第03章药物的杂质检查2

1、第三章第三章 药物的杂质检查药物的杂质检查第四节 特殊杂质的检查特殊杂质：指某一个或某一类药物的生产或贮藏过程中引入的杂质，如阿司匹林中的游离水杨酸、异烟肼中的游离肼、甾体激素中的其他甾体。特殊杂质检查方法收载在中国药典正文各药品的质量标准中。一、物理法1、嗅味及挥发性的差异：根据杂质的特殊嗅味来判断该杂质的存在。挥发性药物中检查不挥发性杂质。2、颜色的差异 无色药物中有色杂质的检查，检查供试品的颜色，来控制有色杂质的量。3、溶解行为的差异利用药物溶于某种溶剂而杂质不溶，或者反之。二、化学法1、酸碱性的差异利用药物中杂质的酸性或碱性，来进行检查。2、氧化还原性的差异3、杂质与一定试剂产生沉淀

2、4、杂质与一定试剂产生颜色、杂质与一定试剂产生颜色A、不得产生颜色 B、目视比色 C、 分光光度法5、杂质与一定试剂产生气体、杂质与一定试剂产生气体氰化物杂质的检查（1）改进普鲁士蓝法：5g（2）气体扩散三硝基苯酚锂法:0.5g三、旋光法 检查光学异构体，通过测量旋光度或比旋度来控制杂质的限量。 四、分光光度法（一）紫外分光光度法 控制杂质在一定波长下的吸收度来控制杂质的限量。1、在药物无吸收，而杂质有吸收某一波长处测定吸收度，通过控制吸收度的值来控制杂质的含量。 2、当杂质与药物的紫外吸收光谱在某一波长处重叠时，可以改变药物在某两个波长处的吸收度比值，通过控制药物在某两个波长处的吸收度比值来

3、控制杂质的含量 （二）比色法 药物显色后与限量杂质对照品显色后，采用目视比色法或分光光度法（三）原子吸收分光光度法 待测元素的检查（四）红外分光光度法（四）红外分光光度法检查药物中无效或低效晶型的检查检查药物中无效或低效晶型的检查五、色谱法（一）纸色谱法 用于极性较大药物中杂质的检查方法：展开后，比较杂质斑点的个数 颜色深浅及荧光强度来判断杂质是否超过限量。缺点：展开时间长、斑点扩散、显色剂受限（二）薄层色谱法特殊杂质限量检查中最常用的方法1、在一定供试品及检查条件下，不允许有杂质斑点存在2、选用实际存在的待检杂质作为对照品3、选用可能存在的某种物质作为杂质对照品4、将供试品稀释到适当浓度作为

4、杂质对照液5、选用质量符合规定的与供试品相同的药品作为对照品。（三）高效液相色谱法1、面积归一化法2、主成分自身对照法3、内标法测定供试品中杂质的总量限度4、内标法加校正因子测定供试品中某个杂质或主成分含量5、外标法测定供试品中某个杂质或主成分含量（四）气相色谱法 药物中挥发性杂质及有机溶剂残留量的检查 （1）仪器的配对性 如纳氏比色管应配对，刻度线高低相差不超过2mm，砷盐检查时导气管长度及孔的大小要一致（2）对照品与供试品的同步操作 2. 正确的取样及供试品的称量范围 1g不超过2%，1g不超过1% 3. 正确的比色、比浊方法 4. 检查结果不符合规定或在限度边缘时应对供试管和对照管各复查

5、二份 二、氯化物检查法二、氯化物检查法（一）原理 对照法 白色浑浊药物：AgClAgNOCl3HNO3 白色浑浊）（对照：AgClAgNO,NaCl3HNO3 Vc（二）检查方法（二）检查方法 药典附录药典附录 除另有规定外，取各药品项下除另有规定外，取各药品项下规定量的供试品，加水溶解使成规定量的供试品，加水溶解使成25ml（溶液如显碱性，可滴加硝酸（溶液如显碱性，可滴加硝酸使成中性），再加稀硝酸使成中性），再加稀硝酸10m1；溶液如不澄清，应滤过；置溶液如不澄清，应滤过；置50ml纳氏比色管中，加水使成约纳氏比色管中，加水使成约40m1，摇匀，即得供试溶液。另取各药品项摇匀，即得供试溶液。

6、另取各药品项下规定量的标准氯化钠溶液，置下规定量的标准氯化钠溶液，置50ml纳氏比色管中，加稀硝酸纳氏比色管中，加稀硝酸10m1，加水，加水使成使成40m1，摇匀，摇匀，即得对照浴液。即得对照浴液。于供试溶液与对照溶液中，分别加入于供试溶液与对照溶液中，分别加入硝酸银试液硝酸银试液1.0m1，用水稀释使成，用水稀释使成50m1，摇匀，在暗处放置，摇匀，在暗处放置5分钟，同分钟，同置黑色背景上，从比色管上方向下观置黑色背景上，从比色管上方向下观察，比较，即得察，比较，即得（三）测定条件 1. 标准NaCl溶液 10gCl/ml，50ml溶液中含5080g的Cl所显浑浊梯度明显，相当于标准NaCl

7、溶液58ml。 2. 反应需在硝酸酸性条件下进行，且以50ml供试溶液中含稀硝酸10ml为宜。 （1）加速AgCl浑浊的形成； （2）产生较好的乳浊； （3）避免弱酸银盐如碳酸银、磷酸银以及氧化银沉淀的形成。 3. 试剂：硝酸银 5. 避光、暗处放置5分钟后比浊，因氯化银见光易分解。 4. 供试液和对照液稀释后，再加硝酸银溶液，使生成白色浑浊而不是白色沉淀 6. 比浊方法：同置于黑色背景上，自上向下观察。 7. 平行操作原则 （四）干扰及排除 1. 若供试品有色，需经处理后方可检查。 （1）内消色法：倍量法，如枸橼酸铁铵中氯化物的检查。 （2）外消色法：如高锰酸钾中氯化物的检查，可先加乙醇适量

8、，使其还原褪色后再依法检查。 2. 当有其它干扰物质存在时，必需在检查前除去 （1）碘中氯化物的检查 （2）碘化物中氯化物的检查 （3）溴化物中氯化物的检查 3. 不溶于水的有机药物 （1）加水振摇，过滤，取滤液进行检查。 （2）加热，放冷，过滤，取滤液进行检查。 （3）溶于有机溶剂如稀乙醇、丙酮，可加稀乙醇或丙酮溶解后进行检查。 4. 有机药物中有机氯杂质的检查，具体情况，具体分析。 95：82. 药物中氯化物杂质检查，是使该杂质在酸性溶液中与硝酸银作用生成氯化物浑浊，所用的稀酸是（B）A. 硫酸 B. 硝酸 C. 盐酸 D. 醋酸 E. 磷酸 例1. 中国药典 （2005年版） 规定，检查

9、氯化物杂质时，一般取用标准氯化钠溶液（10gCl/ml）58ml的原因是（D）A. 使检查反应完全B. 药物中含氯化物的量均在此范围C. 加速反应D. 所产生的浊度梯度明显E. 避免干扰 例2. 采用硝酸银试液检查氯化物时，加 入 硝 酸 使 溶 液 酸 化 的 目 的 是（ABCDE）A加速生成氯化银浑浊反应B消除某些弱酸盐的干扰C消除碳酸盐干扰D消除磷酸盐干扰E避免氧化银沉淀生成例5. 下列哪些条件为药物中氯化物检查的必要条件（ABC）A. 所用比色管需配套B. 稀硝酸酸性下(10ml/50ml)C. 避光放置5分钟D. 用硝酸银标准溶液做对照E. 在白色背景下观察 三、硫酸盐检查法三、硫

10、酸盐检查法（一）原理 对照法白色浑浊药物：4HCl224BaSOBaClSO白色浑浊）、（对照：4HCl242BaSOBaClSOKVc（二）测定条件 1. 标准K2SO4溶液0.1mg/ml，50ml溶液中含0.10.5mg的所显浑浊梯度明显，相当于标准K2SO4溶液15ml。 2. 反应需在盐酸酸性条件下进行，且以50ml供试溶液中含稀盐酸2ml为宜。 3. 试剂：氯化钡 5. 比浊方法：同置于黑色背景上，自上向下观察。 4. 供试液和对照液稀释后，再加氯化钡溶液，使生成白色浑浊而不是白色沉淀 若供试品有色，也可用内消色法即倍量法处理。 （三）干扰及排除例：药物中硫酸盐检查时，所用的标准对

11、照液是（D）A. 标准氯化钡B. 标准醋酸铅溶液C. 标准硝酸银溶液D. 标准硫酸钾溶液 E. 以上都不对 四、铁盐检查法四、铁盐检查法1. 原理 对照法 红色药物： 36SCNFeHCl6SCNFeFeFe3o23红色、对照：36HCl3SCNFe6SCNFeVc（一）硫氰酸盐法 ChP（2005）、USP（24） 2. 检查方法检查方法 药典附录药典附录 除另有规定外，取各药品项下规定除另有规定外，取各药品项下规定量的供试品，加水溶解使成量的供试品，加水溶解使成25ml，移，移置置50ml纳氏比色管中，加稀盐酸纳氏比色管中，加稀盐酸4ml与过硫酸铵与过硫酸铵50mg，用水稀释使成，用水稀释

12、使成 35m1后，加后，加30%硫氰酸铵溶液硫氰酸铵溶液3ml，再加水适量稀释成再加水适量稀释成50ml，摇匀；如显，摇匀；如显色，立即与标准铁溶液一定量制成的色，立即与标准铁溶液一定量制成的对照溶液（取各药品项下规定量的标对照溶液（取各药品项下规定量的标准铁溶液，置准铁溶液，置50ml纳氏比色管中，纳氏比色管中， 加水使成加水使成25ml，加稀盐酸，加稀盐酸4ml与过硫与过硫酸铵酸铵50mg，用水稀释使成，用水稀释使成35m1后，后，加加30%硫氰酸铵溶液硫氰酸铵溶液3ml，再加水适，再加水适量稀释成量稀释成50ml，摇匀）比较，即得，摇匀）比较，即得 3. 测定条件 （1）用FeNH4(S

13、O4)212H2O（硫酸铁铵）配制标准铁贮备液（加入硫酸防止Fe3+的水解），标准铁溶液临用前稀释而成，标准铁溶液10g Fe3+/ml，50ml溶液中含1050g的Fe3+显色梯度明显，一般取标准铁溶液1.05.0ml （2）反应需在盐酸酸性条件下进行，且以50ml供试溶液中含稀盐酸4ml为宜。 （3）试剂：硫氰酸铵。加过量硫氰酸铵，使反应向正反应方向进行 （4）检查Fe2+和Fe3+ （5）铁盐检查时，加氧化剂氧化）铁盐检查时，加氧化剂氧化Fe2+为为Fe3+。加过硫酸铵可氧化。加过硫酸铵可氧化Fe2+为为Fe3+，同时可防止光线使硫氰酸铁还，同时可防止光线使硫氰酸铁还原或分解褪色。原或分

14、解褪色。 加硝酸后加热也可氧化加硝酸后加热也可氧化Fe2+为为Fe3+ （6）比色方法：同置于白色背景上，自上向下观察。 4. 干扰及排除干扰及排除 （1）为了提高灵敏度或供试管与对照管色调不一致时，可用正丁醇提取后，分取正丁醇层比色。 （2）具环状结构的有机药物，需经700800炽灼破坏处理后再依法检查。 （3）干扰离子的影响（二）巯基醋酸法 BP（1998） 对照法本法灵敏度较高，但试剂较贵 红色药物：巯基醋酸巯基醋酸枸橼酸OHNH22%20FeFe2332Feml红色对照：巯基醋酸巯基醋酸枸橼酸OHNH22%20323FeFeml例1. 中国药典（2005年版）规定铁盐的检查方法为（A）

15、A. 硫氰酸盐法B. 巯基醋酸法C. 普鲁士蓝法D 邻二氮菲法E. 水杨酸显色法例2. 中国药典（2005年版）规定，硫氰酸铵法检查铁盐时，加入过硫酸按的目的是（AB） A. 使药物中铁盐都转变为Fe3+ B. 防止光线使硫氰酸铁还原或分解褪色 C. 使产生的红色产物颜色更深 D防止干扰 E便于观察、比较 五、重金属检查法五、重金属检查法 以铅为代表以铅为代表中国药典（2005年版）共收载四法。 （一）第一法 硫代乙酰胺法1. 原理 对照法 SHCONHCHOHCSNHCH223pH3.5223 黄色棕黑色药物：PbSSHPbpH3.522 黄色棕黑色、对照：PbSSHPbNOpH3.523

16、Vc 适用于溶于水、稀酸和乙醇的药物。 2. 测定条件 （1）用硝酸铅配制标准铅贮备液（加硝酸防止Pb2+水解），标准铅溶液临用前稀释而成，标准硝酸铅溶液10g Pb2+/ml，适宜比色范围为27ml溶液中含1020g的Pb2+。 （2）本法用2ml pH3.5的醋酸盐缓冲液控制溶液pH值为33.5。 （3）显色剂：从ChP（1990）开始改用硫代乙酰胺做显色剂 （1）供试品如有色，需经处理后方可检查。 A. 外消色法：在对照管中加稀焦糖溶液或其他无干扰的有色溶液。 B. 内消色法 C. 改用第四法，微孔滤膜过滤法3. 干扰及排除 （2）若供试品中有微量Fe3+存在，会氧化硫化氢生成单质硫，干

17、扰比色，加入抗坏血酸或盐酸羟胺（0.51.0g）还原Fe3+为Fe2+，可消除干扰（3）若供试品为铁盐，Fe3+在盐酸中生成HFeCl ，用乙醚提取除去，剩余微量铁在氨碱性溶液中，加KCN掩蔽，然后用第三法检查 26（4）若药物本身能生成不溶性硫化物时，可加入掩蔽剂消除干扰。如ZnSO4中重金属的检查，要在碱性下加KCN掩蔽Zn2+后，依第三法检查 （二）第二法 炽灼残渣法 适用于含芳环、杂环以及不溶于水、稀酸、乙醇及碱的有机药物。 500600炽灼后的残渣，经处理后，依一法检查。 1. 原理 对照法依一法检查氯化物残渣置坩埚中样品：缓冲液左右调节至、炽灼残渣 mlS0 . 25 . 3pHp

18、H7.0OHNHOHHClHNO6005002323依一法检查对照：空坩埚缓冲液溶液）（标准、 ml0 . 25 . 3pHNOPbOHOHNHHClHNOSOH232233422. 操作方法 含钠及氟的有机药物应用铂坩埚、石英坩埚或硬质玻璃蒸发皿（因可腐蚀瓷坩埚，带入大量重金属） （三）第三法 硫化钠法 适用于溶于碱而不溶于稀酸或在稀酸中生成沉淀的药物。如磺胺类、巴比妥类。 1. 原理 对照法 黄色棕黑色药物：PbSSNaPbNaOH22 黄色棕黑色、对照：PbSSNaPbNONaOH23 Vc2. 测定条件 （1）NaOH碱性条件下（2）显色剂：硫化钠 （四）第四法 微孔滤膜法 适用于含2

19、5g重金属杂质及有色供试液的检查。 依一法检查，结果微孔滤膜过滤后比较色斑。 97：78重金属检查中，加入硫代乙酰胺时溶液控制最佳的pH值是（B）A. 1.5 B. 3.5 C7.5D. 9.5 E. 11.5例例1. 中国药典(2005年版)重金属检查法中，所使用的显色剂是（BC） A. 硫化氢试液 B. 硫代乙酰胺试液 C. 硫化钠试液 D. 氰化钾试液 E. 硫氰酸铵试液六、砷盐检查法六、砷盐检查法 （一）古蔡法 遇HgBr2试纸生成黄色棕色的砷斑，与2ml标准砷溶液在相同条件下生成的砷斑比较1. 原理 对照法 3332AsHAsOHHClZn2. 操作方法（1）标准砷斑用2ml标准砷溶

20、液制备（2）供试品需经有机破坏，则标准砷）供试品需经有机破坏，则标准砷溶液应平行操作溶液应平行操作3. 测定条件 （1）标准砷溶液临用新配，1gAs/ml。 （2）酸为反应物，酸量应足够，所以加浓盐酸5ml。 （3）酸性氯化亚锡及碘化钾的作用是：A. 还原As5+为As3+，加快反应速度； B. 碘化钾被氧化生成的I2又可被氯化亚锡还原为I-，I-与反应中生成的Zn2+能形成稳定的配位离子，有利于生成砷化氢的反应不断进行； C. 氯化亚锡与锌作用，在锌表面形成锌锡齐，使氢气均匀而连续地发生； D. 可抑制微量Sb的干扰，在实验条件下，100 gSb存在不干扰。 （4）醋酸铅棉花的作用是消除锌粒

21、及供试品中少量硫化物的干扰，醋酸铅棉花60mg装管高度6080mm。 （5）锌粒应无砷）锌粒应无砷（6）砷斑不稳定，应立即观察）砷斑不稳定，应立即观察4. 干扰及排除干扰及排除（1）供试品若为硫化物、亚硫酸盐、）供试品若为硫化物、亚硫酸盐、硫代硫酸盐时，加硫代硫酸盐时，加HNO3，使氧，使氧化成硫酸盐，以除去干扰，如硫代硫化成硫酸盐，以除去干扰，如硫代硫酸钠中砷盐的检查。酸钠中砷盐的检查。 （2）供试品若为铁盐，需先加酸性氯）供试品若为铁盐，需先加酸性氯化亚锡试液，将化亚锡试液，将Fe3+还原为还原为Fe2+。如枸。如枸橼酸铁铵中砷盐的检查。橼酸铁铵中砷盐的检查。（3）具环状结构的有机药物，要

22、先行）具环状结构的有机药物，要先行有机破坏后再进行检查。有机破坏后再进行检查。 常用的有机破坏方法：常用的有机破坏方法：（4）本法适用于不含Sb或含Sb量小于100g的供试品。 碱破坏法：石灰法、无水碳酸钠碱碱破坏法：石灰法、无水碳酸钠碱融法融法 酸破坏法：如葡萄糖中砷盐的检查酸破坏法：如葡萄糖中砷盐的检查（二）Ag-DDC法 检查、含量测定 3332AsHAsOHHClZn3HDDC6Ag(DDCAs 6Ag(DDC)AsH33红色） 对照法对照法 砷化氢与Ag-DDC溶液作用，还原AgDDC为红色胶态银，直接比色或于510nm波长处测定吸收度，进行比较。 用有机碱吸收反应产生的HDDC有利

23、于反应的进行。USP（24）用吡啶，ChP（2000）用三乙胺。 本法适用于含Sb量小于500g的供试品。（三）白田道夫法 含Sb药物中砷盐的检查 如葡萄糖酸锑钠（棕褐色的胶态砷）、AsSnClAsAsHCl253原理 对照法（四）次磷酸法 BP（1998）97：79. 在用古蔡法检查砷盐时，导气管中塞入醋酸铅棉花的目的是（C）A. 除去I2 B. 除去AsH3C. 除去H2S D. 除去HBrE. 除去SbH395：140. 古蔡氏法中，SnC12的作用有（ACD）A. 使As5+As3+ B. 除去H2SC. 除去I2 D. 组成锌锡齐E. 除去其它杂质 例11. 古蔡氏法检查所用的溶液是

24、(B)A. 强碱性溶液B. 强酸性溶液C. 含稀盐酸10ml/50ml溶液D. 含稀硝酸10ml/50ml溶液E. 含强氧化剂(硝酸或过硫酸铵)溶液 检查不含金属的有机药物或挥发性无机药物中混入的无机杂质(金属氧化物或无机盐类)。 1. 原理 样品炭化后+ H2SO4湿润700800炽灼至恒重炽灼残渣（硫酸灰分） 限量一般为0.1%0.2% 七、炽灼残渣检查法七、炽灼残渣检查法2. 操作方法残渣（恒重）蒸气除尽至放冷至全部黑色、无烟雾，炽灼至恒重的坩埚样品高温灼烧湿润，直火加热直火缓缓加热8007004215 . 0SOHSOH42ml%100%供试品重空坩埚重残渣及坩埚重炽灼残渣 3. 注意

25、事项 （1）供试品的取样量应根据炽灼残渣限量和称量误差决定。 （3）若残渣需留作重金属检查，则500600炽灼至恒重。 （2）含氟的药物对瓷坩埚有腐蚀，应采用铂坩埚。（4）加硫酸处理是使杂质转化为稳定的硫酸盐，并帮助有机物炭化例2. 炽灼残渣检查后，将残渣留作重金属检查时，炽灼温度应为（A）A. 500600B. 600700C. 700800D. 8001000E. 10001200八、溶液颜色检查法八、溶液颜色检查法 控制药物中有色杂质限量的方法。 ChP(2005)采用三种方法检查。 第一法第一法 目视比色法目视比色法 即与标准比色液即与标准比色液比较的方法，全波长范围定性观察比较的方法

26、，全波长范围定性观察观察方法观察方法 颜色较深时平视颜色较浅时从上向下 标准比色液的配制标准比色液的配制 个色号标准比色液种色调种色调标准贮备液溶液、不同量水稀释不同比例5055CuSOCoClOCrK42722第二法 分光光度法 单一波长定量第三法 色差计法 全波长范围定量 本法是通过色差计直接测定溶液的透视三刺激值，对其颜色进行定量表述和分析的方法。 测色仪器一般为光电积分型色差计 九、易炭化物检查法九、易炭化物检查法 检查药物中遇H2SO4易炭化或易被氧化呈色的微量有机杂质。 方法：H2SO4炭化后与对照液比较。 对照液对照液：（1）“溶液颜色检查”项下的标准比色液；（2）由比色用氯化钴

27、液，比色用重铬酸钾液，比色用硫酸铜液按规定方法配成的对照液；比色比色：同置白色背景前，平视观察比较。 （3）高锰酸钾液十、澄清度检查法十、澄清度检查法 检查药物中的微量不溶性杂质，用作注射剂的原料药一般应作此项检查。 1. 检查方法 对照法 比较供试品溶液供试品规定级号的浊度标准液 2. 浊度标准液的配制 中国药典规定用浊度标准液作为澄清度检查的标准。 反应原理：乌洛托品在偏酸性条件下水解产生甲醛，甲醛与肼缩合生成甲醛腙，不溶于水，形成白色浑浊。1.00硫酸肼溶液与10乌洛托品溶液等量混合配制浊度标准贮备液 浊度标准原液 浊度标准液（5个级号）稀释稀释3. 判断 药典中规定的“澄清”，系指供试

28、品溶液的澄清度相同于所用溶剂，或未超过0.5号浊度标准液。4. 溶剂：水、酸、碱、有机溶剂有机酸的碱金属盐类药物强调用“新沸过的冷水”十一、干燥失重测定法 干燥失重是指药物在规定条件下经干燥后所减失的重量，主要是水分，也包括其它挥发性物质。测定方法： （一）常压恒温干燥法（一）常压恒温干燥法 适用于受热较稳定的药物。干燥温度一般为105。 干燥失重：第二次及以后各次称重均应在规定条件下继续干燥1h后进行。 炽灼残渣：第二次及以后各次称重均应在规定条件下继续炽灼.5h后进行。 （二）干燥剂干燥法适用于受热易分解或挥发的供试品。干燥剂：硅胶、浓硫酸、P2O5 。（三）减压干燥法 适用于熔点低，受热

29、不稳定或水分难赶除的药物。 除另有规定外，压力应在2.67kPa（20mmHg）以下。例15 A干燥失重测定法 B炽灼残渣检查 C两者皆是 D两者皆不是1. 有机物杂质检测法（D）2. 不溶物的测定法（D）3. 杂质检查法（C）4. 有机药物中不挥发无机物的检测法(B)5. 药物中挥发性物质的检测法（A）例6. 干燥失重测定的方法有（BCDE）A炽灼（500600）法B常压恒温干澡法C减压干燥法D干燥剂干燥法E减压干燥剂干燥法例7. 干燥失重测定中应注意哪几个方面（ABCD） A. 供试品平铺在称量瓶中的厚度一般不超过5mm B. 干燥温度一般为105 C. 可用干燥剂干燥 D. 主要指水分和挥发性物质 E. 测定时间不超过3小时（四）热分析法（四）热分析法 热分析法是在程序控制温度下，热分析法是在程序控制温度下，精确记录待测物质理化性质与温度的精确记录待测物质理化性质与温度的关系，研究其受热过程所发生的晶型关系，研究其受热过程所发生的晶型转变、熔融、升华、吸附等物理变化转变、熔融、升华、吸附等物理变化和脱水、热分解、氧化还原等化学变和脱水、热分解、氧化还原等化学变化，对物质进行物理常数（如熔点和化，对物质进行物理常数（如熔点和沸点）的确定、鉴别和纯度检查的方沸点）的确定、鉴别和纯度检查的方法。法。 亦可