摄生肝泰胶囊对肝损伤动物治疗作用的实验研究

1、摄生肝泰胶囊对肝损伤动物治疗作用的实验研究郭建生吴勇军王小娟喻嵘李雯 摘要：中、大剂量摄生肝泰胶囊能显著地抑制四氯化碳(CC4)和 D-胺基半乳糖(D-Gla)所致急性肝损伤小鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)的升高及总蛋白(TP)和白蛋白(ALB)的下降，减轻肝组织的病理损害程度。各剂量摄生肝泰胶囊均能抑制 CCl4 所致慢性肝损伤大鼠血清中 ALT 和 AST 的升高，抑制 TP 和 ALB 的下降及肝组织病理损害程度，且能降低肝组织中羟脯氨酸 (HYP) 的含量。对免疫功能低下小鼠非特异免疫功能和肝损伤小鼠体液免疫功能有增强作用。增加正常大鼠的胆汁排泄量和胆汁中胆红素的含

2、量。 主题词：摄生肝泰胶囊/药理学；中毒性肝炎/化学诱导；中毒性肝炎/中药疗法 分类号：R258.5 文献标识码：A 摄生肝泰胶囊是湖南省名老中医李沛然先生在临床上治疗急、慢性肝炎的经验方，由黄芪、桑椹、虎杖、贯众等 12 味中药组成， 具有益气扶正、清热解毒的功效。现将其药效作用报告如下。 1实验材料 1.1动物NIH 小白鼠，SD 大白鼠，均购于湖南省医药工业研究所实验动物中心。 1.2药物摄生肝泰胶囊，每 g 含生药量 6.7 g，湖南省摄生泰实业有限总公司，批号 940107，临用前用蒸馏水配成相应浓度的混悬液；齐墩果酸片，湖南医药工业研究所制药厂，批号 920408；舒胆通片，湖南省

3、株洲湘江制药厂，批号 940602。 1.3试剂谷丙转氨酶(ALT，赖氏法)、谷草转氨酶(AST，赖氏法)、总蛋白(TP，双缩脲法)、白蛋白(ALB，溴甲酚绿法)测定试剂盒，北京化工厂临床试剂分厂，批号分别为 940714、940628、940714、940714；总胆红素测定试剂盒(咖啡因比色法)，上海捷门生物技术公司，批号 940501；L-羟脯氨酸，生化试剂，中国科学院上海生物化学研究所，批号 920103-2。 2方法与结果 2.1保肝降酶试验1 2.1.1对 CCl4 致急性肝损伤小鼠的保护作用 取 NIH 小白鼠 72 只，雌雄各半，体重 20.93.3 g。随机分正常对照、模型对

4、照(ip 蒸馏水，20 mL/kg)，摄生肝泰胶囊小、中、大剂量(4，12，36 g/kg)(生药量，下同)及齐墩果酸(20 mg/kg)共 6 组，分别 ig 给药 1 次/d，连续 7 d。末次给药 1 h 后，除正常对照组外，各 ip 1%CCl4 豆油溶液 10 mL/kg。20 h 后，摘除眼球取血，按法测 ALT、TP、 ALB 的含量。 结果：4 g/kg 摄生肝素胶囊能抑制 TP 和 ALB 含量下降，12、36 g/kg 摄生肝泰胶囊均能抑制血清 ALT 升高和 TP、ALB 下降(表 1)。 表1摄生肝泰对 CCl4 致急性肝损伤小鼠血清转氨酶及蛋白的影响(s) 组别 剂量

5、 /(g。kg-1) ALT /(IU。L-1) TP/ (g。L-1) ALB /(g。L-1) 正常对照 - 18.38.7* 130.810.3* 38.04.4* 模型对照 - 99.318.4 40.34.7 20.02.8 摄生肝泰 4 88.820.1* 53.512.4* 26.66.4* 摄生肝泰 12 58.411.3* 87.222.0* 31.46.8* 摄生肝泰 36 50.67.0* 103.717.8* 33.35.4* 齐墩果酸 0.02 51.710.3* 99.820.1* 33.94.8* 注：与模型对照组比较，*P0.01；n=12。 2.1.2对 D-

6、Gla 致急性肝损伤小鼠的保护作用 动物分组、给药方法及时间同 2.1.1。末次给药 1 h 后，除正常对照组外，各 ip D-Gla 650 mg/kg，20 h 后，摘除眼球取血，依法测 AST、ALT、TP、ALB 含量。另取肝脏作病理组织切片，按下述方法分级评分：+，有病变的肝细胞小于肝小叶的 1/3，记 1 分；+，有病变的肝细胞占肝小叶的 1/3-2/3，记 2 分；+，有病变的肝细胞占肝小叶的 2/3 以上，记 3 分。 结果：4 g/kg 摄生肝泰胶囊能抑制 AST 的升高和 TP 的下降；12、36 g/kg 摄生肝泰能抑制 ALT、AST 的升高 和 TP、ALB 的下降(

7、表 2)。组织切片结果显示 12、36 g/kg 摄生肝泰能降低病变程度积分(P0.050.01)。 2.1.3对 CCl4致慢性肝损伤大鼠的保护作用 取 SD 大鼠 60 只，雄性，体重 82.811.6g 。分组方法同 2.1.1。分别 ig 蒸馏水，摄生肝素胶囊 3、6、12 g/kg，齐墩果酸 20 mg/kg，1 次/d，连续 6 周。除正常对照组外，每周 2 次各皮下注射 40% CCl4 豆油溶液 3 mL/kg(第一次 5 mL/kg)，末次给药 1 h 后处死动物，取血测血清 ALT、AST、TP、ALB 含量。取右叶肝脏作病理组织切片(按 2.1.2 方法分级评分)，余下组

8、织测羟脯氨酸(HYP)含量2。 结果：各剂量摄生肝泰胶囊均能抑制肝组织 HYP 和血清 ALT、AST 的升高及 TP、TLB 的下降(表 3)，其中 12 g/kg 剂量组能抑制肝组织的病变程度(P0.01)。 2.2免疫功能试验1 2.2.1对免疫功能低下小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响 小鼠分组、给药方法及时间同 2.1.1 试验。除正常对照组外，分别于第 1、3、5、7 天各 im 氢化可的松 0.5mg/只。 4h 后处死小鼠，测定腹腔巨噬细胞吞噬百分率和吞噬指数。 表2摄生肝泰对 D-Gla 致急性肝损伤小鼠血清转氨酶及蛋白的影响(s) 组别 剂量/(g。kg-1) ALT/(IU。

9、L-1) AST/(IU。L-1) TP/(g。L-1) ALB/(g。L-1) 正常对照 - 15.99.7* 11.06.1* 126.617.4* 38.88.4* 模型对照 - 115.346.9 54.77.1 35.55.2 19.24.7 摄生肝泰 4 89.734.9* 25.86.1* 58.35.1* 21.53.2* 摄生肝泰 12 68.335.1* 18.17.3* 71.811.9* 29.47.2* 摄生肝泰 36 44.823.2* 12.17.1* 104.825.1* 31.35.8* 齐墩果酸 0.02 47.923.2 18.47.5* 87.621.0

10、* 30.24.7* 注：与模型对照组比较，*P0.05，*P0.01；n=12。 表3摄生肝泰对慢性肝损伤大鼠血清转氨酶、蛋白及肝组织 HYP 的影响(s) 组别 剂量/(g。kg-1) ALT/(IU。L-1) AST/(IU*L-1) TP/(g。L-1) ALB/(g。L-1) HYP/mg。(g肝组织)-1 正常对照 - 1.7111.0* 12.95.7* 86.67.5* 40.43.1* 4.430.41* 模型对照 - 120.721.5 69.810.5 54.35.5 28.61.0 21.011.02 摄生肝泰 3 78.839.8 47.330.1* 64.49.7*

11、 31.52.7* 19.441.52* 摄生肝泰 6 19.38.9* 32.27.9* 76.76.2* 38.13.4* 16.981.62* 摄生肝泰 12 18.99.3* 31.06.4* 78.05.5* 39.32.3* 17.111.20* 齐墩果酸 0.02 18.65.6* 36.06.2* 72.43.9* 37.92.2* 17.531.80* 注：与模型对照组比较，*P0.05，*P0.01；n=10。 结果，各剂量摄生肝泰胶囊均能显著地提高免疫功能低下小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数(表 4)。 表4摄生肝泰对免疫功能低下小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响(s) 组

12、别 剂量/(g。kg-1) 吞噬百分率 吞噬指数 正常对照 - 54.93.7* 0.710.08* 模型对照 - 33.65.0 0.500.09 摄生肝泰 4 43.05.2* 0.670.12* 摄生肝泰 12 63.54.0* 0.970.14* 摄生肝泰 36 78.75.3* 1.330.20* 齐墩果酸 0.02 67.84.9* 1.070.05* 注：与模型对照比较，*P0.01；n=10。 2.2.2对 CCl4 致肝损伤小鼠溶血素生成的影响 小鼠分组，给药方法同 2.1.1，连续给药 12 d。除正常对照组外，分别于第 1、4、7、11 天各 ig 0.2% CCl4 豆

13、油溶液 10 mL/kg ，第 5 天给药 1 h 后，各组动物 ip 5% 鸡红细胞混悬液 0.2mL/只。末次给药 1 h 后，摘除眼球取血，测定血清 ALT 和溶血素。 结果，各剂量摄生肝泰溶血素吸光值均较模型对照组高，具有显著性差异(表 5)。 表5摄生肝泰对 CCl4 致肝损伤小鼠转氨酶及溶血素的影响(s) 组别 剂量/(g。kg-1) ALT/(IU。L-1) 溶血素吸光值/OD 正常对照 - 13.23.3* 0.4540.057* 模型对照 - 92.833.7 0.0900.037 摄生肝泰 4 88.735.1 0.1540.062* 摄生肝泰 12 43.818.9* 0

14、.2940.099* 摄生肝泰 36 37.518.4* 0.3680.035* 齐墩果酸 0.02 33.611.9* 0.3880.076* 注：与模型对照组比较，*P0.05，*P0.01；n=12。 2.3对正常大鼠的利胆试验 取 SD 大鼠 60 只，雄性，体重 371.353.2g。按体重分层，随机分为正常对照，摄生肝泰胶囊小、中、大剂量，舒胆通等 5 组。实验前禁食 16 h。麻醉，固定，胆道插管引流胆汁。稳定后测取 30 min 胆汁流量。分别从十二指肠给予蒸馏水，摄生肝泰胶囊 3、6、12 g/kg，舒胆通 10 mg/kg。测取给药后 30、60、90、120 min 的胆

15、汁流量，每次接取 30 min。并测定各次胆汁中胆红素含量。 结果：6、12 g/kg 摄生肝泰在 30、60 min 时能显著地增加正常大鼠的胆汁流量(P0.05)及胆汁中胆红素的含量(P0.01)。 3讨论 3.1保肝降酶作用 CCl4 进入肝细胞后，使线粒体膜的脂质溶解，从而影响线粒体结构和功能，使酶蛋白质合成减少，造成酶的破坏，因而影响代谢功能和能量的生成，致使肝细胞变性、坏死。D-Gla 是肝细胞的磷酸尿嘧啶核苷的干扰剂，可造成肝弥漫性坏死和炎症，与临床病毒性肝炎的肝脏病理变化相似1。实验结果表明，摄生肝泰胶囊能抑制 CCl4 与 D-Gla 所致动物肝损伤后血清中的 ALT 与 AST 的升高，肝组织学检查其肝细胞的损伤程度明显低于对照组，肝组织中的 HYP 含量亦明显低于对照组。提示该品具有保肝降酶和预防肝纤维化的作用，其作用可能与对抗损伤肝脏的化学物质或促使肝细胞恢复、再生有关。 3.2对机体免疫功能的影响 肝脏为人体内的一个免疫器官，当肝脏受损时，其人体的免疫功能亦随之下降。实验用氢化可的松复制免疫功能低下模型，或在化学法致动物肝损伤的条件下，检测动物巨噬细胞的吞噬功能或溶血素光密度值。结果提示摄生肝泰胶囊能增强免疫功能低下动物的非特异性免疫功能和体液免