实验一 显微镜构造 临时玻片的制作

1、植物学实验植物学实验的有关注意事项 座位及显微镜使用安排座位及显微镜使用安排 课程的学时安排课程的学时安排 考核、考察要求考核、考察要求 实验报告的上交要求实验报告的上交要求 值日安排值日安排 发放实验用工具盒（登记编号）发放实验用工具盒（登记编号） 镊子（镊子（1 1） 解剖针（解剖针（2 2） 双面刀片（双面刀片（1 1） 放大镜（放大镜（1 1） 小手巾（小手巾（1 1） 载玻片（载玻片（4 4） 盖玻片（盖玻片（4 4）注意：注意： 1、每位同学领取、每位同学领取一套工具盒。一套工具盒。 2、请妥善保管，、请妥善保管，并于本课程结束时交并于本课程结束时交还给植物学教研室。还给植物学教研

2、室。 3、如有损坏，原、如有损坏，原价赔偿价赔偿实验内容实验内容 （一）（一）显微镜的构造与使用方法显微镜的构造与使用方法 （二）（二）显微镜临时玻片的制作显微镜临时玻片的制作 （三）（三）植物细胞的绘图法植物细胞的绘图法一、实验目的要求一、实验目的要求1.1. 掌握显微镜的构造及原理，熟练使用光学显微镜。掌握显微镜的构造及原理，熟练使用光学显微镜。2.2. 了解显微镜使用的基本要求、注意事项及一般维了解显微镜使用的基本要求、注意事项及一般维 护方法。护方法。3.3. 学习临时玻片制作及掌握生物绘图学习临时玻片制作及掌握生物绘图的基本要求及的基本要求及方法。方法。（一）显微镜的构造和使用方法（

3、一）显微镜的构造和使用方法 分辨率分辨率： 能分辨清楚的物体的最小的两点中心的距能分辨清楚的物体的最小的两点中心的距离，称为分辨率。离，称为分辨率。 人肉眼的分辨率最高可达：0.10.2mm 光学显微镜的分辨率最高可达：0.2m 电子显微镜的分辨率最高可达：0.2nm 1mm=1000 m=1000 000nm 显微镜放大倍数显微镜放大倍数物镜放大倍数物镜放大倍数 x 目镜放大倍数目镜放大倍数 光镜的有效放大倍数可达1250倍透射电子显微透射电子显微镜镜 用途：用途： 观察细胞内部的观察细胞内部的超微结超微结构构 放大倍数：放大倍数：300万倍万倍 分辨率：分辨率：约为约为0.3纳纳米米 透射

4、电子显微镜透射电子显微镜-观察植物细胞的超微结构电镜下的线粒体电镜下的线粒体扫描电子显微镜扫描电子显微镜 用途：用途： 观察器官、组织观察器官、组织表面的表面的形态和结形态和结构构 放大倍数放大倍数 分辨率分辨率用用扫描电镜扫描电镜与与光镜光镜观察比较植物叶表面的形态观察比较植物叶表面的形态扫描电镜下的形态扫描电镜下的形态光学显微镜下的形态光学显微镜下的形态1、光学显微镜的构造、光学显微镜的构造 光学系统光学系统 物镜物镜 目镜目镜 聚光器聚光器 虹彩光圈虹彩光圈 光源（或光源（或反光镜）反光镜） 机械装置机械装置 镜座镜座 镜柱镜柱 镜臂镜臂 载物台载物台 镜筒镜筒 物镜转换器物镜转换器 调

5、焦装置调焦装置 粗调焦螺旋粗调焦螺旋 微焦调螺旋微焦调螺旋一、光学显微镜的构造一、光学显微镜的构造 （一）机械部分（一）机械部分: 1、镜筒、镜筒:镜筒的作用是保护成像配合保持一定的距离，一镜筒的作用是保护成像配合保持一定的距离，一般般 160mm。 2、物镜转换器：安装低倍和高倍物镜、物镜转换器：安装低倍和高倍物镜 3、 粗调焦螺旋：位于镜柱两侧的一对大螺旋，用于调节粗调焦螺旋：位于镜柱两侧的一对大螺旋，用于调节焦距，旋转一周可使载物台上升或下降焦距，旋转一周可使载物台上升或下降 10 mm 4、细调焦螺旋：与粗调焦螺旋同轴的一对小螺旋，旋转、细调焦螺旋：与粗调焦螺旋同轴的一对小螺旋，旋转一

6、周可使载物台上升或下降一周可使载物台上升或下降0.1mm 5、镜座：方形金属座，用以稳固和支持镜身。、镜座：方形金属座，用以稳固和支持镜身。 6、镜座：方形金属座，用以稳固和支持镜身。、镜座：方形金属座，用以稳固和支持镜身。 7、镜臂：亦称执手，连接镜筒与镜柱，是用于执镜的部、镜臂：亦称执手，连接镜筒与镜柱，是用于执镜的部位。位。 8、载物台：放置玻片的平台，中央有一通光孔、有固定、载物台：放置玻片的平台，中央有一通光孔、有固定制片的压片夹和推进器制片的压片夹和推进器一、光学显微镜的构造一、光学显微镜的构造 （二）光学部分：二）光学部分： 由成像系统和照明系统组成。成像系由成像系统和照明系统组

7、成。成像系统包括物镜和目镜，照明系统包括反光镜和聚光器统包括物镜和目镜，照明系统包括反光镜和聚光器 1、目镜：、目镜： 2、物镜：装在物镜转换器和上，短者为低倍镜（、物镜：装在物镜转换器和上，短者为低倍镜（ 4 、 10 ），长者为高倍镜（），长者为高倍镜（ 40 ），其上刻有），其上刻有N.A 0.25 0.5等，为等，为数值孔径数值孔径（光线经过盖玻片引起折射后成光锥（光线经过盖玻片引起折射后成光锥底面的口径数值，数值越大，吸收光线量越多，越清楚），底面的口径数值，数值越大，吸收光线量越多，越清楚）， 3、聚光器：、聚光器： 4、光圈：、光圈： 5、照明器或反光镜：、照明器或反光镜：镜座镜

8、座镜柱镜柱镜臂镜臂镜筒镜筒载物台载物台物镜转换器物镜转换器粗调焦螺旋粗调焦螺旋微调焦螺旋微调焦螺旋目镜目镜物镜物镜聚光器聚光器光源光源虹彩光圈虹彩光圈二、光学显微镜的使用二、光学显微镜的使用 1、低倍镜的使用方法、低倍镜的使用方法 （1）取镜和放置：）取镜和放置： （2）对光：打开电光源，用拇指和中指移动旋转器）对光：打开电光源，用拇指和中指移动旋转器(切忌手切忌手持物镜移动持物镜移动)，使低倍镜对准镜台的通光孔，使低倍镜对准镜台的通光孔 。左眼在目镜上。左眼在目镜上观察观察 (右眼睁开右眼睁开),同时调节反光镜方向，直到视野内的光线同时调节反光镜方向，直到视野内的光线均匀明亮为止。均匀明亮为

9、止。 （ 3）放置玻片标本：取一玻片标本放在镜台上，一定使有）放置玻片标本：取一玻片标本放在镜台上，一定使有盖玻片的一面朝上，将所要观察的部位调到通光孔的正中。盖玻片的一面朝上，将所要观察的部位调到通光孔的正中。 （4）调节焦距：双手转动（向后，载物台上升）调节焦距：双手转动（向后，载物台上升 ）粗调节器）粗调节器（在内，大调解螺旋），使镜台缓慢地上升至物镜距标本片（在内，大调解螺旋），使镜台缓慢地上升至物镜距标本片约约5毫米处毫米处 ，切勿在目镜上观察。一定要从右侧看着镜台上，切勿在目镜上观察。一定要从右侧看着镜台上升升 ，然后，两眼同时睁开，用左眼在目镜上观察，向前缓，然后，两眼同时睁开，

10、用左眼在目镜上观察，向前缓慢转动粗调节器，使载物台缓慢下降，直到视野中出现清晰慢转动粗调节器，使载物台缓慢下降，直到视野中出现清晰的物象为止。的物象为止。 如果物象不在视野中心可调节推片器将其调到中心如果物象不在视野中心可调节推片器将其调到中心 。 光学显微镜的使用光学显微镜的使用 高倍镜的使用方法高倍镜的使用方法 ： （1）选好目标：一定要先在低倍镜下把需进一步观察的部）选好目标：一定要先在低倍镜下把需进一步观察的部位调到中心，同时把物象调节到最清晰的程度，才能进行高位调到中心，同时把物象调节到最清晰的程度，才能进行高倍镜的观察。倍镜的观察。 （2）转动转换器，调换上高倍镜头，转换高倍镜时转

11、动速）转动转换器，调换上高倍镜头，转换高倍镜时转动速度要慢，并从侧面进行观察度要慢，并从侧面进行观察(防止高倍镜头碰撞玻片防止高倍镜头碰撞玻片)，如高，如高倍镜头碰到玻片，说明低倍镜的焦距没有调好，应重新操作。倍镜头碰到玻片，说明低倍镜的焦距没有调好，应重新操作。 （3）调节焦距：转换好高倍镜后，用左眼在目镜上观察，）调节焦距：转换好高倍镜后，用左眼在目镜上观察，此时一般能见到一个不太清楚的物象，可将细调节器（在外、此时一般能见到一个不太清楚的物象，可将细调节器（在外、小螺旋）的螺旋移动（向后）约小螺旋）的螺旋移动（向后）约0.51圈，即可获得清晰的圈，即可获得清晰的物象物象(切勿用粗调节器切

12、勿用粗调节器!) 果视野的亮度不合适，可用集光器和光圈加以调节，果视野的亮度不合适，可用集光器和光圈加以调节， 更换玻片标本或取玻片时，必须向前转动粗调节器更换玻片标本或取玻片时，必须向前转动粗调节器(切勿转切勿转错方向错方向)使载物台下降，方可取下玻片标本。使载物台下降，方可取下玻片标本。 推进器向前后左右，显推进器向前后左右，显微镜下，物象移动方微镜下，物象移动方向如何？向如何？二、光学显微镜的使用二、光学显微镜的使用拿取显微镜拿取显微镜对光对光使用低倍物镜使用低倍物镜（1）放置玻片标本；）放置玻片标本；（2）调节焦距；）调节焦距；（3）调节视野反差）调节视野反差（4）认真观察）认真观察使

13、用高倍物镜使用高倍物镜（1）选好目标；）选好目标；（2）使用微调螺旋调整焦点；）使用微调螺旋调整焦点；（3）调节光亮度和反差）调节光亮度和反差（4）认真观察）认真观察显微镜使用后显微镜使用后的整理的整理 请使用请使用台面上的台面上的玻片标本玻片标本进行练习进行练习放置显微镜放置显微镜三、三、显微镜的维护显微镜的维护 1、经常性的维护、经常性的维护 （）防潮如果室内潮湿，光学镜片就容易生霉、（）防潮如果室内潮湿，光学镜片就容易生霉、生雾。生雾。 （）防尘光学元件表面落入灰尘，不仅影响光线（）防尘光学元件表面落入灰尘，不仅影响光线通过，而且经光学系统放大后，会生成很大的污斑，通过，而且经光学系统放

14、大后，会生成很大的污斑，影响观察。影响观察。 （）防腐蚀（）防腐蚀 显微镜不能和具有腐蚀性的显微镜不能和具有腐蚀性的化学试剂化学试剂放在一起。如硫酸、盐酸、强碱等。放在一起。如硫酸、盐酸、强碱等。 （）防热（）防热 防热的目的主要是为了避免热胀冷缩引防热的目的主要是为了避免热胀冷缩引起镜片的开胶与脱落。起镜片的开胶与脱落。 三、显微镜的保护三、显微镜的保护 、光学系统的擦拭、光学系统的擦拭光学部分用用擦镜纸擦拭干净即行光学部分用用擦镜纸擦拭干净即行 。 方法：先用干净的毛笔或吹风球除去镜片表方法：先用干净的毛笔或吹风球除去镜片表面的灰尘。用擦镜纸从镜片中心开始向边缘面的灰尘。用擦镜纸从镜片中心

15、开始向边缘作螺旋形单向运动。直至擦净为止。如果镜作螺旋形单向运动。直至擦净为止。如果镜片上有油渍、污物或指印等擦不掉时，可用片上有油渍、污物或指印等擦不掉时，可用柳枝条裹上脱脂棉，蘸少量酒精和乙醚混合柳枝条裹上脱脂棉，蘸少量酒精和乙醚混合液（酒精液（酒精80，乙醚，乙醚20）擦拭。）擦拭。 3、机械部分的擦拭、机械部分的擦拭 ：可用软布擦拭。但不：可用软布擦拭。但不能使用酒精、乙醚等有机溶剂能使用酒精、乙醚等有机溶剂 二、临时玻片的制作二、临时玻片的制作 材料：材料：洋葱鳞叶的下表皮洋葱鳞叶的下表皮 方法：方法：撕片法撕片法 步骤：步骤：特别注意特别注意： 观察临时装片时一定要加观察临时装片时一定要加盖盖玻片，并将其四周溢出盖盖玻片，并将其四周溢出的水擦干。的水擦干。（三）（三）生活细胞的观察生活细胞的观察洋葱鳞叶下表皮细胞观察与思考：观察与思考：在你的制片中是否在你的制片中是否每个细胞都具有细每个细胞都具有细胞核？为什么？胞核？为什么？你如何解释不同细你如何解释不同细胞中细胞核在形态胞中细胞核在形态和位置上的差异？和位置上的差异？3 3、你能看见细胞、你能看见细胞核中的核仁吗？一核中的核仁吗？一般有几个？般有几个？细胞核细胞核细胞壁细胞壁细胞质细胞质液泡液泡（四）植物细胞与组织绘图法（四）植物细胞与组织绘图法 生物绘图的要求生物绘图的要求： 科学性、真