耐药性3 3、药物敏感试验、药物敏感试验(1)(1)K-BK-B纸片琼脂扩散法纸片琼脂扩散法：最常用，操作相对方便：最常用，操作相对方便(2)(2)稀释法稀释法 包括琼脂稀释法和肉汤稀释法包括琼脂稀释法和肉汤稀释法 可获得最小抑菌浓度（可获得最小抑菌浓度（MICMIC），但较麻烦），但较麻烦(3)(3)E E试验试验 ：结合稀释法和扩散法，价格昂贵：结合稀释法和扩散法，价格昂贵4.4.重点耐药菌株监测试验重点耐药菌株监测试验 (1)(1)耐甲氧西林葡萄球菌耐甲氧西林葡萄球菌( (MRSMRS) )的筛选的筛选 (2) (2)氨基糖苷类抗生素高耐药肠球菌氨基糖苷类抗生素高耐药

12、肠球菌 ( (HLARHLAR) )筛选筛选 (3) (3)耐青霉素肺炎链球菌耐青霉素肺炎链球菌(PRSP)(PRSP)筛选筛选 (4) (4)染色体染色体型型-内酰胺酶内酰胺酶AmpCAmpC酶的检测酶的检测(5)(5)超广谱超广谱内酰胺酶内酰胺酶( (ESBL)ESBL)检测检测5.5.病原菌耐药基因的检测病原菌耐药基因的检测(1)(1)适全生长缓慢的细菌如结核分枝杆菌适全生长缓慢的细菌如结核分枝杆菌(2)(2)对病原菌的耐药具有确证意义对病原菌的耐药具有确证意义(3)(3)考核其它耐药性检查方法的考核其它耐药性检查方法的金标准金标准, ,可能成为可能成为未来耐药性检查的未来耐药性检查的主

13、导主导方法。方法。 本章主要内容本章主要内容一、标本采集、运送和检测方法一、标本采集、运送和检测方法二、细菌耐药性检查二、细菌耐药性检查三、临床感染常见病原体检查三、临床感染常见病原体检查四、病毒性肝炎检测四、病毒性肝炎检测五、院内感染五、院内感染一、流行病学和临床类型一、流行病学和临床类型流行病学特征流行病学特征q新的病原体不断被发现，如新的病原体不断被发现，如SARSSARS病毒、禽流感染病毒、禽流感染病毒等。病毒等。q老传染病死灰复燃老传染病死灰复燃 如如结核结核、梅毒、霍乱等、梅毒、霍乱等 q多重耐药菌株不断出现多重耐药菌株不断出现 q器官移植、放器官移植、放/ /化疗、侵入性医疗检查

14、或治疗导致化疗、侵入性医疗检查或治疗导致医院感染医院感染发生率不断增加发生率不断增加二、检查项目和临床应用二、检查项目和临床应用1.细菌感染：细菌感染：细菌培养细菌培养是最重要的确诊方法是最重要的确诊方法2.病毒感染：常用病毒感染：常用血清学检查血清学检查，如，如HIV3.真菌和寄生虫感染：形态学检查真菌和寄生虫感染：形态学检查 本章主要内容本章主要内容一、标本采集、运送和检测方法一、标本采集、运送和检测方法二、细菌耐药性检查二、细菌耐药性检查三、临床感染常见病原体检查三、临床感染常见病原体检查四、病毒性肝炎检测四、病毒性肝炎检测五、院内感染五、院内感染病毒性肝炎检测病毒性肝炎检测 P452

15、甲型肝炎甲型肝炎( (粪口途径粪口途径) )： IgMIgM抗体：抗体：特异性早期诊断指标特异性早期诊断指标, ,提示提示HAVHAV现症感染现症感染 IgGIgG抗体：抗体：出现于恢复期且长期存在出现于恢复期且长期存在, ,提示既往感染提示既往感染甲、乙、丙、丁、戊、庚、输血传播病毒肝炎乙型肝炎乙型肝炎 1.1.最常用的定性检测最常用的定性检测 乙肝两对半乙肝两对半 常用测定方法：常用测定方法：ELISAELISA法法 2.2.乙肝乙肝DNADNA定量定量PCRPCR检测：病毒复制的指标检测：病毒复制的指标 正常正常:HBV DNA10:HBV DNA5mm即为即为阳性阳性2.若若ESBLs

16、阳性阳性,对对青霉素青霉素类、所有头孢菌素类及类、所有头孢菌素类及单环类单环类抗菌素耐药抗菌素耐药 CTXCTX/CACAZCAZ/CA注注:CTX为头孢噻肟为头孢噻肟;CTX/CA为头孢噻肟为头孢噻肟/棒酸棒酸 CAZ为头孢他啶为头孢他啶;CAZ/CA为头孢他啶为头孢他啶/棒酸棒酸AmpC酶检测酶检测FOXFOX：头孢西丁：头孢西丁2. 若若AmpC酶阳性，对青霉酶阳性，对青霉素类、第一、二、三代头素类、第一、二、三代头孢菌素、单环类及头霉类孢菌素、单环类及头霉类抗菌素耐药抗菌素耐药乙肝的传播途径乙肝的传播途径我国我国HBSAg阳性率约为阳性率约为8。经血传播经血传播胎源性传播胎源性传播医源

17、性传播医源性传播性接触传播性接触传播生活密切接触传播生活密切接触传播(共用剃须刀、牙刷等共用剃须刀、牙刷等) 乙肝两对半 HBsAgHBsAg：感染感染HBVHBV后后1 12 2月出现，月出现，若急性发病后若急性发病后3 3个月个月 不转阴，易转为慢性。是乙肝病毒感染的标志。不转阴，易转为慢性。是乙肝病毒感染的标志。 HBsAbHBsAb：为为保护性抗体保护性抗体，表明患者已产生了一定的免，表明患者已产生了一定的免 疫力。疫力。 HBeAgHBeAg：表明乙肝处于活动期，肝细胞受损状态，有表明乙肝处于活动期，肝细胞受损状态，有 较强传染性。较强传染性。HBeAbHBeAb：抗抗-HBe-HBe的出现意味着大部分乙肝病毒被消的出现意味着大部分乙肝病毒被消 除，传染性显著降低，病情出现好转。除，传染性显著降低，病情出现好转。 HBcAbHBcAb：阳性者代表正在感染或以往感染过乙肝病毒。阳性者代表正在感染或以往感染过乙肝病毒。 HBcAg(核心抗原)存在于肝细胞内，血中不易检测。当