微生物实验室基本能力和要求内容

1、微生物是一个通称：形体微小，结构简单的低等生物。病毒、细菌、放线菌、真菌种类多、分布广繁殖快适应性强易变异 认识微生物认识微生物脑膜炎奈瑟菌脑膜炎奈瑟菌双球菌双球菌(diplococcus)肺炎链球菌肺炎链球菌链球菌链球菌(streptococcus)葡萄球菌葡萄球菌(streptococcus)四联球菌四联球菌(tetrad)八叠球菌八叠球菌(sarcina)不同杆菌的大小、长短、粗细很不一致。不同杆菌的大小、长短、粗细很不一致。炭疽芽胞杆菌 3-10 m大中大肠埃希菌 2-3 m小布鲁菌 0.6-1.5 m两端齐平炭疽芽胞杆菌炭疽芽胞杆菌两端尖细白喉棒状杆菌白喉棒状杆菌杆菌的形态多样杆菌的

2、形态多样分枝杆菌分枝杆菌双歧杆菌双歧杆菌弧菌弧菌螺菌螺菌螺杆菌螺杆菌食品中微生物污染的危害食品中微生物污染的危害美国，每年约有7200万人发生食源性疾病，造成3500亿美元的损失2001年，江苏、安徽等地，肠出血性大肠杆菌O157:H7，造成177人死亡，中毒人数超过2万人1999年，宁夏，沙门氏菌污染肉品，食物中毒暴发，发病人数上千人80年代，上海，毛蚶，甲型肝炎爆发，累及30万人沙门氏菌（禽、畜肉）沙门氏菌（禽、畜肉）副溶血性弧菌（水产品）副溶血性弧菌（水产品）蜡样芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌（剩饭）蜡样芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌（剩饭）肉毒梭菌（发酵制品、肉制品）肉毒梭菌（发酵制品、肉制品）单

3、核细胞增生李斯特菌（乳制品、冷藏食品）单核细胞增生李斯特菌（乳制品、冷藏食品）大肠杆菌大肠杆菌O157:H7（肉制品）等。（肉制品）等。微生物性食物中毒常见的致病菌和食物：微生物性食物中毒常见的致病菌和食物：02468101214162000200120022003沙门氏菌单核细胞增生O157:H7总阳性率菌落菌落(colony)：生长在固体培养基上：生长在固体培养基上，来源于一个细胞，肉眼可见的细胞，来源于一个细胞，肉眼可见的细胞群体。群体。霉菌和酵母霉菌和酵母评价食品卫生质量的指示菌造成腐败变质pH低、湿度低、含盐和含糖高的食品北美国家一般使用“粪大肠菌群”概念，如AOAC、FDA。SN中

4、的“粪大肠菌群”概念为等同采用AOAC方法，故而使用粪大肠菌群概念；而欧洲使用“耐热大肠菌群”概念，较少使用“粪大肠菌群”。项目 依据耐热大肠菌群 NMKL、ISO粪大肠菌群 NMKL AOAC 定义在44.5培养，24h内能产酸产气的细菌在胰蛋白胨肉汤中于44.5，24h内产生吲哚的耐热大肠菌群于LST中36培养48h内产气，并于EC内培养4424h产气的一群细菌 作为一种卫生指标菌，耐热大肠菌群中很可能含有粪源微生物，因此耐热大肠菌群的存在表明可能受到了粪便污染，可能存在大肠杆菌。但是，耐热大肠菌群的存在并不代表对人有什么直接的危害。作为粪便污染指标菌，耐热大肠菌群与大肠菌群、大肠杆菌相似

5、，主要以其检出情况来判断食品是否受到了粪便污染。粪便是肠道排泄物，有健康者，也有肠道病患者或带菌者粪便，所以粪便中既有正常肠道菌，也可能有肠道致病菌（如沙门氏菌、志贺式菌、霍乱弧菌、副溶血弧菌等）和食物中毒者。因此，食品既然受到粪便污染就有可能对食用者造成潜在的危害。通常情况下，耐热大肠菌与大肠菌群相比，在人和动物粪便中所占的比例较大，而且由于在自然界容易死亡等原因，耐热大肠菌群的存在可认为食品直接或间接的受到了比较近期的粪便污染。因而，耐热大肠菌群在食品中的检出，与大肠菌群相比，说明食品受到了更为不清洁的加工，肠道致病菌和食物中毒菌的可能性更大。 肠道杆菌肠道杆菌(enteric bacil

6、li)一大群居住在人和动物肠道中 生物学性状近似的革兰阴性杆菌属于肠杆菌科 多数是肠道的正常菌群，至少有30个菌属，120个以上的菌种少数为致病菌，是胃肠传染病的最重要病原菌在环境和食品卫生学上，常被用作粪便污染的检测指标卫生学意义卫生学意义大肠杆菌大肠杆菌(大肠埃希氏菌属大肠埃希氏菌属 Escherichia coli)是人类和动物肠道中的正常菌群是国际公认的卫生监测指示菌出生后数小时就进入肠道，并终生伴随有些菌型是人或动物的病原菌菌株 作用部位 所致疾病 致病机理 ETEC 小肠 旅行者腹泻 婴幼儿腹泻 ST、LT EPEC 小肠 婴儿腹泻 粘附和破坏上皮细胞 EIEC 大肠 痢疾样腹泻

7、侵袭和破坏 结肠粘膜上皮细胞 EHEC 大肠 出血性结肠炎 Vero 毒素 致病性大肠杆菌引起的腹泻性疾病致病性大肠杆菌引起的腹泻性疾病其中许多为人畜共患病一大群人与动物肠道中的寄生菌菌群菌型甚多，仅少数对人致病沙门氏菌沙门氏菌广泛存在于动物肠道、内脏中引起中毒的主要是动物源性食品金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌急性化脓性感染食物中毒正常人带菌，30-80%通过工人手和呼吸道污染食品 单增李斯特氏菌单增李斯特氏菌人、畜共患，4生长，冷藏食品预防措施：充分烹调产品，对于经过热处理的食品应防止交叉污染。耐盐，在10%的盐中也可生长 革兰氏阳性短小杆菌形态与染色形态与染色涂片中呈穿梭样运动非常活泼液体中

8、排列整齐呈鱼群状革兰染色阴性 弧型或逗点状， 单鞭毛霍乱弧菌（霍乱弧菌（V.cholerae）生物学特性生物学特性 在培养基中以含3.5%NaCl生长最为适宜在“我妻氏琼脂平板”上产生溶血现象副溶血弧菌（副溶血弧菌（V. V. parahaemolyticus parahaemolyticus ）微生物检测的一般流程微生物检测的一般流程致病菌检测：增菌（直接增菌或选择性增菌）-筛选-纯化-生化反应和血清学反应微生物学实验的主要内容：无菌操作技能的培养无菌概念的建立无菌操作：环境：无菌区人员：无菌概念物品：严格灭菌 无菌操作的概念缓冲走廊办 公 室仪 器 室清 洗 消 毒 室培 养 基 室微生物

9、检验室实 验 台缓冲室无菌室缓冲室 空气和表面微生物监测空气和表面微生物监测 表面污染可直接使用含有营养试剂的表面接触平板评估。空气质量表面污染可直接使用含有营养试剂的表面接触平板评估。空气质量可用含非选择性琼脂培养基可用含非选择性琼脂培养基(如平板计数琼脂如平板计数琼脂)的培养皿暴露于空气中的培养皿暴露于空气中15分钟的方法检测。分钟的方法检测。 注意注意别的方法也用于评估表面和空气的污染。别的方法也用于评估表面和空气的污染。空气监测：空气监测：3点点 5点点 室内面积不超过30m2，在对角线上设里、中、外三点，里、外点位置距墙1m；室内面积超过30m2，设东、西、南、北、中5点，周围4点距

10、墙1m。采样时，将含营养琼脂的平皿（直径9cm）置采样点（约桌面高度），打开平皿盖，使平皿在空气中暴露15min。表面：工作台：将经灭菌的内径为5cm5cm的灭菌规格板放在被检物体表面，用一浸有灭菌生理盐水的棉签在其内涂抹10次，然后剪去手接触部分棉棒，将棉签放入含10mL灭菌生理盐水的采样管内送检。灭菌设备灭菌设备 对氧气要求：专性需氧菌 微需氧菌 兼性厌氧菌 专性厌氧菌对CO2要求： 5% CO2水碳源氮源无机盐生长因子 有些细菌需要细菌生长条件细菌生长条件4、对气体要求、对气体要求 3、PH2、温度、温度1、营养物质、营养物质 培养基的定义及其分类 在实验室中配制的适合微生物生长繁殖或累积代谢产物的任何营养基质，都叫做培养基(Media)。 由于各类微生物对营养的要求不同，培养目的和检测需要不同，因而培养基的种类很多。我们可根据某种标准，将种类繁