血培养实验室操作(顾敏红)演示文稿

1、锡山人民医院 顾敏红血培养实验室操作一、血培养的临床意义（一）血流感染定义 是指各种病原微生物侵入血循环，在血液中繁殖，释放毒素和代谢产物，并诱导细胞因子释放，引起全身感染、中毒和全身炎症反应( SIRS)，进一步导致血压下降、凝血和纤溶系统的改变，引起全身多器官功能障碍综合征(MODS)，是一种严重的全身感染性疾病。 （二）血培养的临床重要性 病人血流中存在活的微生物对诊断和预后都有重要的作用，血培养阳性是评估或确认患者患有感染的重要依据，也为抗生素敏感性试验提供了病原学依据。从预后的角度看，分离到具有临床意义病原菌的血培养意味着宿主的防御机制和（或）过往的临床治疗手段不能将原发部位感染的病

2、原菌（或感染灶）清除，同时从血中分离的病原菌类型对预后也有重要的提示信息。 二、 样本采集和运送 （一）血培养送检指征 当病人出现下列系统炎症反应的临床或实验室特征时应当采血送血培养：体温38或90次分钟；呼吸频率20次分钟或PaC0212*109/L或4*l09/L。（二）采血时机 只要怀疑患者有菌血症、真菌血症的可能，在考虑使用抗菌药物之前，应立即采集血培养标本；若患者已行抗菌药物治疗，则应在下一次抗菌药物应用前采血培养。 说明：研究表明细菌通常在寒战和发烧前1小时入血，此时为采集血培养标本进行病原菌培养的最佳时机。考虑到操作的可行性和及早使用抗菌药物对患者有利，故做出以上建议。 （三）血

3、培养的次数 对怀疑菌血症的成人患者应当同时或短时间内从身体不同部位（如左右臂）同时采集2-3套血培养，至少做到“双瓶双侧”。 婴幼儿患者，推荐同时采集2次（不同部位）血培养标本。说明：一个需氧瓶和一个厌氧瓶为1套血培养。“双瓶双侧”即在身体两侧各采集一套血培养。一次静脉采血注入到多个培养瓶中应视为单个血培养。 研究证明血培养只做1套的检出率为65%，做2套和3套的检出率分别为80%和90%。单瓶的血培养检出率不高，而且结果很难做出临床解释。在采取血培养后的2至5天内，无需重复采集血培养，因为抗菌治疗的2至5天内，血液中的细菌不会立即消失。 一般来说菌血症（真菌血症）患者可通过临床表现来判断疗效

4、，无需复查血培养或连续监测血培养。但有两个例外：第一是感染性细菌性心内膜炎病人，对于他们的菌血症（或真菌血症）是否被清除可被用于评估和指导治疗；第二是与感染性细菌性心内膜炎无关的金黄色葡萄球菌菌血症，对其阳性血培养的48至96小时的追踪可以很好的预测复杂的金黄色葡萄球菌菌血症。（四） 采血量成年患者推荐的采血量为每套不少于10ml，每瓶不少于5ml，婴幼儿患者推荐的采血量，每瓶不少于2ml（少于病人总血量的1%）。说明：血标本采集的量是影响检出率的最重要的因素，成人血培养采血量在2-30ml之间，检出率与采血量成比例增长，每增加Iml的血液，病原菌的检出率就会相应增加；儿童患者因为血液中病原菌

5、浓度较高，血培养采血量无需等同于成人。实验室必须按照血培养瓶厂家的建议，采集足够的血液标本。 如果实验室收到采血量不足的标本仍需进行培养，则需在报告单上注明：“送检血液标本量未达到要求，会影响结果的灵敏度”。实验室要监控血培养血液量是否符合要求，并及时反馈给临床，这是质量保证的一项重要指标。 （五）血液标本在需氧瓶和厌氧瓶中的分配 推荐以一个需氧瓶和一个厌氧瓶为一套血培养，作为常规血培养的组合。当采血量不能满足推荐的采血量时，应首先满足需氧瓶的需要。说明：采用一对（需氧瓶+厌氧瓶）组合比采用二个需氧瓶的组合可检出更多的葡萄球菌、肠杆菌科细菌和厌氧菌。（六）采血要求 v 皮肤消毒：推荐使用碘酊、

6、次氯酸和洗必泰或碘伏作为皮肤消毒剂v 说明：碘酊、次氯酸和洗必泰的消毒效果要优于碘伏；消毒剂要有足够的作用时间以保证消毒效果（碘酊作用30秒；碘伏作用1. 5-2分钟）；洗必泰的作用时间和碘酊一样，但没有过敏反应，因此在静脉穿刺完成后不必擦去，但不能用于小于2个月的婴儿。v 采集部位：推荐从外周静脉采集血液标本。（说明：不建议采集：动脉血，因其诊断价值不大；静脉留置导管，因其常伴有有高污染率，如果必须从留置导管内采血，也应同时从外周静脉采集另外一个血培养标本，以帮助阳性结果的判读。）v 如何减少污染：1、在采血皮肤消毒前，血培养瓶的橡皮塞需使用70%异丙醇酒精消毒并干燥，然后再进行穿刺部位的皮

7、肤消毒。2、严格按照皮肤消毒步骤操作（酒精、碘酊、酒精），并等待足够的消毒时间。3、严格无菌操作，不允许在消毒后按压静脉，除非带有无菌手套。4、不推荐采血后更换注射器针头接种血培养瓶，采用真空采血装置能降低污染率。（七）标本的运送要求和拒收标准 1、运送要求 v 采集后的血培养瓶应在1小时内送往实验室。 v 接种前或后的血培养瓶均不得冷藏或冷冻。2、拒收标准：如遇以下情况，实验室应拒收并要求重送。 v 标签错误或未贴标签。 v 血培养瓶破损或渗漏。 v 血液凝固。三、血培养标本分离病原菌的关键要素 培养设备：提倡使用全自动血培养仪，可以更早发现病人的菌血症。 采血量：从血标本中分离细菌和真菌依

8、赖于适当的采血量。 血、肉汤比例：正常人血液内包含有抑制微生物生长的物质（例如：补体、溶菌酶、抗体、抗生素（假如病人采血前已接受抗生素治疗）。为了减少这些抑菌因子浓度从而降低其抑菌活性，通常血肉汤比例：为1:5到1:10，一些商品化血培养瓶使用的血。肉汤比例小于1:5是因为在其中增加了与血中抑制因子结合并使其失活的特殊物质；儿科病人的血标本可以被接种入专为儿科设计的血培养瓶，这些瓶子可以接种较少的血容量却保持了合理的血肉汤比例。 培养基的选择：推荐使用商品化的培养基。若患者已行抗菌药物治疗，则应选择含有抗菌药物吸附剂（如树脂或活性碳）的培养瓶，其目的增加细菌的分离率和分离速度。 三、血培养标本

9、分离病原菌的关键要素孵育条件：1、温度：细菌和真菌血培养需要在标本采集和运输至实验室后孵育于35，全自动血培养仪设置的温度一般为35。2、气体：商品化的需氧血培养瓶中加入了不等量的二氧化碳，厌氧瓶中则加入了二氧化碳和氮气以利于不同种类细菌的生长。培养周期 :自动血培养仪的标准血培养周期为5天，传统的手工方法推荐孵育7天。全自动血培养仪5天后阴性标本无需进行常规转种。说明：尽管研究表明95%-97%的有临床价值的细菌会在3-4天内被自动血培养系统检出，目前仍然推荐5天的培养周期。特殊情况可适当延长培养时间（如临床怀疑军团菌感染可延长培养至10天；怀疑布鲁氏菌感染可延长培养至28天）。 培养瓶摇动

10、 :摇动血培养瓶，特别是在孵育的最初24小时内，能增加提高需氧瓶中微生物的检出率和检出速度。目前使用的全自动血培养仪是持续的摇动血培养瓶的。监控频率:以琼脂基质作为血培养的组成部分的双向血培养瓶，需每天进行目测检查来检查细菌生长情况。全自动血培养仪系统要求设定规律的10-24分钟时间间隔来监测需氧血培养瓶和厌氧血培养瓶中细菌生长曲线。当出现提示生长的阳性信号时进行次代培养。 四、结果报告原则及结果分级报告制度 （一）培养结果报告原则 紧急处理和优先原则：血培养的结果，无论阴性和阳性结果，对患者的治疗都很紧急！ 建议在有条件的医院，通过医院信息系统，让临床医生随时掌握血培养检测的进展情况，该系统

11、应包括： v 血培养已开单但未收到 v 血培养已收到，符合采样要求 v 血培养已收到，不符合采样要求 v 检测中，尚无结果 v 24小时无生长 v 48小时无生长 v 阳性报警，分离培养和药敏进行中，v 初步涂片染色结果 阳性培养结果（细菌鉴定和药敏试验的最终结果）（二）血培养结果的分级报告制度 初步报告：紧急口头（电话）报告 血培养出现阳性报警60分钟内，立即进行革兰染色、显微镜镜检，并将结果向临床主管医生进行紧急口头（电话）报告，并在4小时内将数据录入信息系统。口头报告包含以下内容，并记录在案：1、报告的时间（无论成功或不成功）；2、所联系医生的全名（或工号）；3、报告镜检结果弗强调其紧急价值； 4、确认临床医生收到报告并复述结果。（二）血培养结果的分级报告制度最终结果（书面）报告：1