实验四+高等植物光合色素含量的测定

1、实实验验背背景景K652 = 34.5实验目的实验目的 掌握用分光光度计测定叶绿素含量的方法。掌握用分光光度计测定叶绿素含量的方法。实验原理实验原理 混合液中的两个或多各组分，只要它们的光谱吸收峰不互相重叠，仍混合液中的两个或多各组分，只要它们的光谱吸收峰不互相重叠，仍然可以根据然可以根据Lambert-Beer定律（定律（A = k L C）求出各组分含量。）求出各组分含量。Lambert定律：定律：A = k L；Beer定律定律A = k C。叶绿素。叶绿素a、b在在80%丙酮丙酮溶液中的溶液中的Amax分别为分别为663nm、645nm，由此得出：见推导过程，由此得出：见推导过程 Ca

2、 = 12.7 A663 2.69 A645 ；Cb = 22.9 A645 4.68 A663 Ca+b = 8.02 A663 + 20.20 A645实验仪器及药品实验仪器及药品实验材料：植物叶片实验材料：植物叶片A663 = Ca.ka1 + Cb.kb1 A645 = Cb.kb2 + Ca.ka2 分光光度计测出，故求二元一次方程组可得到此公式。分光光度计测出，故求二元一次方程组可得到此公式。k比吸收系数比吸收系数。即溶剂和波长不变的情况下，当物质。即溶剂和波长不变的情况下，当物质的浓度的浓度(C)为为1g/L(0.1%)，比色皿的直径，比色皿的直径(光径，光径，L)为为1cm时时

3、所测出的吸光度即为比吸收系数。故其单位为：所测出的吸光度即为比吸收系数。故其单位为：摩尔吸收系数摩尔吸收系数。即溶剂和波长不变的情况下，当物即溶剂和波长不变的情况下，当物质的浓度质的浓度(C)为为1mol/L，比色皿的直径，比色皿的直径(光径，光径，L)为为1cm时所时所测出的吸光度即为摩尔吸收系数。故其单位为：测出的吸光度即为摩尔吸收系数。故其单位为：cmgL.由于由于k是一个常数，而是一个常数，而A可以通过可以通过返回cmmolL.方法及步骤方法及步骤方法一：快速测定法方法一：快速测定法 由于叶绿素由于叶绿素a、b在在652nm处有共同吸收，处有共同吸收，k = 34.5 L g-1. c

4、m-1。可直。可直接用便携式叶绿素测定仪测定植物叶片的叶绿素含量，最后浓度单位接用便携式叶绿素测定仪测定植物叶片的叶绿素含量，最后浓度单位为为mg/dm2方法二方法二: 分光光度计法分光光度计法色素提取：将上述植物叶片洗净并用滤纸吸干，准确称取色素提取：将上述植物叶片洗净并用滤纸吸干，准确称取已知已知的叶的叶圆片圆片0.05g左右左右，加入少许，加入少许CaCO3和石英砂及和石英砂及80%丙酮丙酮2ml，充分研磨，充分研磨，转入离心管中转入离心管中（离心机使用），（离心机使用），再用再用5ml 80%丙酮洗研钵，转入离心丙酮洗研钵，转入离心管中，平衡，管中，平衡，5000rpm离心离心10mi

5、n，上清液定容至，上清液定容至10ml备用。备用。测定测定：以以1cm比色皿分别测定比色皿分别测定A663、A645。使。使A控制在控制在0.1 0.8之间。之间。结果与讨论结果与讨论 1、根据原理中计算出三类色素的浓度（、根据原理中计算出三类色素的浓度（mg / L）。）。2、根据公式、根据公式 分别分别计算出各种植物叶片色素含量。计算出各种植物叶片色素含量。思考题思考题 1、一般正常的植物叶片，、一般正常的植物叶片，Chla / Chlb = 3 / 1，你所测，你所测定的结果符合此比例吗？为什么？定的结果符合此比例吗？为什么？ 2、两种测定方法含量有何不同？为什么？、两种测定方法含量有何

6、不同？为什么？ 3、怎样把方法一中的叶绿素含量、怎样把方法一中的叶绿素含量mg/dm2转换为方法二中转换为方法二中的的mg / g FW ？怎样测定不同形态的植物叶片的叶面积？怎样测定不同形态的植物叶片的叶面积？WVC Chl content = (mg.g-1FW)附附1.叶面积的计算叶面积的计算选取单位面积重量是一个常数的打印纸如选取单位面积重量是一个常数的打印纸如A4或或16K。一。一般般A4打印纸为打印纸为70105GSM（g/m2）。用铅笔轻轻地沿着叶缘在用铅笔轻轻地沿着叶缘在A4纸上纸上划线划线。用剪刀沿着叶缘用剪刀沿着叶缘剪下剪下A4纸纸。称称所剪下的所剪下的A4纸的纸的重重量量W (g)。计算计算：附附2.高速冷冻离心机的使用方法高速冷冻离心机的使用方法)2/()(mgGSMgW 叶叶面面积积温度调节1、插上电源插座2、按T接通电源3、按功能键调节温度