微生物学课件：微生物实验补充

1、Microbiology Chapter 3, part 2The best magnification on our scopes is achieved with the “oil immersion” objective. Oil is used with the lens because it has “the same refractive index as glass”. We can see objects with clarity at about 1000X magnification. Less light is refracted away from the tiny l

2、ens and objects are “clearer”. No oil = fuzzy poor quality image.第一节第一节 微生物纯培养微生物纯培养二、微生物纯培养技术二、微生物纯培养技术1、稀释平板分离法、稀释平板分离法：倾注平板法和涂布平板法。：倾注平板法和涂布平板法。 基本过程：（基本过程：（1）梯度稀释过程；（）梯度稀释过程；（2）分离培养过程）分离培养过程涂布涂布倾注倾注梯梯 度度 稀稀 释释 过过 程程10-110-210-310-410-510-63、接种 接种技术：是微生物实验和相关研究的基本技术。 无菌操作：是微生物接种技术的关键接种前的消毒接种前的消毒

3、实验室和超净工作的消毒实验室和超净工作的消毒提前提前30min开启超净工作台，打开紫外灯。开启超净工作台，打开紫外灯。 操作者衣着和手消毒操作者衣着和手消毒用肥皂将双手洗用肥皂将双手洗净，擦干，再用酒精净，擦干，再用酒精(体积分数为体积分数为70%)棉球棉球擦拭双手。当手上的酒精挥发完毕后，点擦拭双手。当手上的酒精挥发完毕后，点燃酒精灯。注意：一定要等手上的酒精挥燃酒精灯。注意：一定要等手上的酒精挥发完毕后，再点燃酒精灯，否则，容易将发完毕后，再点燃酒精灯，否则，容易将手烧伤。手烧伤。常用接种方法常用接种方法 平板划线法平板划线法 平板涂布法平板涂布法 点接法点接法 倒平板法倒平板法（1）平板

4、划线接种操作（1）平板划线接种操作（1）平板划线接种操作（2）试管接种操作）试管接种操作（2）试管接种操作）试管接种操作（2）试管接种操作）试管接种操作 对实验对实验操作的空间操作的空间操作者的操作者的衣着和手衣着和手，进，进行清洁和消毒。行清洁和消毒。 将用于微生物培养的将用于微生物培养的器皿、接种用具和培器皿、接种用具和培养基养基等进行灭菌。等进行灭菌。 为避免周围环境中的微生物的污染，实验为避免周围环境中的微生物的污染，实验操作应在操作应在酒精灯火焰附近酒精灯火焰附近进行。进行。 实验操作时应实验操作时应避免避免已经灭菌处理的材料用已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相具与周围的物品相接触

5、接触。3、无菌操作内容4、消毒和灭菌的方法及应用、消毒和灭菌的方法及应用定义定义常用方法常用方法应用应用消消毒毒使用较为温使用较为温和的物理和的物理或化学方或化学方法杀死物法杀死物体表面或体表面或内部的部内部的部分菌体分菌体, ,但不伤及但不伤及活组织活组织巴氏消毒法巴氏消毒法酒、牛奶和果汁酒、牛奶和果汁煮沸煮沸玻璃仪器玻璃仪器间歇煮沸间歇煮沸含葡萄糖、含硫培含葡萄糖、含硫培养基养基紫外线紫外线实验室、操作台、实验室、操作台、衣物衣物酒精溶液酒精溶液手、外植体和接种手、外植体和接种工具工具氯化汞溶液氯化汞溶液等等外植体外植体4、消毒和灭菌的方法及应用、消毒和灭菌的方法及应用定义定义常用方法常用

6、方法应用应用灭灭菌菌使用强烈的使用强烈的理化因素理化因素杀死物体杀死物体内外所有内外所有菌体、芽菌体、芽孢和孢子孢和孢子高压蒸汽高压蒸汽培养基、玻璃仪器、培养基、玻璃仪器、棉塞、牛皮纸等棉塞、牛皮纸等灼烧灼烧接种工具、试管口等接种工具、试管口等干热干热玻璃仪器玻璃仪器5、接种后注意事项 熄灭酒精灯。熄灭酒精灯。实验后的带菌培养基，如实验后的带菌培养基，如果用的是致病菌，必须经高压蒸汽灭菌锅果用的是致病菌，必须经高压蒸汽灭菌锅灭菌后方能倒掉；如果是非致病菌，也要灭菌后方能倒掉；如果是非致病菌，也要经加热后再倒掉。经加热后再倒掉。 贴标签。贴标签。 接种完毕，将所接菌种、接接种完毕，将所接菌种、接

7、种日期、接种者姓名填写在标签上贴在培种日期、接种者姓名填写在标签上贴在培养皿底部或者试管上。养皿底部或者试管上。 （三）培养和观察（三）培养和观察 将接种后的试管放入恒温箱内，在将接种后的试管放入恒温箱内，在25下培养下培养57d，或在，或在37下培养下培养24-48h。 高压蒸汽灭菌锅的构造高压蒸汽灭菌锅的构造操作过程操作过程 加水加水 装锅装锅 加盖加盖 排气排气 灭菌灭菌 起锅起锅操作过程操作过程分类分类定义定义方法方法灭菌法灭菌法杀灭一切微生杀灭一切微生物物物理法：热力、辐射、物理法：热力、辐射、微波、等离子体微波、等离子体化学法：醛类、烷化化学法：醛类、烷化剂剂高效消高效消毒法毒法杀

8、灭一切致病杀灭一切致病微生物微生物紫外线、含氯剂、臭紫外线、含氯剂、臭氧、复配剂等氧、复配剂等中效消中效消毒法毒法杀灭除芽孢外杀灭除芽孢外的致病微生物的致病微生物超声波、碘类、醇类、超声波、碘类、醇类、酚类酚类低效消低效消毒法毒法杀灭细菌繁殖杀灭细菌繁殖体、亲脂病毒体、亲脂病毒单链季胺盐、双胍类、单链季胺盐、双胍类、中草药、金属离子中草药、金属离子消毒的方法：消毒的方法：1 1、100100煮沸煮沸5-6min5-6min2 2、巴氏消毒法：、巴氏消毒法：70-75 70-75 下煮下煮30min30min或或 80 80 下煮下煮1515minmin3 3、用、用75%75%酒精、新洁尔灭等

9、进行皮肤消毒酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒4 4、氯气消毒水源、氯气消毒水源5 5、紫外线消毒、紫外线消毒灭菌的方法：灭菌的方法：1 1、灼烧灭菌、灼烧灭菌2 2、干热灭菌：、干热灭菌：160-170 160-170 下加热下加热1-2h。3、高压蒸气灭菌：、高压蒸气灭菌：100kPa、121 下维持下维持15-30min. 最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，它可以杀灭所最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，它可以杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体，同时可有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体，同时可以基本保持培养基的营养成分不被破坏。以基本保持培养基的营养成分不被破坏。 有些玻璃器皿也可

10、采用高温干热灭菌。为了防止杂有些玻璃器皿也可采用高温干热灭菌。为了防止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都需采菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各种金用适宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各种金属、塑料及硅胶帽，它们只可让空气通过，而空气中的属、塑料及硅胶帽，它们只可让空气通过，而空气中的其他微生物不能通过。其他微生物不能通过。 而平皿是由正反两平面板互扣而成，这种器具是专而平皿是由正反两平面板互扣而成，这种器具是专为防止空气中微生物的污染而设计的。为防止空气中微生物的污染而设计的。 1、器具的灭菌2、培养基的配制3、培养基

11、的灭菌4、倒平板5、微生物接种6、恒温箱中培养7、菌种的保存 人们按照微生物对营养物质的不同需求，人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。配制出供其生长繁殖的营养基质。 固体培养基液体培养基天然培养基合成培养基基础培养基加富培养基鉴别培养基选择培养基 牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌）牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌） 牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌）牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌）1 1称量称量2 2溶化溶化3 3调调pHpH：pH7pH76 64 4过滤：这一步可以省去。过滤：这一步可以省去。5 5分装：分装：分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。6 6加塞加塞7 7包扎包扎8 8灭菌灭菌9 9倒平板倒平板1010无菌检查：无菌检查：将灭菌的培养基放入37的温室中培养2448小时，以检查灭菌是否彻底。The Streak Plate Method 关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。地等等，都是区分细菌的重要手段。 关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。地等等，都是区分细菌的重要手段。 1、如