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文档简介

1、会计学1水解探针的MIXSYBR染料的MIX第1页/共24页结合于双链核酸的小沟处与双链DNA结合后受激产生荧光在变性条件下双链分开，荧光消失背景强，非特异性较强第2页/共24页第3页/共24页水解探针-Roche cobas与ABI Taqman第4页/共24页第5页/共24页 AnnealingElongationEnd of ElongationDenaturationFluoresceinLC Redfor sequence specific detection of DNA杂交探针检测罗氏专利性技术杂交探针检测罗氏专利性技术第6页/共24页第7页/共24页荧光染料的光学性质第8页/共

2、24页ABI 7500 Real-Time PCR Systems 光学原件第9页/共24页第10页/共24页u 标准曲线法 u 2 -Ct法 相对定量 第11页/共24页 LogX0与循环数呈线性关系，通过已知起始拷贝数已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线，根据未知样品Ct值，就可以在标准曲线上计算出未知样品初始模板量。第12页/共24页优点：优点： 无需作标准曲线无需作标准曲线 实用实用 适合于配对样本的相对定量分析适合于配对样本的相对定量分析2 -Ct法校正值 =2 病人目的基因平均Ct值病人内参基因平均Ct值正常人目的基因平均Ct值正常人内参基因平均Ct值第13页/共24页第14页/共

3、24页第15页/共24页ABL扩增曲线Rn第16页/共24页BCR/ABL1-P210扩增曲线Rn第17页/共24页报告举例第18页/共24页序号序号缓解分类缓解分类缓解指标缓解指标备注备注1完全血液学缓解（CHR）血细胞计数正常，白细胞分类计数正常，无髓外白血病表现 2主要细胞遗传学缓解（MCyR）Ph 阳性细胞=(135)%分子学研究已证实不论变异、复杂或遮蔽的Ph易位，CML患者都具有和典型Ph易位相同的分子病理学基础即bcr/abl基因重排,3完全细胞遗传学缓解（CCyR）Ph 阳性细胞=0（费城染色体传阴）4主要分子学反应（MMoR） Bcr-abl转录水平下降3个对数级以上;或BC

4、R-ABL/ABL 0.1%慢性髓系白血病(CML)是一种血液系统的恶性肿瘤，以染色体异常t(9;22)(q34;q11)为特征，通过这种染色体易位激活了一种新的酪氨酸激酶BCR-ABL嵌合蛋白，此蛋白的产生成为此病发病的原因5完全分子学反应（CMoR） Bcr-abl转录水平下降4个对数级以上， RT-PCR检测BCR-ABL 为阴性CML缓解指标第19页/共24页28mon;23% of Ph+ metaphases35mon,CCyR41mon,MMoR细胞遗传+FG分子检测监测CML治疗-举例32mon;23% of Ph+ metaphases第20页/共24页第21页/共24页Pfaffl equation:if Eref=a, Etar=b,

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