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1、酶促反应动力学_温度和离子对酶活性的影响温度和离子对酶活性的影响实验目的1、了解温度对酶活性及酶促反应速度的影响，加深对酶特性的认识。2、了解离子对酶活性及酶促反应速度的影响，加深对酶特性的认识。实验用品1、仪器和器材： 冰箱、恒温水浴锅、分光光度计、试管、移液枪和枪头、胶头滴管、烧杯等。2、试剂： 1%淀粉液、碘液、1% NaCl溶液、1MHCl 、 1MNaOH、 0.1%CuSO4溶液、PH6.8的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液、0.5%淀粉的0.5%NaCl液、稀释唾液、冰水浴。 实验原理 本实验以唾液淀粉酶为例，它催化淀粉水解生成各种糊精和麦芽糖。不同温度、离子下唾液淀粉酶对淀粉的水解程度

2、是不同的。 淀粉与碘反应呈蓝色。 糊精是淀粉分解的中间产物，其化学分子式与淀粉相同都是(C6H10O5)n，但聚合度介于淀粉与麦芽糖之间，根据分子大小与碘反应呈蓝紫、红等不同颜色.聚合度低的糊精不发生显色反应。麦芽糖与碘不呈色。根据上述性质，可用碘检查淀粉是否水解及其水解程度，间接判断淀粉酶是否存在及其活性大小。淀粉 糊精 麦芽糖深蓝 蓝紫、红 无色 (C6H10O5)n (C6H10O5)n C12H22O11温度对酶活性影响温度对酶活性影响 温度低时，酶促反应减弱。温度逐渐升高时，反应速度也随之逐渐增加。当温度升到某一定值时，酶促反应速度达到最大值，此温度称为酶作用的最适温度。但酶是蛋白质

3、，随温度升高而发生变性，继续升高温度，反而使酶促反应速度降低。一般温度升至70-80以上，酶活性几乎全部丧失。离子对酶活性的影响离子对酶活性的影响酶的活性常常受到某些物质的影响有些物质能使酶的活性增加，称为酶的激活剂酶的激活剂；Cl-是唾液淀粉酶的激活剂，Br-、NO3-和I-对该酶也有激活作用，但较微弱。有些物质能使酶的活性降低，称为酶的抑制剂酶的抑制剂。Cu2+对唾液淀粉酶具有抑制作用。 激活剂和抑制剂影响酶活性的剂量是很少的，并且常具有特异性。实验内容：（一）温度对酶活性的影响1、将1号A管试剂迅速加入温度对应的B管中(为了最大限度保证酶的量)，此时为计时的起点（使用秒表），摇匀后放回对

4、应温度继续水浴。注意：转移A管试剂前需将其摇匀。2、然后每隔1min按上步操作依次把2、3、4、5、6号的A、B管混合 ，严格控制好时间。3、准确反应13min，向1号管加入2滴1M HCl溶液，立即混匀，中止反应，按上一步的顺序和时间间隔依次对各管进行操作，并移至试管架。后再各用2滴1M NaOH溶液中和每管。4、在每管中各加入2ml碘液并混匀，观察现象。5、若不同温度梯度间现象差别不明显，则进行比色，通过光密度值来比较。（二）离子对酶活性的影响取3支洁净的试管，编号后按下表操作：管号1231%NaCl(ml)1000.1%CuSO4(ml)010蒸馏水 (ml)0010.1% 淀粉液(ml)333100倍稀释唾液(ml)11137恒温水浴15min,取出滴加碘液碘液222记录实验现

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