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文档简介

1、大连理工大学 环境与生命学院实验六实验六 聚合酶链式反响聚合酶链式反响指点教师：苏指点教师：苏 乔乔 副教授副教授 ：84706356-60684706356-606大连理工大学 环境与生命学院概概 述述1、常用、常用PCR反响条件反响条件94 5min 94 30s 72 7min 4 55 45s 35cycle 72 1min 退火温度根据扩增特异性调整退火温度根据扩增特异性调整延伸时间根据扩增片段长度调整延伸时间根据扩增片段长度调整大连理工大学 环境与生命学院2、防止污染，设置严厉的对照体系，、防止污染，设置严厉的对照体系， 包括：阳性对照包括：阳性对照 空白对照空白对照 阴性对照阴性

2、对照大连理工大学 环境与生命学院 植物基因组中植物基因组中actin基因片段的电泳图基因片段的电泳图1-3：小麦；：小麦；4-6：烟草；：烟草；7-9：玉米；：玉米；10-12：大豆：大豆 M：DL2000 E：空白对照：空白对照大连理工大学 环境与生命学院3、假设、假设PCR扩增出现非特异条带，处理方扩增出现非特异条带，处理方 案包括：案包括： a.提高退火温度提高退火温度 b.Hot-start PCR c.Touch-down PCR d.重新设计引物重新设计引物大连理工大学 环境与生命学院技术要点及本卷须知技术要点及本卷须知1、同时进展多个、同时进展多个PCR反响，仅反响，仅DNA样品样品 不同，可配置反响混合液后分装不同，可配置反响混合液后分装2、常用模板量：、常用模板量： 质粒质粒DNA 植物植物DNA 可设计梯度实验进展优化可设计梯度实验进展优化大连理工大学 环境与生命学院思思 考考 题题1 1、如何确定、如何确定PCRPCR反响体系正常且无污染？反响体系正常且无污染？2 2、假设、假设PCRPCR扩增中出现非特异条带，其能够的缘由扩增中出现非特异条带，其能够的

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